品红亚硫酸钠培养基.doc

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　　编号：

022150

　　中文名称：

品红亚硫酸钠培养基（远藤琼脂培养基）

　　英文名称:

EndoAgar

　　用途：

　　用于水中大肠菌群的分离或确证试验。

（GB/T8538-2008和GB5750.12—2006）。

　　原理：

乳糖发酵的细菌产生乙醛，在存在碱性品红的情况下乙醛与亚硫酸钠结合形成红色菌落，快速发酵乳糖的细菌产生金属光泽，不发酵乳糖的细菌形成无色透明的菌落。

蛋白胨、酵母膏粉、牛肉膏粉提供碳氮源、维生素和矿物质;乳糖为可发酵的糖类;琼脂是培养基的凝固剂;磷酸氢二钾为缓冲剂;亚硫酸钠能将碱性品红还原，使其褪色，发酵乳糖的细菌产生乙醛，与亚硫酸钠和碱性品红生成红色菌落。

环凯培养基图鉴：

　　配方（每升）：

　　蛋白胨10g

　　酵母膏粉5g

　　牛肉膏粉5g

　　乳糖10g

　　琼脂15g

　　磷酸氢二钾3.5g

　　无水亚硫酸钠5g

　　碱性品红1g

　　最终pH7.2±0.2

　　使用方法：

　　1、称取本品54.5g，加入蒸馏水或去离子水1L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，115℃高压灭菌20min，冷至50℃左右，倾注无菌平皿，备用。

　　2、滤膜灭菌：

将孔径为0.45μm的滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水或去离子水，置于沸水浴中煮沸灭菌三次，每次15min。

前两次煮沸后需更换水洗涤2-3次，以除去残留溶剂。

　　3、滤器灭菌：

用点燃的酒精棉球，火焰灭菌。

也可用121℃高压灭菌20min。

　　4、过滤水样：

用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤器，将100mL水样（如水样含菌较多，可减少过滤水样量，或将水样稀释）注入滤器中，打开滤器阀门，负0.5大气压下抽滤。

　　5、培养：

水样抽滤完后，再抽气约5S，关上滤器阀门，取下滤器，用灭菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在品红亚硫酸钠培养基上，滤膜截留面向上，滤膜应与培养基完全贴紧，两者间不得留有气泡，然后将平皿倒置，放入36±1℃恒温箱内培养22-24h。

　　6、观察结果：

挑出符合下列特征菌落进行革兰氏染色、镜检。

　　紫红色，具有金属光泽的菌落。

　　深红色，不带或略带金属光泽的菌落。

　　淡红色，中心色较深的菌落。

　　质量控制：

　　本培养基倾注平皿待冷却后呈浅红色。

质控菌株接种后。

36±1℃培养22—24h，观察结果如下表：

　　菌名　　　　　　菌号　　　　　生长状况　　　　菌落特征

　　大肠埃希氏菌　　ATCC25922　　　　良好　　　　红色，有金属光泽

　　鼠伤寒沙门氏菌　CMCC（B）50115　　　良好　　　　无色至淡粉红色

　　金黄色葡萄球菌　ATCC6538　　　　不长或差　　　　——

　　贮存：

贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖。

贮存期三年。

　　规格：

250g