原料药注册申报资料25号Word文件下载.docx

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CD-1R（ICR）BRVAF/Plus系小鼠，大约7周龄，雄性体重在29和36g之间，雌性体重在21到31g之间。

25-2-2试验方法：

100只（雌雄各50只）小鼠分为5组（每组雌雄各10只），每日口服帕洛诺司琼（以自由基计）0、30、60或120mg/kg，共3个月。

化合物溶于溶剂中（终pH5.0±

0.2），给药体积为5ml/kg/天。

日剂量体积根据平均体重进行调整。

剂量依据2周口服剂量范围寻找研究结果，在该研究中，30mg/kg/天未观察到临床毒性反应，但150mg/kg/天组观察到动物死亡，100mg/kg/天组临床仅表现为暂时性活动减少、呼吸困难和罗音。

在给药前、给药开始后每周和研究末各记录一次食物消耗和体重。

在给药前和研究的第12周期间各进行一次裂隙灯眼科检查。

在第85次给药后的大约30分钟采集每组雌雄各5只小鼠的血样用于估算化合物血浆浓度，在动物尸检前立即采集禁食动物的血样用于血液学分析和临床生化指标测定，在研究末收集尿样。

在研究结束时，对所有各组的每只动物进行尸检，分离组织用于组织病理学异常检查。

分离肾上腺、脑、眼、坐骨神经、脊髓、心、肝、胰腺、脑下垂体、唾液腺、胃、性器官附件、脾、睾丸、胸腺、甲状腺/甲状副腺、子宫、膀胱、肺、股骨、胸骨、脊椎、膝关节、骨骼肌、淋巴结、胸腺腺体、乳腺、卵巢、阴道、肾和其它任何有损伤的组织/器官，净化后称重。

对对照组和帕洛诺司琼120mg/kg/天组及所有研究期间死亡动物的离体组织进行全面的病理学检查。

25-2-3试验结果

25-2-3-1临床表现：

唾液分泌过多、颤抖（120mg/kg/天组雌雄各1只），90和120mg/kg/天组动物触摸发凉和活动减少。

120mg/kg/天组4只动物（雌雄各2只）表现为阵挛性颤抖，5只雄鼠活动减少。

25-2-3-2死亡：

90和120mg/kg/天组各发现6和9只动物死亡。

90mg/kg/天组所有死亡动物均为雄性。

120mg/kg/天组的死亡动物为4只雄性和5只雌性。

120mg/kg/天组大多数死亡动物死于研究的第1到6周。

这些动物在死亡前表现为共济失调、活动减少和颤抖。

研究期间60mg/kg/天组没有一只动物死亡。

研究期间2只雌性（对照组和30mg/kg/天组各1只）因灌胃意外死亡。

25-2-3-3体重/食物消耗/饮水消耗：

30、60、90和120mg/kg/天组雄性和雌性小鼠体重增长与对照组动物具有可比性。

未观察到动物摄食量的变化。

对照组雄性和雌性小鼠最终体重分别在34到43g（平均重37.9±

0.74g）和32到39g（平均重35.5±

0.67g）之间。

30、60、90和120mg/kg/天组雄性在研究第13周时的平均日摄食量分别为6.0、5.5、5.7、5.0和5.7g，雌性小鼠分别为5.7、5.5、5.9、5.7和5.5g。

25-2-3-4血液学变化：

任何试验组均未发现有临床或统计学意义的血液学指标变化。

25-2-3-5血生化/尿分析变化：

帕洛诺司琼和RS-17825-007的血浓度在包括直到60mg/kg/天组的雄性动物身上呈剂量依赖性增加（如表1所示）。

在90mg/kg/天组或更高剂量组动物身上未观察到帕洛诺司琼和RS-17825-007血浆浓度与剂量之间的这种成比例变化。

120mg/kg/天组雄性和雌性动物的血浆浓度不再增加，因此90mg/kg/天组和120mg/kg/天组的血浆浓度相似。

因此化合物在该剂量下在雌雄动物身上达到了血浆饱和。

在临床研究中，口服剂量3到80ug/kg后，血浆浓度与剂量比例在4小时保持恒定。

表1帕洛诺司琼和RS-17825-007在小鼠身上的平均血浆浓度（ng/ml）

化合物

性别

对照

剂量组（mg/kg/day）

30

60

90

120

帕洛诺司琼

雌性

-

802±

222

1150±

248

1490±

614

1900±

291

雄性

864±

177

312

2000±

360

2070±

277

RS-17825-007

1040±

78

1350±

169

1560±

550

1830±

369

898±

96

1570±

545

1890±

387

105

各试验组动物血生化参数没有变化。

雌性动物尿分析表明蛋白在尿中的排泄仅轻微增加，从对照的+1对120mg/kg/天组的+1到+2。

该变化没有临床价值。

25-2-3-6眼科检查：

裂隙灯检查未发现异常现象。

25-2-3-7器官重量变化：

30、60、90和120mg/kg/天组雄性动物性器官附件（附睾、前列腺和精囊）绝对重量分别降低8.7、5.3、7.2和25.4%。

性器官附件的相对重量相对应以上各剂量组也分别降低1.6、3.7、6.5和21.2%。

120mg/kg/天组动物有明显差异（p<

0.01）。

25-2-3-8大体病理：

对照组、90和120mg/kg/天组雄性分别有0、4和2，雌性分别有1、0和3只动物发生眼混浊。

90和120mg/kg/天组各有3只雄性动物的肺部变色，对照组、30、90和120mg/kg/天组各有1只雌性动物的肺部变色。

该变化没有剂量依赖性，因此与帕洛诺司琼无关。

25-2-3-9组织病理学变化：

90和120mg/kg/天组有3只雄性出现肺充血和出血。

0、90和120mg/kg/天组分别有2、1和1只雌性出现肺充血。

25-2-4结论：

帕洛诺司琼日剂量120mg/kg对雄性和雌性小鼠来说均为致死剂量，90mg/kg/天为雄性小鼠的致死剂量。

引起雄性性器官附件绝对重量下降、肺充血和出血。

因此在该研究中，肺和雄性性器官为毒性靶器官。

60mg/kg/天仅对性器官附件的绝对和相对重量产生较小变化，且没有任何组织病理学损伤，因此认为该剂量为雄性的最大耐受量。

90mg/kg/天为雌性的最高非致死剂量，因此该剂量被确定作为接下来的研究中雌性的最大耐受量。

25-3CD-1小鼠灌胃口服盐酸帕洛诺司琼104周的致癌性研究

25-3-1试验材料

25-3-1-1受试药物：

帕洛诺司琼，批号：

1304981/Mfg、30893P104和1360411/Mfg、30893-P106。

纯度为99.0到100%，样品溶液在室温条件下48小时和5-10℃条件下15天稳定且质量相同。

25-3-1-2试验动物：

CD-1（ICR）BR（CD-1）小鼠，35到42日龄，雄性28.8到30.3g，雌性22.9到23.4g。

动物雌雄分开饲养，每笼2只同性别动物。

25-3-2试验方法

25-3-2-1试验分组：

试验分为5个主要研究组-每组雌雄各56只，分别灌胃帕洛诺司琼0、0、10、30和60mg/kg/天；

3个卫星组-每组雌雄各14只（高剂量组另设雌雄各8只动物，第6组由雌雄各14只未经任何处理的动物组成作为空白对照组），分别灌胃帕洛诺司琼10、30和60mg/kg/天，具体见表2和表3。

表2主要研究组动物分组

组号

组别

剂量（mg/kg/day）

主要研究组

笼号

动物号

1

溶剂对照

1-28

152-179

1-56

303-358

2

29-56

180-207

57-112

359-414

3

10

57-84

208-235

113-168

415-470

4

85-112

236-263

169-224

471-526

5

113-144

264-295

225-288

527-590

6

空白对照

145-151

296-302

289-302

591-604

表3卫星组动物分组

卫星组*

303-309

324-330

605-625

668-688

310-316

331-337

626-646

689-709

317-323

338-344

647-667

710-730

*：

卫星组研究动物仅用于取毒代动力学样本。

25-3-2-2给药途径及时间：

连续104周灌胃给药，每日1次。

25-3-2-3剂量选择依据：

小鼠3个月毒性研究。

25-3-2-4卫星组药代或特殊研究组：

在第1天、26、52、78和104周从每组雌雄各3只动物的眼窝后部采集0.3ml血用于化合物和代谢物RS-17825-007的毒代动力学分析。

25-3-2-5未按时间表处死或死亡动物：

将处于极端状况下的动物杀死，检查损伤和肿瘤外观，解剖后分离器官用于显微检查，收集血浆样本用于测定血液学指标。

25-3-3检测指标

25-3-3-1临床表现：

研究期间，每日两次检查动物的副反应。

在以下时间通过剂量组和观察时间进行列表或绘图：

第1周每天，第2周和第4周每周2次，第5周到第13周每周1次，第14周以后每2周1次。

体重在试验开始前（0周）称1次、开始后到第14周每周1次，此后每4周1次，在第104周处死前1次。

评估绝对体重和相对体重（与对照组相比的百分率差异）的增长情况。

通过绘图表示整个研究过程中每组平均体重增长情况。

通过绘图表示整个研究过程中每组平均食物消耗情况。

研究期间，每日评估动物死亡率、隔离虚弱动物和杀死处于极端状况下的动物进行尸检。

对末期处死的动物进行全面尸检。

列表和绘图表示整个研究期间累积组死亡率，曲线图表示所有动物的百分存活率。

25-3-3-2检眼镜检查：

未做

25-3-3-3血液学指标：

对104周时在麻醉状况下通过眼眶后部采集的血样本进行血液学指标评估，不同的适时测定的与剂量和性别有关的变化。

25-3-3-4组织病理学检查：

尸检时，切开所有研究动物的组织洗净。

分离以下组织并称重：

脑、附睾、心、肾、肝、肺（包括支气管）、卵巢、垂体、前列腺、唾液腺、精囊、脾、睾丸、胸腺、子宫及子宫颈。

列表表示器官绝对和相对重量。

照例记录杀死和过早死亡动物的器官重量。

对主要研究组所有处死动物的器官的异常性进行评价。

组织的组织病理学检查用于用于评估器官重量（如上所述）和其它组织如肾上腺、脑、股骨、心、肾、肝、肺（包括支气管）、乳腺区、脊髓、胸骨、胃、甲状腺和子宫。

除最初放于Bouin，s液中随后保存于70%工业甲基化酒精中的睾丸和附睾以及保存于Davidsion，s液中的眼睛外，以下组织保存在10%中性缓冲福尔马林中。

这些组织为肾上腺、视神经、大动脉-胸部、卵巢、脑、胰腺、盲肠、垂体、结肠、前列腺、十二指肠、直肠、附睾、唾液腺、仅1只眼、仅1条坐骨神经、股骨、精囊、胆囊、大腿骨骼肌、哈氏腺、脊髓、心、脾、回肠、胸骨、空肠、胃、肾、睾丸、泪腺、胸腺、肝、甲状腺/甲状副腺、肺（包括主支气管）、舌、颚淋巴结、肠系膜淋巴结、气管、膀胱、乳腺后部、子宫及子宫颈、食道、阴道。

其它异常组织样本同样保存用于组织病理学检查。

除此之外的的任何包块，包括邻近包块的淋巴结管和组织同样被保存。

检查所有主要研究组动物的组织和器官。

绘制非赘生物和赘生物发现的发生范围表。

25-3-3-5体重/食物消耗：

计算每只动物每周的平均体重和食物消耗。

25-3-3-6列表表示双重确证对照中重要的非赘生物和赘生物发现，给药组与每一个独立对照组进行比较，然后再与两个对照组合并起来的值进行比较。

25-3-4统计方法：

方差齐性采用Bartlett,s检验。

显著性检验采用Fisher,s精确性检验计算。

给药组组内结果比较采用Mantel趋势成比例检验，每个剂量组与对照组组间结果比较采用双侧Fisher,s精确性检验。

如果Bartlett,s方差检验在1%的水平不显著，则采用变量分析。

25-3-5试验结果

25-3-5-1临床观察：

试验组动物出现脱毛、体温下降、皮肤苍白、眼混浊发生增加和呼吸杂音。

在0、0、10、30和60mg/kg/天组雌雄各56只动物中发生眼混浊的雄性动物分别为1、4、4、2和8只，雌性分别为1、1、6、5和5只。

研究组中发生呼吸杂音的雄性动物分别为5、2、3、7和9只，雌性分别为2、2、5、1和3只。

25-3-5-2死亡：

0、0、低、中和高剂量组在研究期间的死亡率雄性分别为55.4、48.2、55.3、50和50%，雌性分别为62.5、57.1、57、67.9和76.8%（数据如表4所示）。

表4研究末期的死亡率

死亡率%

对照组1

31

55.4

35

62.5

对照组2

27

48.2

32

57.1

低

55.3

57

中

28

50

38

67.9

高

43

76.8

试验组发生十二指肠、空肠、回肠和盲肠扩张的死亡动物多于对照组。

高剂量组在第90周时超过50%的动物存活表明整个研究期间有足够数量的动物暴露于药物之下。

25-3-5-3体重和食物消耗：

见表5。

在研究的第104周，试验组雄性动物体重与对照组动物相似。

雌性动物体重也相似。

数据如下表所示。

在第104周，试验组动物体重高于对照组动物，例如低、中、高剂量组雄性动物分别为0、2.2和0.2%，雌性动物分别为3.1、2.6和8.2%。

试验组和对照组动物食物消耗相似，例如0、0、10、30和60mg/kg/天组每只雄性分别为5.6、5.1、6.1、6和6g，雌性分别为5、5、4.9、5.3和5.3g。

表5小鼠平均体重（g）

时间

低剂量

中剂量

高剂量

初始

30.3

30.0

28.8

29.5

29.7

第14周

41.9

42.8

40.7

41.7

40.8

与对照组1之百分比

100.0

102.3

97.1

99.5

97.3

26周

44.9

44.8

44.2

43.3

42.1

54周

46.7

46.6

46.5

46.4

43.8

100

99.8

99.6

93.8

74周

47.9

48.0

47.6

45.7

104周

44.6

44.5

44.4

45.6

44.7

99.55

102.2

100.16

23.4

23.0

22.9

23.3

32.6

32.4

32.1

33.7

33.2

99.4

98.5

103.4

101.8

34.9

34.7

36.1

35.9

37.8

37.4

38.2

38.1

39.0

98.9

101.0

100.8

103.2

40.1

39.2

40.3

41.4

38.0

41.1

100.3

102.6

108.2

25-3-5-4血液学变化：

在第104周，高剂量组观察到的血液学指标变化只有统计学意义而无临床价值或意义。

25-3-5-5毒代动力学/血浆浓度评估

在第26周，10、30和60mg/kg/天的稳态血浆浓度（AUC）雄性分别为1360、3963和8620ng.hr/ml，雌性分别为535、1988和4462ng.hr/ml。

给药后1小时内达到峰浓度。

在研究的第26、52、78周，血浆浓度的增加与剂量成比例。

雄性身上的血浆浓度高于雌性，如表6所示。

在研究的第26周到104周，其半衰期变异在雄性从1.7到3.5小时，雌性从1.5到2.4小时。

化合物没有蓄积性，给药24小时后血浆样本中检测不到化合物。

研究期间，化合物给予雄性和雌性小鼠15分钟到1个小时后在血中检测到主要代谢产物RS-17825-007（M9；

氮氧化物）。

其半衰期在两种性别的变异从2.5到3.5小时。

代谢产物药代动力学特征见表7。

表6雄性小鼠连续104周每日口服帕洛诺司琼在第1天和第26、52、78和104周时的药代动力学参数

Cmax（ng/ml）

AUC（0-24hr）（ng.h/ml）

第1天

第26周

第52周

第78周

第104周

159.83

470.7

310.3

305.5

352.7

645

1360

1167

1250a

1680

638.11

878.5

652.0

1138.1

1093.2

1985b

3963

3411

5754b

5621

1534.5

1620.5

2071.5

1956.9

1502.4

5475

8620

10460

9058a

10889

198.5

227.9

166.9

139.2

242.0

404

535

521

556

931

814.0

665.6

610.8

817.7

681.6

2035a

1988

2307

2410

2069

1728.6

1467.1

2550.8

1423.0

1036.2

4623

4462

6052

6443a

5619c

Cmax值的计算来源于3只动物；

AUC（0-24hr）值的计算来源于15个样本，除开a14个样本，b13个样本，c12个样本。

表7雄性小鼠口服帕洛诺司琼在第1天和第26、52、78和104周时RS-17825-007的药代动力学参数

204.13

236.2

163.97

178.2

175.0

708

786

605

710b

531.71

421.3

339.85

389.6

364.0

1944c

2168

1984

2025d

2015

1035.16

761.3

596.4

695.8

459.12

5398

4881

3797

3530b

4361

49.44

201.6

216.5

131.7

165.4

381

410

329

342

578

521.79

310.4

346.3

288.77

190.9

1201b

914

969

1021

714

783.60

678.0

475.9

552.5

3028

2436

2552

2925e

2944d

AUC（0-24hr）值的计算来源于15个样本，除开b14个样本，c13个样本，d12个样本,e11个样本。

小鼠口服帕洛