安图A化学发光仪作业指导书.docx
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安图A化学发光仪作业指导书
安图A2000化学发光仪
作业指导书
编写者：
王文君
审核者：
批准者：
生效日期：
2015年10月1日
免疫室--安图A2000化学发光仪作业指导书部分
序号
主题内容
代号
页码
1
单纯疱疹病毒1型IgM抗体测定作业指导书
YYGJ-JYK-ATFG-01
3
2
单纯疱疹病毒2型IgM抗体测定作业指导书
YYGJ-JYK-ATFG-02
10
3
风疹病毒IgM抗体测定作业指导书
YYGJ-JYK-ATFG-03
17
4
弓形虫IgM抗体测定作业指导书
YYGJ-JYK-ATFG-04
24
5
巨细胞病毒IgM抗体测定作业指导书
YYGJ-JYK-ATFG-05
32
岳阳市广济医院
检验科
文件编号YYGJ-JYK-ATFG-01
第1页共7页
单纯疱疹病毒1型IgM抗体测定作业指导书
第1版第0次修改
颁布日期2015年10月1号
一、目的：
规范单纯疱疹病毒1型IgM抗体测定的标准操作程序，确保单纯疱疹病毒1型
IgM抗体测定的结果准确有效。
二、适用范围：
在AutoLumoA2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的单纯疱疹病毒1
型IgM抗体。
三、临床意义
单纯疱疹病毒（Herpessimplexvirus,HSV）属于疱疹病毒科α亚科，人是其唯一的自然宿主。
单纯疱疹病毒的感染在世界范围内广泛存在，婴儿、儿童和成人均可感染，40岁左右时，约有90%的人感染单纯疱疹病毒[1]。
单纯疱疹病毒（HSV）有两个血清型即单纯疱疹病毒l型（HSV-1）和单纯疱疹病毒2型（HSV-2），两型病毒核苷酸序列有50%同源性。
HSV-l主要是通过呼吸道、皮肤和粘膜密切接触传播，十岁以前的儿童最易受到感染，有症状的感染主要是引起疱疹性口腔炎、疱疹性角膜炎、疱疹性脑炎等[2]。
HSV-2主要通过性传播，可引起生殖器疱疹，85%以上的生殖器疱疹是由HSV-2引起，HSV-1一般不引起生殖器的复发性感染，99%以上的复发性生殖器疱疹由HSV-2引起[3]。
孕妇在怀孕的前三到六个月原发感染，会造成胎儿先天性感染，或者流产、死胎，但是这种几率非常低。
在怀孕的后三个月原发感染造成新生儿感染的几率很高，约30~50%，因为此时孕妇体内的IgG抗体量仍旧不足，新生儿来自母体的保护性抗体更少[4,5]。
病毒分离培养和PCR法是诊断HSV感染的最直接的方法，但相比之下IgM和IgG
抗体的检测是目前普及的主要方法。
IgM抗体一般在感染1周后出现，4~8周逐渐消失，是近期感染的指标，IgG抗体一般在感染2周后出现，可持续存在很多年，是既往感染的指标[6,7]
四、方法原理
采用捕获法原理进行检测。
用抗人IgM抗体包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记HSV-1抗原制备酶结合物，通过免疫反应形成二抗-抗体-酶标抗原的复合物，该复合物催化发光
岳阳市广济医院
检验科
文件编号YYGJ-JYK-ATFG-01
第2页共7页
单纯疱疹病毒1型IgM抗体测定作业指导书
第1版第0次修改
颁布日期2015年10月1号
底物发出光子，发光强度与HSV-1IgM抗体的含量成正比。
五、标本的采集与处理
5.1采用正确医用技术收集血清样本（详见标准血液标本前处理流程）。
5.2样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。
5.3样本处理、收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2～8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。
使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。
六、标本拒收标准
1）严重溶血、脂血2）标本标识不明
七、仪器与材料
7.1.仪器：
适用于Lucy2、Lumo、AutoLumoA2000化学发光检测仪。
7.2.试剂：
AutoLumoA2000专用单纯疱疹病毒1型IgM抗体试剂
7.2.1.试剂准备：
本试剂为即用型试剂，可以直接放在仪器上。
7.2.2.试剂盒于2～8℃储存，有效期12个月。
7.2.3.试剂盒应防止冷冻，避免强光照射。
7.2.4.试剂盒开启使用后，2～8℃保存可使用1个月。
7.2.5.试剂盒可适应1周内常温运输，运输过程中应轻拿轻放，避免重压，防止雨雪淋湿和阳光曝晒。
7.2.6.试剂机载稳定性
7.2.6.1.试剂包（磁微粒混悬液、酶结合物、样品稀释液）竖直向上存放，在2～10℃环境下冷藏保存2小时后，才可上机使用。
首次使用后，机载或在2～10℃环境下稳定期为28天。
7.2.6.2.校准品开瓶后保存于2～8℃，稳定期可维持1个月；若需使用更长时间，应根据需要进行分装，于-20℃冻存（可以保存2个月），但应避免反复冻融。
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检验科
文件编号YYGJ-JYK-ATFG-01
第3页共7页
单纯疱疹病毒1型IgM抗体测定作业指导书
第1版第0次修改
颁布日期2015年10月1号
7.2.6.3.试剂在2～8℃保存可稳定至标签上所标示的有效期。
7.3.质控液：
推荐使用安图配套质控品或第三方质控品BioRADQC
八、检验方法
8.1.消耗品检查：
8.1.1.根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足。
8.1.2.参考相应的仪器系统操作说明。
8.2.试剂包装载：
8.2.1.试剂包首次上机前，轻轻地倒转试剂包多次以混合新试剂包内的成分，避免产生气泡。
不要倒转已经打开的试剂包。
8.2.2.仪器通过扫描试剂包条码自动获得测试所需的参数。
8.2.3.如果特殊情况下仪器无法识别条码，可以手工输入。
8.2.4.参考相应的仪器系统操作说明。
8.3.测试：
8.3.1.将样本容器放置在仪器配套样本架中，每次测试样本量为10µl。
8.3.2.装载样本架，在仪器软件界面中输入样本信息。
8.3.3.选择“运行”开始测试，系统自动进行试验操作。
8.3.4.参考相应的仪器系统操作说明。
8.4.定标：
8.4.1.仪器通过扫描条码卡自动获取测试所需的参数。
8.4.2.如果特殊情况下仪器无法识别条码卡，可以手工输入。
8.4.3.将校准品转移至样本容器，放置在仪器配套样本架中。
8.4.4.装载样本架，在仪器软件界面中输入定标信息。
8.4.5.选择“运行”开始测试，生成定标曲线。
8.4.6.定标曲线有效期为28天。
8.4.7.参考相应的仪器系统操作说明。
8.4.8.出现以下情况需要进行定标曲线的重新生成：
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文件编号YYGJ-JYK-ATFG-01
第4页共7页
单纯疱疹病毒1型IgM抗体测定作业指导书
第1版第0次修改
颁布日期2015年10月1号
8.4.8.1.质控结果经重复测定后仍然超出范围；
8.4.8.2.试剂盒或发光底物液的批号更改；
8.4.8.3.超出定标曲线的有效期限；
8.4.8.4.仪器重要部件更换或维修。
8.5.质控：
8.5.1.使用包含至少两个分析物水平的质控品进行质控。
8.5.2.出现以下情况需要进行质控：
8.5.2.1.测试试剂盒使用超过24小时；
8.5.2.2.更换新的试剂盒；
8.5.2.3.重新生成定标曲线；
8.5.2.4.停机。
8.5.3.各实验室需根据自身情况建立适合本实验室的可接受范围，以确保合适的测试性能。
8.5.4.质控值应落在规定的范围内，如出现失控，应采取纠正措施。
8.6.稀释
8.6.1.使用手工稀释或仪器自动稀释功能，仪器自动稀释的最大比例为1:
100。
8.6.2.手工稀释使用系统通用样本稀释液进行稀释，将得到的检测结果乘以稀释倍数计算最终结果。
8.6.3.选择仪器自动稀释功能，可以得到准确的检测结果，参考相应的仪器系统操作说明以及帮助系统。
8.7.结果计算：
选择适当的曲线拟合方式，本试剂盒推荐采用四参数拟合方式，以校准品浓度值为x轴，以校准品发光强度log值为y轴建立定标曲线。
根据待测样本的发光强度值回算相应的浓度值。
仪器自动操作系统可通过存储的定标曲线以及样本测试得到的信号值自动计算样本测试结果。
若使用枸橼酸钠抗凝的血浆样本，检测结果需要+10%进行校正。
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单纯疱疹病毒1型IgM抗体测定作业指导书
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九、参考范围
采用ROC曲线法确定参考值：
样本浓度值<6AU/ml判为阴性；6AU/ml≤浓度值
<10AU/ml判为可疑；浓度值≥10AU/ml判为阳性。
建议各实验室根据自身实际条件及
接触人群建立正常参考值。
十、检验结果的解释
10.1.测定值超过240AU/ml的样本，其结果是通过定标曲线外延得出的计算结果。
如果要获得其更准确的结果，需用系统通用稀释液对样本进行稀释，建议稀释比例为1:
10。
10.2.样本检测浓度值<6AU/ml，提示为非近期感染，但不能完全排除没有HSV-1感染，因为不同人从感染HSV-1到产生抗体的时间不同，可能在检测时体内未产生足够能被检测到的抗体。
10.3.样本检测浓度值≥10AU/ml，提示可能为近期感染，建议结合IgG抗体和IgG抗体亲和力检测结果综合判定是否为近期感染。
10.4.6AU/ml≤样本浓度值<10AU/ml，建议1～2周后重新取样检测或用其他检测方法进行确认。
10.5.由于方法学或免疫特异性等原因，使用不同生产商的试剂对同一份样本进行检测可能会得到不同的检测结果，因此不同试剂检测所得结果不应直接相互比较，以免造成错误的医学解释，建议实验室在发给临床医生的检测报告注明所用试剂特征。
系列监测中如果改变试剂类型，则应进行额外的连续性检测并与原有试剂结果进行平行比较以重新确定基线值。
十一、检验方法的局限性
11.1.本产品检测结果仅供临床参考，不应作为临床诊治的唯一依据，对患者的临床管理应结合其症状/体征、病史、其他实验室检查、治疗反应及流行病学等信息综合考虑。
11.2.感染初期，病毒特异性IgM抗体未产生或滴度很低会导致阴性结果，如怀疑有病毒感染，应提示患者在1~2周内复查，抽取第二份样本，并和第一份样本在同条件下同时检测，以确定是否有初次感染的血清转化或病毒特异IgM或IgG抗体滴度明显升高。
11.3.由于脐带血中可能含有源于母体的病毒特异性IgM抗体（胎盘渗漏），因此，最好在出生后5天内再对婴儿的后续样本进行检测，以证实脐带血样本病毒特异性IgM抗体
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单纯疱疹病毒1型IgM抗体测定作业指导书
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的阳性结果。
强烈推荐新生儿与母亲的血清样本平行测试，如果是胎儿的先天性感染，其IgM抗体水平（以及IgG抗体水平）会持续存在或呈上升趋势，反之，如果抗体来源于母体，则在在平行实验中婴儿的抗体水平会逐渐下降或消失。
11.4.由于孕妇的实验室检查不能可靠地鉴定胎儿患病的风险，不得将本试剂的检测结果单独作为终止妊娠的依据。
11.5.免疫功能受损或接受免疫抑制治疗的患者，如人类免疫缺陷病毒（HIV）感染患者或器官移植后接受免疫抑制治疗的患者，其血清学IgM抗体检测的参考价值有限，可能会导致错误的医学解释。
11.6.在近几个月内接受过输血或其他血液制品治疗的人群，对其阳性检测结果的分析应慎重。
11.7.病毒特异性IgM抗体不仅出现于初次感染，当二次感染和复发感染时也可能出现。
11.8.样本中的异嗜性抗体或类风湿因子可能会干扰检测结果，应结合患者的病史综合判断。
11.9.严重溶血、脂血或浑浊的样本可能会造成不正确的结果。
十二、产品性能特征
12.1.最低检测限：
不大于1.0AU/ml；
12.2.线性范围：
6~240AU/ml；
12.3.准确性：
回收率在85%~115%范围内；
12.4.重复性：
变异系数CV不大于15.0%；
12.5.干扰物质：
1000mg/dL血红蛋白、20mg/dL胆红素、3000mg/dL甘油三酯对检测结果无显著影响；
12.6.分析特异性：
与TOXIgM抗体、RVIgM抗体、CMVIgM抗体、HSV-2IgM抗体、VZVIgM抗体、EBVIgM抗体、细小病毒B19IgM抗体无交叉反应；
12.7.方法学对比：
与SFDA批准上市的试剂盒对比检测1080份临床样本，阳性符合率为98.01%，阴性符合率为100%，总体符合率为99.72%。
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十三、参考文献
1.AurelianL.HerpesSimplexViruses.InSpecter,S&GLancz（eds.）.ClinicalVirologyManual.2ndEd.Elsevier，NewYork.1992：
473-497.
2.WhitleyR.HerpesSimplexViruses.InFields,B,DKnipe,PHowley,etal.（eds.）.FieldsVirology3rdEd.Lippincott-Raven，Philadelphia.2297-2231.
3.WeissH．Epidemiologyofherpessimplexvirustype2infectioninthedeveloping
world．2004，11：
24A-35A.BrownZA，SelkeS，ZehJ，KopelmanJ，MaslowA，AshleyRL，etal.Theacquisitionofherpessimplexvirusduringpregnancy.NEnglJMed，1997，337：
509-518.
4.赵萍，黄绍敏，王琳.新生儿单纯疱疹病毒感染.中国优生与遗传杂志，1998，6（3）
79-80.
5.李越希，张云.单纯疱疹病毒的检测研究进展.中国公共卫生，2002，l8（8）：
1012-1013.
6.DavidW.,PeterR.Fleld,WilliamL,etal.DetectionofImmunoglobulinMAntibodiestoGlycoproteinG-2byWesternBlot（Immunoblot）forDiagnosisofInitialHerpesSimplexVirusTpe2GenitalInfections.JournalOfClinicalMicrobiology.Dec.1993,p.3157-3164.
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一、目的
规范单纯疱疹病毒2型IgM抗体测定的标准操作程序，确保单纯疱疹病毒2型
IgM抗体测定的结果准确有效。
二、适用范围
在AutoLumoA2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的单纯疱疹病毒2型IgM抗体。
三、临床意义
单纯疱疹病毒（Herpessimplexvirus,HSV）属于疱疹病毒科α亚科，人是其唯一的
自然宿主。
单纯疱疹病毒的感染在世界范围内广泛存在，婴儿、儿童和成人均可感染，
40岁左右时，约有90%的人感染单纯疱疹病毒[1]。
单纯疱疹病毒（HSV）有两个血清型即单纯疱疹病毒l型（HSV-1）和单纯疱疹病毒2
型（HSV-2），两型病毒核苷酸序列有50%同源性。
HSV-l主要是通过呼吸道、皮肤和粘
膜密切接触传播，十岁以前的儿童最易受到感染，有症状的感染主要是引起疱疹性口
腔炎、疱疹性角膜炎、疱疹性脑炎等[2]。
HSV-2主要通过性传播，可引起生殖器疱疹，
85%以上的生殖器疱疹是由HSV-2引起，HSV-1一般不引起生殖器的复发性感染，99%
以上的复发性生殖器疱疹由HSV-2引起[3]。
孕妇在怀孕的前三到六个月原发感染，会造成胎儿先天性感染，或者流产、死胎，
但是这种几率非常低。
在怀孕的后三个月原发感染造成新生儿感染的几率很高，约
30~50%，因为此时孕妇体内的IgG抗体量仍旧不足，新生儿来自母体的保护性抗体更
少[4,5]。
病毒分离培养和PCR法是诊断HSV感染的最直接的方法，但相比之下IgM和IgG
抗体的检测是目前普及的主要方法。
IgM抗体一般在感染1周后出现，4~8周逐渐消失，
是近期感染的指标，IgG抗体一般在感染2周后出现，可持续存在很多年，是既往感染
的指标[6,7]。
四、方法原理
采用捕获法原理进行检测。
用抗人IgM抗体包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记HSV-2
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第2页共7页
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抗原制备酶结合物，通过免疫反应形成二抗-抗体-酶标抗原的复合物，该复合
物催化发光底物发出光子，发光强度与HSV-2IgM抗体的含量成正比。
五、标本的采集与处理
5.1.采用正确医用技术收集血清样本（详见标准血液标本前处理流程）。
5.2.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。
5.3.样本处理、收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2～8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。
使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。
六、标本拒收标准
1）严重溶血、脂血2）标本标识不明
七、仪器与材料
7.1.仪器：
适用于Lucy2、Lumo、AutoLumoA2000化学发光检测仪。
7.2.试剂：
AutoLumoA2000专用单纯疱疹病毒2型IgM抗体试剂
7.2.1.试剂准备：
本试剂为即用型试剂，可以直接放在仪器上。
7.2.2.试剂盒于2～8℃储存，有效期12个月。
7.2.3.试剂盒应防止冷冻，避免强光照射。
7.2.4.试剂盒开启使用后，2～8℃保存可使用1个月。
7.2.5.试剂盒可适应1周内常温运输，运输过程中应轻拿轻放，避免重压，防止雨雪淋湿和阳光曝晒。
7.2.6.试剂机载稳定性
7.2.6.1.试剂包（磁微粒混悬液、酶结合物、样品稀释液）竖直向上存放，在2～10℃环境下冷藏保存2小时后，才可上机使用。
首次使用后，机载或在2～10℃环境下稳定期为28天。
7.2.6.2.校准品开瓶后保存于2～8℃，稳定期可维持1个月；若需使用更长时间，应根据需要进行分装，于-20℃冻存（可以保存2个月），但应避免反复冻融。
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第3页共7页
单纯疱疹病毒2型IgM抗体测定作业指导书
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颁布日期2015年10月1号
7.2.6.3.试剂在2～8℃保存可稳定至标签上所标示的有效期。
7.3.质控液：
推荐使用安图配套质控品或第三方质控品BioRADQC
八、检验方法
8.1.消耗品检查：
8.1.1.根据仪器说明装载或检查消耗品是否充足。
8.1.2.参考相应的仪器系统操作说明。
8.2.试剂包装载：
8.2.1.试剂包首次上机前，轻轻地倒转试剂包多次以混合新试剂包内的成分，避免产生气泡。
不要倒转已经打开的试剂包。
8.2.2.仪器通过扫描试剂包条码自动获得测试所需的参数。
8.2.3.如果特殊情况下仪器无法识别条码，可以手工输入。
8.2.4.参考相应的仪器系统操作说明。
8.3.测试：
8.3.1.将样本容器放置在仪器配套样本架中，每次测试样本量为10µl。
8.3.2.装载样本架，在仪器软件界面中输入样本信息。
8.3.3.选择“运行”开始测试，系统自动进行试验操作。
8.3.4.参考相应的仪器系统操作说明。
8.4.定标：
8.4.1.仪器通过扫描条码卡自动获取测试所需的参数。
8.4.2.如果特殊情况下仪器无法识别条码卡，可以手工输入。
8.4.3.将校准品转移至样本容器，放置在仪器配套样本架中。
8.4.4.装载样本架，在仪器软件界面中输入定标信息。
8.4.5.选择“运行”开始测试，生成定标曲线。
8.4.6.定标曲线有效期为28天。
8.4.7.参考相应的仪器系统操作说明。
8.4.8.出现以下情况需要进行定标曲线的重新生成：
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第4页共7页
单纯疱疹病毒2型IgM抗体测定作业指导书
第1版第0次修改
颁布日期2015年10月1号
8.4.8.1.质控结果经重复测定后仍然超出范围；
8.4.8.2.试剂盒或发光底物液的批号更改；
8.4.8.3.超出定标曲线的有效期限；
8.4.8.4.仪器重要部件更换或维修。
8.5.质控：
8.5.1.使用包含至少两个分析物水平的质控品进行质控。
8.5.2.出现以下情况需要进行质控：
8.5.2.1.测试试剂盒使用超过24小时；
8.5.2.2.更换新的试剂盒；
8.5.2.3.重新生成定标曲线；
8.5.2.4.停机。
8.5.3.各实验室需根据自身情况建立适合本实验室的可接受范围，以确保合适的测试性能。
8.5.4.质控值应落在规定的范围内，如出现失控，应采取纠正措施。
8.6.稀释
8.6.1.使用手工稀释或仪器自动稀释功能，仪器自动稀释的最大比例为1:
100。
8.6.2.手工稀释使用系统通用样本稀释液进行稀释，将得到的检测结果乘以稀释倍数计算最终结果。
8.6.3.选择仪器自动稀释功能，可以得到准确的检测结果，参考相应的仪器系统操作说明以及帮助系统。
8.7.结果计算：
选择适当的曲线拟合方式，本试剂盒推荐采用四参数拟合方式，以校准品浓度值为x轴，以校准品发光强度log值为y轴建立定标曲线。
根据待测样本的发光强度值回算相应的浓度值。
仪器自动操作系统可通过存储的定标曲线以
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