医学影像技术《实验十六显微镜的使用和基本组织观察》.docx

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医学影像技术《实验十六显微镜的使用和基本组织观察》

实验十六显微镜的使用和根本组织观察

【目的与要求】

1、学会熟练使用光学显微镜。

2、掌握上皮组织的结构特点及分布，光镜下识别各种被覆上皮及。

3、掌握疏松结缔组织的结构特点，并能在光镜下识别。

4、掌握各种血细胞的形态结构及正常值

5、掌握肌纤维的结构特点，在切片中能识别不同肌组织的纵切面、横断面。

【实验内容】

一、显微镜的构造、使用和保护

显微镜是精密的贵重仪器，是实验课的主要工具，能否熟悉地使用，直接影响实验的效果。

因此必须在了解显微镜构造的根底上，学会正确而熟练地使用及妥善地保护。

〔一〕显微镜的构造〔图1-1〕

1机械装置局部

〔1〕镜座：

在最下部，起支持作用。

〔2〕镜臂：

呈弓形，作支持和握手取显微镜之用。

〔3〕载物台：

放切片的平台，中有圆孔。

台上有推片器和片夹。

〔4〕旋转盘：

上接镜筒，下嵌接物镜，可以旋转以更换物镜。

〔5〕粗调节器：

用于调节切片图像的焦平面，调节幅度大，主要用于低倍镜焦距的调节。

〔6〕细调节器：

调节幅度小，可精细地调节图像的焦平面，主要用于高倍镜焦距的调节。

2光学装置局部

〔1〕目镜：

可分5×或10×或15×。

〔2〕物镜：

可分低倍镜〔５×或10×〕、高倍镜〔40×〕、油镜〔100×〕。

〔显微镜放大倍数=目镜放大倍数×物镜放大倍数〕。

〔3〕聚光器：

位于载物台下，可上下移动。

内装虹彩光圈，可放大和缩小。

〔4〕集光镜或反光镜：

在镜座上，使光线集中至聚光器。

图1显微镜构造图

〔二〕显微镜的使用方法

1拿取和放置：

—手握持镜臂，另一手托住镜座，平稳移动放置桌面，距桌边10cm为宜。

课间休息离开座位时，应将显微镜移向桌内，以免碰落损坏。

2对光：

接通电源，翻开开关上升聚光器，开大虹彩光圈。

转动旋转盘，将低倍接物镜对正载物台的圆孔。

旋转粗调节器，使载物台与物镜接近。

双眼从目镜观察，整个视野到达均匀明亮为止。

3低倍镜的使用：

取标本擦净，将盖玻片一面朝上放于载物台固定，并将组织切片推移到载物台圆孔正中。

然后双眼从目镜观察，同时慢慢转动粗调节器，至物像清晰为止。

必要时，再用细调节器调节焦距。

移动玻片，将需要观察的内容移至视野正中，转换高倍镜。

4高倍镜的使用：

找到结构，再从目镜观察，并转动细调节器，至物像清晰。

5油镜的使用：

先在高倍镜下将需观察的组织移至视野正中，转离高倍镜。

在玻片上滴1～2滴香柏油，然后转换油镜。

两眼从侧面观察的同时，慢慢上升载物台，使油镜头浸入油滴而不与玻片接触。

再从接目镜观察，并转动细调节器，至物象清晰。

使用油镜时，光线要明亮。

〔三〕显微镜使用的考前须知及保护

1搬动显微镜要慎拿轻放，使用显微镜要严格遵守规程．

2显微镜必须经常保持清洁。

机械局部可用纱布或绸布擦净；光学局部只能用擦镜纸轻轻拭擦，严禁用手或其它物品擦拭，以防污损。

3油镜使用后，应立即用擦镜纸沾少量乙酸乙脂或二甲苯将镜头擦净。

4显微镜部件不得拆卸或互相调换，假设有故障，应立即报告老师进行处理，不得自行修理。

5显微镜用毕，应将接物镜转离载物台中央的圆孔，放入柜中，以免灰尘沾污。

〔四〕观察切片应注意的问题

1观察切片的顺序：

先用肉眼观察切片的一般轮廓、形态和染况，再用低倍镜，后用高倍镜，必要时才使用油镜观镜。

应重视低倍镜观察，它可以了解组织切片的全貌、层次、部位关系。

而高倍镜下观察只是局部的放大，切勿放置切片后立即用高倍镜观察。

2注意切片的染色法：

常用的HE染色法只能显示组织的一般结构，不能显示组织的所有结构，某些结构或成分需用特殊染色法或组织化学方法等才能显示，例如网状纤维、肥大细胞、嗜银细胞，网织红细胞，高尔基复合体及线粒体等。

3要全面、系统地观察切片先用肉眼观察切片标本，熟悉标本的大体形态，寻找要观察的大致部位。

然后用低倍镜观察标本的全貌，结构层次或组织分布，并选择典型结构，再转高倍镜进一步观察．

4建立细胞、组织和器官的立体概念在一张切片上，往往能够观察到细胞和组织不同部位和方向的断面。

同一种细胞、组织和器官，通过不同部位和方向的切面，所显示的形态和结构常常不相同〔图1-2〕。

因此，一般要求观察细胞或组织的纵切面与横切面，并尽可能观察不同部位和其它方向的切面。

然后将不同切面的形态特点加以分析、综合，获得一个正确而完整的立体形象。

一个器官通常只观察一种方向的断面，故要将平面像转为立体观，更需要多加思考。

图1-2弯管不同切面的示意图

5善于运用比拟、分析和综合的方法，提高识别能力。

在组织标本中，有些细胞、组织器官的形态类似，例如中性粒细胞与嗜酸粒细胞、复层鳞状上皮与变移上皮、淋巴结与脾脏、小肠与结肠等。

应对其进行认真比拟，掌握各自的结构特点。

6理论和实际相联系。

有时切片所见与理论描述不完全一致，其原因可能有：

〔1〕组织或器官所处的生理状况不同所致，例如猪的肝小叶界限较人的清楚；〔2〕制片过程中引起的人工假象，例如固定剂未除尽，使组织中出现不规那么的黑色结晶沉淀物；〔3〕切片刀有缺口，造成组织发生纵行裂痕；〔4〕贴片时未充分展开，组织重叠形成深染的条索状结构等等。

因此，当标本出现与理论描述的形态不同时，应认真思考。

二、上皮组织

〔一〕单层柱状上皮

取材：

狗的胆囊

染色：

HE

1肉眼观察：

标本为长条形，一面较平整，染成红色；另一面凹凸不平，染成紫红色，此面就是要观察的胆囊腔面的上皮组织所在处。

2低倍镜观察:

〔图3-2〕找到胆囊腔面，可见许多上下不平的皱襞，外表被覆单层柱状上皮。

选择结构清晰的垂直切面，移至视野中央，转高倍镜观察。

图3-2胆囊腔面

3高倍镜观察:

〔图3-3〕上皮细胞呈高柱状，排列紧密而整齐。

核呈椭圆形，染成紫蓝色；位于细胞的基底部；胞质染成粉红色。

上皮的基底面与结缔组织相连。

在典型的垂直切面上，可见相邻柱状细胞的细胞核位置上下根本一致，整个上皮的细胞核呈单行排列。

图3-3单层柱状上皮高倍镜结构图

〔二〕复层扁平上皮

取材：

狗食管

染色：

HE

1肉眼观察：

标本为食管横切面，管腔呈不规那么形，靠近腔面呈紫蓝色的部位为复层扁平上皮。

2低倍镜观察：

〔图3-5〕在管腔面找到复层扁平上皮，其细胞层数约数十层，基底面呈波浪状与结缔组织连接。

从基底面到游离面，细胞分界不清，但可从细胞核的形态变化观察其特点。

图3-5食管横切面E

sa或Wright染色

1肉眼观察：

标本的血涂片呈一很薄的“血膜〞，一端平直〔后端〕，另一端呈圆弧形〔前端〕故整体呈舌形。

将血膜面朝上置于低倍镜下观察。

2低倍镜观察：

移动玻片，找到涂片较薄处观察，可见大量圆形的血细胞，红细胞数量最多，布满整个视野，分散或成串分布，染成浅红色；染成紫兰色小点为白细胞的细胞胞核，白细胞数量较少。

选择血膜较薄、细胞分布均匀且白细胞相对较多处，转换高倍镜进一步观察。

3高倍镜观察：

〔图3-8，图3-9〕通过微调节器确认低倍镜下看到的细胞〔以白细胞为佳〕，以保证血涂片的血膜面朝上。

仔细观察各类血细胞在高倍镜下的形态特点。

〔1〕红细胞：

细胞小而圆，无核，胞质由于含有血红蛋白而呈嗜酸性〔桔红色，图3-8〕，细胞中央着色较浅是因为红细胞为双面凹的圆盘形，中央部较薄之故〔注意红细胞有叠链现象〕。

图3-8人类外周血涂片Wright染色

〔2〕中性粒细胞：

细胞圆形或卵圆形，比红细胞大，胞质呈淡红色，其中可见淡紫红色的细小颗粒。

细胞核形态多样，核分2—5叶不等，不分叶的核称杆状核〔核分叶多少能说明什么？

〕

〔3〕嗜酸性粒细胞：

数量较少，较中性粒细胞大，胞质内充满粗大、分布均匀的鲜红或桔红色颗粒。

核形态较饱满，以２～3叶多见，染成蓝色。

〔4〕嗜碱性粒细胞：

数量少不易找到，细胞大小与中性粒细胞相近。

胞质内可见分布不均、形态不规那么、大小不等的蓝色颗粒。

核分叶呈“Ｓ〞形或不规那么形，着色浅。

〔5〕淋巴细胞：

胞体大小不等，以小淋巴细胞为多，其直径与红细胞相似。

核呈圆形，染成深蓝色。

胞质少，呈一窄带围绕核，染成蔚蓝色，有时含少量紫红色的嗜天青颗粒。

〔6〕单核细胞：

体积大，圆或卵圆形；核呈肾形、马蹄铁形或不规那么形，染色质颗粒细而松散，故染色较浅；胞质较多，染成灰蓝色，内含较多细小的嗜天青颗粒。

〔7〕血小板：

体积最小，成群分布于血细胞之间，呈不规那么形，中央含紫色颗粒。

图3-9五种白细胞的形态结构比拟Wright染色

三、肌组织

〔一〕骨骼肌

取材：

狗肋间肌

染色：

HE

1肉眼观察：

标本上长条形的为骨骼肌纵切面，椭圆形的为横切面。

2低倍镜观察：

〔1〕骨骼肌纵切面：

骨骼肌纤维呈长带状，平行排列。

肌纤维间有少量结缔组织〔肌内膜〕，内有血管和神经切面。

由于肌纤维长，标本中往往不能见到其两端。

〔2〕骨骼肌横切面：

标本为一块肌肉的横切面，外表有致密结缔组织包绕为肌外膜；它伸入肌肉内，包裹着许多肌纤维为肌束膜；每条肌纤维周围有薄层结缔组织为肌内膜〔图4-1〕。

图4-1骨骼肌横切面E肌外膜P肌束膜En肌内膜F肌纤维

3高倍镜观察：

〔1〕骨骼肌纵切面：

肌纤维呈带状，肌膜较明显。

位于骨骼肌纤维周边紧贴在肌膜下方有许多卵圆形的细胞核，染成紫兰色〔图4-2↑所示〕，注意它们与周围的结缔组织内的细胞核区别。

在较薄的切片上，可见肌浆内有许多沿肌纤维长轴平行排列的肌原纤维，呈嗜酸性细丝样，肌浆染成粉红色；但在较厚的切片上，难以分辨出肌原纤维。

〔适当放低聚光器，将视野调暗〕在每条肌纤维上，可见明暗相间的周期性横纹，色深的为暗带，内有浅的Ｈ带；相邻两暗带之间为色浅的明带，明带中央有一条深色细线为Z线。

图4-2骨骼肌纵切面高倍镜观察↑骨骼肌纤维细胞核

〔2〕骨骼肌横切面：

肌纤维呈圆形、多边形、短柱状或长方形〔制片所致〕，肌膜染色深红，核位于肌膜下，呈圆形或卵圆形，肌纤维内有许多红色点状的肌原纤维〔图4-3↑所示〕，肌原纤维之间着色甚浅为肌浆。

图4-3骨骼肌横切面高倍镜观察↑肌原纤维▼成纤维细胞核

〔二〕心肌

取材：

羊心脏

染色：

HE染色

1肉眼观察：

标本为心壁的一局部，呈长方形，绝大局部着色较红为心肌。

2低倍镜观察：

由于心肌纤维排列方向较复杂，故在切片中可同时看见有纵、横、斜等各种切面。

全面观察标本，纵切面，心肌纤维呈不规那么短圆柱状，有分支；横切面心肌纤维呈圆形或椭圆形。

3高倍镜观察：

〔1〕纵切面：

心肌纤维较骨骼肌纤维细而短，分枝吻合成网。

细胞核位于肌纤维的中央，核较大，呈卵圆形，有的可见双核。

有横纹，但不如骨骼肌的横纹明显。

在心肌纤维首尾连接处，可见与横纹平行、且着深红色的直线或阶梯状线为闰盘〔图4-4←所示〕。

〔2〕横切面：

心肌纤维呈圆形或不规那么形，大小相似。

肌原纤维呈点状，着红色，分布在肌细胞的周边。

细胞核位于肌纤维中央，呈圆形〔图4-5↑所示〕，有的未见核。

肌浆着色甚浅，由于肌浆在核的两端较多，故在未切到核的细胞中央往往可见浅染区。

图4-4心肌纵切面图4-5心肌横切面

△心肌纤维▲心肌细胞核←闰盘结缔组织▲心肌纤维↑心肌细胞核

〔三〕平滑肌

取材：

狗小肠

染色：

HE

1肉眼观察：

标本呈长条形，染成红色的是平滑肌。

2低倍镜观察：

平滑肌分为两层， 内层为平滑肌的纵切面，纤维呈长梭形，排列紧密、境界不清，核长椭圆形，紫兰色；外层为平滑肌的横切面，肌纤维呈大小不等的圆形红色小块，有的有核〔呈紫色小圆点〕，有的无核。

两层肌之间有少量结缔组织相连接，平滑肌染色较其附近的结缔组织红。

3高倍镜观察：

〔图4-6〕

〔1〕纵切面：

平滑肌纤维呈长梭形，相互交错，密集排列；核位于细胞中央，呈杆状、椭圆形，染色较深；肌浆嗜酸性。

〔2〕横切面：

平滑肌纤维呈大小不等的圆形或多边形，切面较大的细胞中央可见紫蓝色圆形的核，切面较小的细胞未切到核。

图4-6小肠平滑肌切片↖两层平滑肌之间的神经纤维

四、神经组织

多极神经元

取材：

猫脊髓横切面

染色：

HE

1肉眼观察：

脊髓横切面为椭圆形。

灰质居中，着色较红，呈蝴蝶形，有四个突起，两个较粗短称前角〔图5-1↑所示〕，两个较细长称后角〔图5-1△所示〕。

白质在灰质的周围，着色浅红。

图5-1脊髓横切面〔猫〕↑前角，△后角

2低倍镜观察：

在脊髓前角，可见许多大小不一的多极神经元〔运动神经元，图5-2↑所示〕，神经元周围小而圆形的核为神经胶质细胞核。

脊髓中央两侧灰质连接处的圆形小孔为中央管。

选择一个突起较多而又切到细胞核的神经细胞，转换高倍镜仔细观察。

图5-2脊髓前角↑多级神经元胞体

3高倍镜观察：

〔图5-3〕

〔1〕胞体：

较大，呈多角形，伸出数个突起；核位于细胞中央，大而圆、染色浅，呈空泡状，核仁明显；胞质浅红色，内含许多蓝色块状的尼氏体。

〔2〕树突：

可切到一至多个树突根部，由胞体伸出时较粗，逐渐变细，内含尼氏小体。

〔3〕轴突：

只有一个〔不易切到〕。

轴突自胞体发丘、轴突均不含尼氏体，染色浅。

图5-3脊髓前角神经元↑轴突

【实验报告】绘单层柱状上皮彩色结构图