小麦与大豆种子中主要水解酶同工酶特性研究本科论文定稿.docx
《小麦与大豆种子中主要水解酶同工酶特性研究本科论文定稿.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《小麦与大豆种子中主要水解酶同工酶特性研究本科论文定稿.docx（31页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。
小麦与大豆种子中主要水解酶同工酶特性研究本科论文定稿
毕业论文
设计（论文）题目小麦与大豆种子中主要水解酶同工酶特性研究
学院名称
专业（班级）
姓名（学号）
指导教师
系（教研室）负责人
目录
中文摘要1
英文摘要2
1前言3
1.1淀粉酶3
1.1.1α-淀粉酶4
1.1.2β-淀粉酶4
1.1.3淀粉酶的研究进展5
1.2酯酶7
1.2.1酯酶的分类7
1.2.2酯酶的理化性质8
1.2.3酯酶的研究进展8
1.3蛋白水解酶8
1.3.1蛋白酶的分类9
1.3.2蛋白酶的水解特性9
1.3.3植物蛋白酶的研究进展9
2材料与方法11
2.1试验材料11
2.2主要仪器设备11
2.3总体实验流程11
2.4材料处理11
2.5粗酶液的制备11
2.6PAGE电泳及同工酶染色11
2.6.1淀粉酶同工酶染色12
2.6.2酯酶同工酶染色12
2.6.3蛋白水解酶同工酶染色12
2.7pH对淀粉酶同工酶的影响12
2.8淀粉酶同工酶的pH稳定性实验12
2.9温度对淀粉酶同工酶的影响12
2.10淀粉酶同工酶的热稳定性实验12
2.11淀粉酶同工酶对金属离子敏感性实验13
3结果与分析14
3.1小麦与大豆中的淀粉酶同工酶酶谱分析14
3.2小麦与大豆中的酯酶同工酶酶谱分析15
3.3小麦与大豆中的蛋白水解酶同工酶酶谱分析17
3.4pH对小麦种子中淀粉酶同工酶的影响18
3.5小麦种子中的淀粉酶同工酶的pH稳定性实验19
3.6温度对小麦种子中淀粉酶同工酶的影响20
3.7小麦种子中淀粉酶同工酶的热稳定性实验20
3.8小麦种子中淀粉酶同工酶对金属离子敏感性实验21
4讨论22
4.1淀粉酶22
4.2酯酶22
4.3蛋白水解酶23
5结论25
致谢26
参考文献27
小麦与大豆种子中主要水解酶同工酶特性研究
摘要：
本文采用聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）活性电泳技术，分别对萌发过程中小麦和大豆种子中胚芽、胚乳和胚根三大组织部位存在的淀粉酶、酯酶、蛋白水解酶的同工酶图谱进行了研究，并对小麦种子中的淀粉酶同工酶的生化特性进行了分析，主要考察了pH、温度、金属离子敏感性影响及其稳定性因素。
实验结果表明，在小麦种子胚乳中的淀粉酶、酯酶同工酶变化较明显，而蛋白水解酶变化较大的则是在胚芽和胚根当中。
吸涨12h内大豆中的淀粉酶、酯酶、蛋白水解酶同工酶谱带变化差异不明显。
小麦种子中的淀粉酶同工酶生化特性研究显示：
淀粉酶同工酶的最适pH在5.2左右，pH5.0~9.0范围内均具有较好的稳定性；最适温度为40℃，在0℃~50℃大部分淀粉酶同工酶的活性基本上保持稳定；重金属离子Hg2+对淀粉酶同工酶的抑制作用最为强烈，几乎将近100%，其它金属离子Cu2+,Pb2+,Zn2+,Ca2+也不同程度的抑制了淀粉酶的活性。
关键词：
小麦；大豆；萌发；淀粉酶；酯酶；蛋白水解酶
Theresearchonthecharacteristicsofthemajorhydrolysisisoenzymesintheseedsofwheatandsoybean
Abstract：
Theisoenzymesofthethreemajorhydrolysisenzymesi.e.amylase,esteraseandproteaseintheseedsofwheatandsoybeaninthethreemajorpartsi.e.embryo,endospermandradicleduringseedsgerminationhavebeeninvestigatedbythenativePAGE.MeanwhiletheeffectsofpHvalueandtemperatureonamylaseanditsstabilityinwheatseedswerestudiedaswellasthesensitivityofisoenzymestometalions.Theresultsindicatedthatisoenzymesofamylaseandesterasechangedsignificantlyinendospermduringtheprocessofgerminationwhileisoenzymesofproteaseexhibitedsignificantvariationinembryoandradicle.Theisoenzymesofamylase,esteraseandproteasehadlittlevariationduringthefirst12hofimbibitionofthesoybeanseeds.ThestudyonthebiochemicalcharacteristicsoftheisoenzymesofamylaseinwheatseedsshowedthattheoptimumpHvaluewasapproximately5.2andtheenzymaticactivitywasrelativelystableduringpH5.0~9.0.Theoptimumtemperaturewas40℃whilemostoftheamylaseisoenzymeskepttheiractivitiesduring0℃~50℃.HeavymetalHg2+showedthemostseriousinhibitionontheactivitiesofisoenzymesofamylaseandtheiractivitieswerealmosttotallyinhibited.OthermetalionssuchasCu2+,Pb2+,Zn2+,Ca2+,alsoshowedinhibitonontheactivitiesofisoenzymesofamylasetodifferentextent.
Keywords：
wheat;soybean;germination;amylase;esterase;protease
1
前言
同工酶是指能催化同一化学反应，但其酶蛋白本身的分子结构，组成却有所不同的一组酶，是由不同基因或等位基因编码的多肽链，或是由同一基因转录生成不同mRNA翻译的不同多肽链组成的蛋白质。
有关同工酶的文章和出版物很多，早在1970年Shaw等[1]便列出了各种同工酶的染色方法，Rothe等[2]和Hebb等[3]对聚丙烯酰胺凝胶同工酶的染色方法进行了综述，Caál等[4]在书中详诉了各类同工酶，包括脱氢酶，过氧化物酶类，转移酶类，还原酶类，水解酶类，磷酸酶类，多肽酶类，蛋白酶类和裂解酶类的染色原理和方法。
Hames等[5]则列示了近二百中同工酶染色方法的文献。
同工酶谱在基础研究和农，林，牧，副，渔，医，药，食品分析中应用十分广泛，是一种非常有利的检测方法。
常规聚丙烯酰胺凝胶电泳的重要特点是在电泳过程中可以保持蛋白质的生物活性，包括酶活性，这就给常规聚丙烯酰胺凝胶电泳的同工酶检测创造了最基本的条件。
酶是生命活动必不可少的，因此，有关酶的性质、活性、结构、功能、分离等一直是酶学和分子生物学家十分感兴趣的工作。
植物组织中的蛋白质（包括酶蛋白），都是基因表达的产物。
植物在发育过程中，所含的蛋白质的种类和比例都不相同，同一种酶的同工酶也有所不同，因此分析同工酶谱是认识基因存在和表达的一种工具，在植物的种群、发育及杂交遗传的研究中都有一定的重要性。
有活力的种子，当其受潮吸水后，开始进行呼吸、物质合成及其它代谢活动，经过一定时期，种胚突破种皮，露出胚根的过程，称为萌发。
萌发在本质上，是将胚轴恢复到静止或休眠期间暂时停止的连续生长状态，开始进行新的遗传程序即基因的相异转录[6]，了解此过程中各类水解酶如何表达与调控具有重要的生物学意义。
在胚形成幼苗，其自身能进行光合作用之前，萌发所需要的物质和能量完全来自于贮存物质的氧化分解与供给[7,8]。
萌发过程中贮存物质的分解需要大量水解酶的参与。
经典的种子萌发理论认为，在正常的环境条件下，种子由特定部位渗透吸水，接着胚开始萌动合成GA向糊粉层运输，刺激糊粉层合成并分泌水解酶类，将贮藏物质水解成小分子物质供胚生长，而在种子萌发过程中合成与分泌水解酶精确的组织/细胞定位目前还不太清晰。
因此本文拟采用分辨率较高的聚丙烯酰胺凝胶电泳将酶蛋白进行分离，然后用相应的染色方法将其显示来对植物种子中的主要三种水解酶类淀粉酶、酯酶、蛋白水解酶进行同工酶谱分析及其生化特性研究，为以后相关的研究建立一定的基础。
1.1淀粉酶
淀粉酶是水解淀粉和糖原酶类的统称，广泛存在于动植物和微生物中。
按照水解淀粉方式的不同，主要的淀粉酶可以分为四类：
α-淀粉酶、β-淀粉酶、葡萄糖淀粉酶和解枝酶或异淀粉酶。
植物中存在的淀粉酶，特别是萌发后的禾谷类种子，主要存在的是α-和β-淀粉酶。
1.1.1α-淀粉酶
α-淀粉酶的全称为α-1,4葡聚糖-4-葡聚糖水解酶（EC3.2.1.1），作用于淀粉时，可从分子内部切开α-1,4糖苷键而生成糊精和还原糖，先后次序没有一定的规律，是杂乱的，由于产物的末端葡萄糖残基C-1碳原子为α-构型，故得名。
糖苷键水解过程中，相邻葡萄糖单位间的C1-O-C4键断裂，加上一个水分子，断裂处发生在C1-O键上，由于水解时，作用于长链比短链更有活性，所以最初阶段水解速度很快。
把庞大的淀粉分子迅速断裂成小分子，此时淀粉浆得黏度也随之急剧降低，失去黏性，称为液化。
液化作用的主要产物事糊精，随水解继续进行，糊精由大逐渐变小，淀粉遇碘的颜色反应也由开始的蓝色逐渐变为紫、红、棕色，当小到一定程度时，遇碘不再变色。
除遇碘显色的变化外，还原性也会随分子变小而升高。
在快速水解阶段完成之后，酶对小分子的水解活性明显降低，进入一个缓慢水解过程。
不同来源的α-淀粉酶其性质有很大差别，主要来源于枯草杆菌、地衣芽孢杆菌、淀粉液化芽孢杆菌等微生物和其他一些动植物组织。
目前，α-淀粉酶已经广泛用于食品、发酵、谷物加工、纺织、造纸、医药、轻化工业、石油开采等各个领域。
α-淀粉酶通常在pH5.5-8.0之间较为稳定，大部分α-淀粉酶最适温度为50℃到60℃，分子量范围是15600-139300Da，通常为45000-6000Da。
1.1.2β-淀粉酶
β-淀粉酶（EC3.2.1.2）又称淀粉-1,4麦芽糖苷酶，是淀粉酶类的一种，广泛存在于大麦、小麦、甘薯、大豆等高等植物以及芽孢杆菌属等微生物中。
β-淀粉酶作用于淀粉时，可从α-1,4糖苷键的非还原性末端顺序切下麦芽糖单位，一旦遇到α-1,6糖苷键的分支点，就不再具有水解能力，因此，当以β-淀粉酶分解支链淀粉时，直链部分生成麦芽糖，而分解点附近及内侧因不能分解而残留下来，产物则为麦芽糖及大分子β-极限糊精。
由于该酶作用于底物的同时还可以发生转位反应，使产物有α-型转变为β-型，故称为β-淀粉酶。
不同来源的β-淀粉酶的性质是不同的，如表1所示：
表1几种高等植物β-淀粉酶的酶学特性
β-淀粉酶的性质
β-淀粉酶的来源
甘薯
大豆
小麦
大麦
最适pH
5.3
5.2
5.0~6.0
5.5~6.0
pH稳定范围
5.0~5.8
4.5~9.2
4.5~8.0
—
等电点
5.1
6
6
4.8
淀粉分解率/%
63
67
65
62
水解主要产物
麦芽糖
麦芽糖
麦芽糖
麦芽糖
不同植物来源的β-淀粉酶分子量大小从53~64KD不等，最适温度也从30~60℃有很大差别。
就目前所知，谷物来源的β-淀粉酶由于转录后的不同修饰机制会产生许多同工酶，他们的活性都不受任何辅酶、金属离子和辅基的影响，而且它们大都含有一个巯基基团，这个巯基基团虽然不是β-淀粉酶的活性位点，但很多的研究表明，它的存在对于β-淀粉酶的活性是必需的。
在高等植物中，存在两种不同活力的β-淀粉酶，这两种活力的β-淀粉酶分别存在于植物不同的组织器官中：
一种是在禾本科植物（如小麦、大麦和黑麦等）的胚乳中以高活力存在的β-淀粉酶，当这类植物的种子在发芽的时候，β-淀粉酶的活力会显著提高；另一种是以一种相对活性较低的形势普遍存在于植物的各个组织器官中的β-淀粉酶。
这两种形式的β-淀粉酶虽然在抗原上相似，但在其它方面还是有较多的区别的，而且这两种β-淀粉酶的生成方式也有所不同，有研究者通过分析比较，推测前一种β-淀粉酶可能是后一种β-淀粉酶的基因演变而成的。
β-淀粉酶在高等植物体内以“游离”和“结合”态两种形式存在。
用水提法可以将高等植物中的“游离”态β-淀粉酶提取出来，而另一部分以“结合”态形式存在的β-淀粉酶的提取需要还原剂或者蛋白水解酶的帮助，这种“结合”态β-淀粉酶由于和种子种的其它杂蛋白（如蛋白Z和麦谷蛋白等）结合而成为复杂的不溶物质。
这两种形式的β-淀粉酶在大麦种子种占所有蛋白含量的1%左右。
β-淀粉酶主要是用于生产麦芽糖和啤酒工业外加酶法糖化等领域。
利用诸如多粘芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌等微生物产生的β-淀粉酶糖化已经酸化或α-淀粉酶液化过的淀粉原料，可以生产麦芽糖含量60%~70%的高麦芽糖浆。
1.1.3淀粉酶的研究进展
淀粉是最重要的和广泛贮藏在种子中的碳水化合物，尤其是贮存物质主要为淀粉的淀粉型种子如小麦，水稻，玉米等，淀粉酶是其萌发过程中重要的水解酶类之一。
目前，关于淀粉的生物合成与降解以及淀粉酶在这些过程中的生物功能与生理生化意义已有相当多的文献报道[7,9,10,11,12]。
淀粉的降解代谢是萌发过程的关键步骤。
已经知道，淀粉有两条降解途径。
其一为水解，一般认为，淀粉的降解代谢主要依靠α-淀粉酶（EC3.2.1.1）、β-淀粉酶（EC3.2.1.2）、脱分支酶（EC3.2.1.41）和α-葡萄糖苷酶（EC3.2.1.20）的协同作用。
在α-淀粉酶的作用下，直链淀粉水解为葡萄糖、α-麦芽糖与α-麦芽丙糖；支链淀粉除了水解为上述产物外另有α-极限糊精；α-麦芽丙糖在α-淀粉酶的进一步作用下，水解为α-麦芽糖。
在β-淀粉酶的作用下，直链淀粉可以被水解为β-麦芽糖；支链淀粉被水解为β-麦芽糖与β-极限糊精。
α-麦芽糖与β-麦芽糖之间可以相互转换，并在α-葡萄糖苷酶或麦芽糖酶的作用下被水解为葡萄糖。
另外，极限糊精在脱分支酶、α-葡萄糖苷酶、极限糊精酶的作用下彻底水解为葡萄糖。
另一条降解途径为磷酸化途径，直链淀粉或支链淀粉在有机磷酸（Pi）的存在下，被淀粉磷酸化酶水解葡萄糖-1-磷酸和极限糊精。
一般认为，是α-淀粉酶首先直接水解完整的淀粉粒，释放出糊精，然后由β-淀粉酶、脱分支酶和α-葡萄糖苷酶等3种酶将其水解为麦芽糖和葡萄糖。
因此，α-淀粉酶通常被认为是作物种子萌发过程中的关键酶[13]。
以前的研究结果表明，在淀粉消化中不只有一个α-淀粉酶，在用赤霉素处理的离体糊粉层中已经发现了7个α-淀粉酶的同工酶，它们的分子量大致相当，在45，000左右[13]。
在淀粉消化中也有β-淀粉酶的参与。
从大麦淀粉胚乳中已分离出9种β-淀粉酶同工酶，其中4种同工酶分子量在53-64kD左右，其它的同工酶的分子量则为其倍数。
β-淀粉酶作为淀粉外切酶，它从淀粉的非还原端开始，按顺序分解α-1,4-糖苷建为葡萄糖，在淀粉降解代谢中起作用[12]。
如单子叶植物中β-淀粉酶定位于胚乳细胞中，在其他组织中少有分布。
当种子萌发时，β-淀粉酶同其他相关酶一起完成淀粉的降解[14]。
有人认为尽管β-淀粉酶已被定位于质体中[15]，但是实际上β-淀粉酶大部分分布于质体之外[12,16,17]且离体实验表明，β-淀粉酶只有在预热处理增加淀粉溶解的情况下或与其他酶共同作用下，才能降解淀粉粒[12]。
虽然β-淀粉酶部分定位于质体内[15]，但是只有定位于质体之外的β-淀粉酶具有活性[17]。
Zieglar认为β-淀粉酶在液泡中亦有分布，且在多糖中起作用[11]。
β-淀粉酶的表达受可溶性糖的诱导和调控，但调控机制较为复杂，在不同植物种类中，其调控程度、性质和机制存在一定的差异。
近年来，RonJ、TostsukaA等对拟南芥、大豆内的β-淀粉酶进行研究[18,19]。
在拟南芥突变体上的研究表明，β-淀粉酶定位于韧皮部的筛管中[20]，也受高含量水平的可溶性糖的诱导[21,22]。
由于麦谷蛋白可以包裹淀粉粒形成一种天然的屏障，导致了酶与底物的区隔化分开，使淀粉粒在发育过程中免遭淀粉酶（包括α和β）的直接降解。
大量的研究表明，α-淀粉酶和β-淀粉酶在种子萌发过程中淀粉的完全水解起着不同的生理生化功能。
β-淀粉酶对淀粉的作用与α-淀粉酶相比，有以下几点不同：
基本上不进行液化，仅仅增加还原性；作为一种还原性物质，不生成葡萄糖只生成麦芽糖；由奇数葡萄糖残基构成的直链部分，最后除麦芽糖外，可生成麦芽三糖（三个葡萄糖残基呈α-1，4结合的三糖）。
普通的淀粉可被β-淀粉酶分解60%左右。
β-淀粉酶和α-淀粉酶分解淀粉型种子中的淀粉，各自的生理意义尚不清楚。
传统的观点认为，淀粉粒的侵蚀则完全由α-淀粉酶进行的。
从分解速度来看，在自然状态下参与淀粉分解的酶也主要是α-淀粉酶，β-淀粉酶只起辅助作用。
β-淀粉酶除了在发酵、制糖等工业具有广泛的应用外，也是酶的多态性、蛋白质翻译后修饰、同工酶不同表达等基础研究的模式酶。
另外，由于β-淀粉酶富含赖氨酸，并与某些抗逆反应有关，因此提高β-淀粉酶的活性/含量也已开始成为作物遗传改良的重要课题[23,24]。
1.2酯酶
酯酶存在于植物各部位和不同发育时期的细胞中，是多种碳酸酯的水解酶，底物特异性不强,为一复杂酶系，一般为单体酶。
业已证明，酯酶主要参与植物异化作用，是与磷酸代谢密切相关的酶，酯酶含量的增加意味着磷代谢活动的加强。
而且由于它的遗传学较为复杂，所以，酯酶一般被作为研究发育时期基因表达和调控差异的一种标志酶。
酯酶（Esterase,E.C.3.1.1.,简称EST）同工酶是能水解酯键的一组酶，属于水解酶类，对酯代谢和生物膜的结构与功能具有一定的作用。
在分类学方面的资料表明，除肌浆蛋白、LDH同工酶外，EST在物种内也较稳定，具有物种特异性。
酯酶是具有多态性的一组同工酶，它是由染色体上不同的基因或共显性等位基因译制的，是直接的基因产物，在种属鉴定和遗传变异的研究中都很重要。
酯酶同工酶并非生理性修饰酶带，以它作为遗传指标是可靠的。
许多研究证明，在形态分类上存在的种间差异，在酯酶同工酶酶谱上同样得到了反映，尤其是对形态上近似的种的区别和分类，酯酶同工酶可为系统学研究提供一项科学的鉴别指标。
酯酶主要分布在细胞质的球状颗粒内。
由于它们能水解非生理存在的酯类化合物，包括一些药物，因此认为可能对植物有去毒作用。
酯酶也可以分解α－萘酚或吲哚酚的酯，其分解产物与重氮盐（常用坚牢蓝RR盐）发生重氮反应，形成不溶性的偶氮色素，由此即可将该酶在凝胶中显色定位。
1.2.1酯酶的分类
目前酯酶的分类比较混乱。
有时所用的术语仅描述某些反应，如“磷酸酯酶”水解P-O-C键，“酰胺酶”水解酰胺键，“羧酸酯酶”水解酯键。
在早期的文献中，Augustinsson（1961）基于水解的底物把酯酶分成三类：
（1）脂族酯酶（水解脂族酯底物）；
（2）芳族酯酶（水解芳族酯底物）；（3）胆碱酯酶（水解胆碱酯）。
事实上这种分类方法对脂族酯酶和芳族酯酶很难区分。
在该分类方法中最常用的一个标准是非变性电泳的不同迁移率，例如桃蚜的酯酶E1-E7[25]和果蝇的酯酶Est2和Est5[26]。
Aldridge（1953）则根据酯酶与有机磷的相互作用把酯酶分为三类：
（1）A-酯酶，这类酶能耐受有机磷，并把它们作为底物进行水解；
（2）B-酯酶，这类酶对对氧磷等有机磷很敏感，能被这些有机磷抑制；（3）C-酯酶，既不被有机磷抑制，又不能水解这些有机磷。
1.2.2酯酶的理化性质
不同的酯酶组分具有不同的分子量、等电点和酶学活性，变化比较大。
分子量：
不同生物产生的酯酶的分子量差异很大，即使同酶系中的同一类酶也有很大的差异。
一般磷酸酯酶的分子量较小，如蕹菜类囊体膜磷酸酯酶的分子量为149000KD[27]，而人脑及红细胞膜乙酰胆碱酯酶[28]的分子量大约在66000KD。
等电点：
等电点是蛋白分子的重要理化特征。
酯酶酶系中各组分的等电点，随生物来源、培养条件的变化而差别较大。
最适pH：
目前很多的研究表明，酯酶一般为中性蛋白，其最适pH一般都在中性6.5~7.5范围内，其中许多动物、微生物酯酶的最适都接近pH7.0，人脑及红细胞膜乙酰胆碱酯酶[28]的最适pH7.5，由此也说明该酶适宜于中性介质中应用。
1.2.3酯酶的研究进展
酯酶在食品、皮革、医药和洗涤剂等行业中均有广泛应用[29]。
随着酶学的研究进展，酯酶的众多特性被发现，如它们在有机相中可以完成酯化、转酯和酯交换等众多反应，而且其中的大多数反应具有不对称选择性，可以专一性用于制备许多利用化学法难以合成的的手性化合物（如液晶、光学活性药物和农药等）及其前体。
另外，酯酶催化的反应还具有反应条件温和、反应介质的选择性大、产物的分离纯化容易及酶本身易于回收等优点[30]。
因此与酯酶有关的课题成为当今应用酶学研究的热点之一。
国外对酯酶基因的克隆研究很活跃，已有几种微生物和抗性昆虫酯酶基因得到克隆和表达，并证实有的酯酶参与半纤维素的降解[31]，有的参与芳香烃类化合物的降解代谢[32]，有的在有机合成中发挥重要作用[33]。
而国内这方面的研究起步较晚。
RalstoniaeutrophoCH34是酯酶基因供体菌，它能利用苯甲酸、苯胺、酯类化合物以及内酯类化合物等作为唯一碳源生长，说明该菌可能含有酯酶或其它水解酶，宋水山等（2001）从RalstoniaeutrophoCH34的基因文库中筛选酯酶基因，并对其进行了克隆和测序。
1.3蛋白水解酶
蛋白质水解是生物体内蛋白质自然更新的一个重要代谢过程，在这一代谢中蛋白水解酶起着重要的作用。
蛋白水解酶不仅在蛋白质的降解过程中起着重要作用，而且还与细胞分化及生物的应激反应等密切相关，在生物的生长、发育、抗逆和生殖过程中起重要作用。
蛋白酶属于酰胺酶类，既是分解CO与NH－基之间酰胺键的酶，能催化分解蛋白质，有能催化蛋白质的产物水解成氨基酸。
广泛存在于动物内脏、植物茎叶或果实和微生物种，已经在皮革、毛纺、丝绸、医药、食品、酿造等各个领域得到广泛的应用。
小麦等一类禾谷类植物中存在多种蛋白酶，如有在pH5下分解蛋白酶的为多肽蛋白酶；pH7下分解多肽为氨基酸的多肽酶和pH7.8下分解二肽为氨基酸的二肽酶等。
1.3.1蛋白酶的分类
蛋白酶的种类繁多，按蛋白酶水解蛋白质的方式可分为内肽酶、羧肽酶、水解蛋白质或多肽中酯键和水解蛋白质或多肽酰胺键等种类蛋白酶；按蛋白酶的来源可以分为动物蛋白酶、植物蛋白酶和微生物蛋白酶三种；按蛋白酶作用时的最适pH，可分为酸性蛋白酶，中性蛋白酶和碱性蛋白酶三种；而目前比较流行的是按蛋白酶的活性中心和最适pH进行分类，根据这一分类
升级会员 