CQ11逆转多药耐药人胃癌细胞株对多柔比星的耐药文档格式.docx

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、和　mol/L的CQ11分别使DOX对SGC7901/VCR细胞的敏感性分别增加到倍（）、倍（）和14倍（P）。

DOX蓄积实验表明，CQ11能显着增加SGC7901/VCR细胞内DOX蓄积，而对SGC7901细胞内DOX蓄积无明显影响。

结论：

通过增加细胞内DOX蓄积量，CQ11在体外能有效逆转SGC7901/VCR细胞对DOX的耐药性

【关键词】多药耐药;

氯喹;

胃癌;

逆转剂

肿瘤多药耐药（multidrugresistance,MDR）指肿瘤细胞一旦对某种化疗药物产生耐药性，同时对其它结构上无关、作用机理各异的抗肿瘤药物也产生交叉耐药性［1］。

MDR是一种独特的广谱耐药现象，是导致化疗失败的重要原因，许多天然来源的抗肿瘤药物如长春新碱（vincristine,VCR）、紫杉醇等及蒽环类抗癌抗生素如多柔比星（doxorubicin,DOX）、柔红霉素都极易发生MDR［1~3］。

MDR主要的耐药机理为多药耐药基因mdr1扩增及其蛋白产物P-糖蛋白（permeabilityglycoprotein,Pgp）过表达。

作为一个ATP依赖性的药物转运泵，Pgp能主动将疏水性抗肿瘤药物泵出胞外,从而减少细胞内药物蓄积,增加药物外排［3］。

MDR逆转剂，如维拉帕米和环孢菌素A，能与Pgp结合，抑制Pgp的药物外排功能，增加耐药细胞内抗肿瘤药蓄积，从而恢复细胞对抗肿瘤药的敏感性。

然而，大量的临床研究结果表明，上述肿瘤MDR逆转剂由于体内毒性大，体内难以达到有效逆转浓度［3］。

因此积极寻找高效低毒的新型MDR逆转剂，已成为肿瘤MDR研究的热点。

氯喹CQ11

图1氯喹和氯喹衍生物CQ11的化学结构

CQ11是以抗疟药氯喹的结构母核为基础,经侧链改造而获得的新化合物（化学结构见图1），由本课题组合成。

本研究以耐VCR人胃癌MDR细胞株SGC7901/VCR为体外模型，研究CQ11对SGC7901/VCR细胞的体外MDR逆转效应。

1材料与方法

　药物和试剂

CQ11由本课题组自行合成,以二甲亚砜（dimethylsulfoxide,DMSO）溶解。

MTT和DOX购自Sigma公司。

　细胞培养

SGC7901细胞和SGC7901/VCR细胞均由本室保存［4］，细胞均用含10%胎牛血清的RPMI1640培养基，在37℃、5%CO2孵箱中培养。

SGC7901/VCR在含mol/LVCR培养液中稳定生长,在正式实验前2周撤去VCR。

　细胞存活率测定

采用MTT法测定细胞毒作用［4］。

取生长旺盛SGC7901和SGC7901/VCR细胞，稀释后接种于96孔平底培养板中，置CO2培养箱中培养。

接种24h后分别加入不同浓度的DOX和/或CQ11，使液体总量达到每孔200μL;

继续培养72h，弃去培养液，每孔加MTT10μL（g/LinPBS）,培养4h,弃去MTT，每孔加DMSO150μL,在微孔板震荡器上振荡10min,成色产物溶解后用酶标仪测570nm处吸光度值。

以不加药的瘤细胞组为对照，求给药组IC50，并计算耐药逆转倍数（reversalfold,RF）。

　细胞内DOX蓄积实验

DOX蓄积实验参照我们以往的报道进行［2］。

简述取生长旺盛的SGC7901或SGC7901/VCR细胞,调节其浓度至×

106/mL,加入DOX　μmol/L和不同浓度的CQ11（分别为,,,,,　和10μmol/L）,在37℃、5%CO2孵箱中培养60min,取上述溶液mL,100×

g离心5min,冷PBS洗2次,加入mL50%乙醇-mol/L盐酸溶液,抽提2h,100×

g离心10min,收集上清,在荧光分光光度计上测DOX的荧光强度（激发波长和发射波长分别为488nm和590nm）。

在盐酸-乙醇溶液中加入一系列已知浓度的DOX作为标准溶液,分别测定其荧光强度,建立DOX浓度-荧光强度标准曲线。

　统计学处理

实验数据以均数±

标准差表示，显着性检验采用Student‘st检验，P被认为差异有统计学意义。

　　2结果

　CQ11的细胞毒作用

CQ11对SGC7901和SGC7901/VCR细胞的IC50分别是32±

μmol/L和34±

μmol/L,10μmol/LCQ11对SGC7901和SGC7901/VCR细胞无细胞毒作用。

　CQ11对SGC7901/VCR细胞的耐药逆转效应

如表1所示，SGC7901/VCR细胞对DOX的耐药程度是SGC7901细胞的倍。

对SGC7901/VCR细胞,CQ11具有显着的耐药逆转作用;

　μmol/LCQ11即具有明显的耐药逆转效应,　μmol/LCQ11使DOX对SGC7901/VCR细胞IC50从±

μmol/L降低到±

mol/L（耐药逆转倍数为14倍），显示CQ11对SGC7901/VCR细胞的MDR具有显着的逆转作用;

　μmol/LCQ11使DOX对SGC7901细胞IC50从±

mol/L（增敏倍数为倍）,表明在SGC7901细胞CQ11有轻度的DOX增敏作用。

表1CQ11增强DOX对SGC7901/VCR和SGC7901注：

与未加CQ11的SGC7901细胞比较，*;

与未加CQ11的SGC7901/VCR细胞比较，#。

　CQ11对细胞内DOX蓄积的影响

DOX蓄积实验显示,SGC7901细胞DOX蓄积量是SGC7901/VCR细胞的倍。

加用10μmol/LCQ11时，SGC7901细胞DOX蓄积量无明显影响。

CQ11能剂量依赖性地增加SGC7901/VCR细胞内DOX蓄积量：

加用、、和10μmol/L的CQ11，分别使SGC7901/VCR细胞内DOX蓄积量增加到倍、倍、倍和倍。

与未加CQ11的SGC7901细胞比较,*;

与未加CQ11的SGC7901/VCR细胞比较,#

图2不同浓度的CQ11对SGC7901和SGC7901/VCR细胞内DOX蓄积的影响

3讨论

药物构效关系研究发现，MDR逆转剂具有一些共同的结构特征：

①具有多个芳香环结构；

②具有叔氮原子，且与芳香环的距离要两个碳原子以上；

③必须具有亲脂性［5］。

依据这些研究成果，对现有的逆转剂进行结构改造，以寻找高效低毒的逆转剂，已成为目前MDR逆转剂研究的重要方向。

早在上世纪80年代末体外研究已经发现氯喹、奎宁和奎尼丁等抗疟药在体外能够与Pgp结合并部分逆转肿瘤耐药［6］。

本研究以抗疟药氯喹的结构母核为基础合成了21种氯喹衍生物，以SGC7901/VCR为体外细胞模型，采用MTT方法测定氯喹衍生物和DOX作用下SGC7901/VCR细胞的存活率,发现其中5种衍生物具有不同程度的肿瘤MDR逆转作用，而CQ11是MDR逆转作用最强的氯喹衍生物。

SGC7901/VCR细胞是采用递增DOX浓度的方法，将SGC7901细胞在含浓度不断递增的DOX的培养基中连续培养所获得的耐药细胞株［4］。

多个独立研究小组的研究结果报告均表明，SGC7901/VCR细胞是典型的过表达Pgp的肿瘤MDR细胞株，对DOX表现交叉耐药，已被作为体外细胞模型成功地用于肿瘤MDR逆转实验［4,7~8］。

本研究结果显示，SGC7901/VCR细胞对DOX的耐药程度是SGC7901细胞的倍；

、和　mol/L的CQ11使DOX对SGC7901/VCR细胞的敏感性分别增加到倍、倍和14倍。

DOX蓄积实验显示，mol/LCQ11能使SGC7901/VCR细胞内DOX蓄积量恢复到接近SGC7901细胞水平，提示CQ11能抑制Pgp的DOX外排功能。

上述结果表明，CQ11能通过抑制Pgp的DOX外排功能、增加SGC7901/VCR细胞内DOX蓄积量，逆转SGC7901/VCR细胞对DOX的耐药性。

更重要的是，μmol/LCQ11对SGC7901/VCR细胞的MDR即产生明显的耐药逆转效应，而10μmol/L的CQ11对SGC7901和SGC7901/VCR细胞没有明显的直接细胞毒作用。

总之，我们的研究表明，通过抑制Pgp介导的药物外排，增加细胞内DOX蓄积量，非细胞毒剂量的氯喹衍生物CQ11在体外能有效逆转SGC7901/VCR细胞对DOX的耐药性，提示CQ11是一个有开发前途的多药耐药逆转剂。

下一步作者将深入研究CQ11逆转MDR的作用机制。

【参考文献】

1吴达龙,黄丰，吕焕章，等.乳腺癌耐药蛋白-肿瘤多药耐药研究新进展.癌症，2003，22（4）:

441～444.

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（1）:

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3NobiliS,LandiniI,GiglioniB,etal.Pharmacologicalstrategiesforovercomingmultidrugresistance.CurrDrugTargets,2006,7（7）:

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5吴大龙，吕焕章，黄丰，等.本芴醇衍生物LY980503逆转多药耐药肿瘤细胞株MCF/ADM对阿霉素的耐药性.中国药理学与毒理学杂志，2002，16（3）:

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