卫生理化检验技术期末复习.docx

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卫生理化检验技术期末复习

第一部分：

水质理化检验

1、水污染定义：

在人类的社会活动和自然因素的影响下，给各种水体环境带来杂质，当这些杂质达到一定程度就会发生水质变化，给人类环境和水的利用产生不良影响，就称水污染。

2、水质：

水及其中杂质所共同表现出来的综合特征。

3、水质指标：

衡量水中杂质的具体尺度。

各种水质指标表示水中杂质的种类和数量，由此可判断水质的优劣和是否符合要求。

第一节、三氮的测定

NH3-N、NO2--N、NO3--N总称为三氮，主要来自含氮有机物和粪便污染，以及特殊工业污水。

随着无机化作用的进行，水中有机氮化合物不断减少，微生物的营养素不断减少，水中致病性微生物也逐渐减少，因此三氮的含量多少常作为水体有机污染程度以及自净能力的指标。

无机化作用：

水中复杂的含氮有机物在微生物和氧气的作用下转化为简单无机物的过程。

NH3（NH4+）→NO2－→NO3-

+--新近（污染情况水体自净能力）

-+-不久

--+很久

+++连续

一、NH3－N氨氮

氨氮在水中主要以两种形态存在NH4+和NH3。

一般要求饮用水中的氨氮不得超过0.02mg/L。

1、纳氏试剂比色法

（1）原理：

在碱性溶液中氨与纳氏试剂碘化汞钾生成棕黄色的碘化氧汞胺，反应产物在15-30分钟内稳定，颜色深浅与氨氮的含量成正比。

（2）特点：

本法是用于无色透明、氨氮含量较高的水样，本法准确、操作简便、但抗干扰能力差。

2、样品前处理--蒸馏法

a.原理：

利用在碱性条件下NH3易挥发，通过蒸馏使其与水中共存成分分离而消除干扰，再进行比色法检测。

b.特点：

本法可分析有色浑浊干扰成分多的水样，也可用来分析成分复杂的工业废水和生活污水。

c.操作：

加热蒸馏，稀酸溶液做吸收液。

水样调至中性

水样（25.0ml）标准系列

↓＋水至25ml

↓＋酒石酸钾钠

↓＋纳氏试剂

混匀，放置15分钟，比色测定

d.注意事项：

a采样后尽快分析。

如需保存加硫酸使PH1.5～2于4℃下保存.b余氯加Na2S2O3除去。

c水硬（Ca2＋Mg2＋）加酒石酸钾钠溶液络合。

d蒸馏时PH应为7.4，加缓冲溶液。

e加入标准溶液后即加水稀释混匀，再加其它试剂，防止生成沉淀。

f测定时，避免在同一环境内使用浓氨水。

e.计算：

T：

水样颜色相当于标准溶液的体积（ml）

C：

标准溶液的浓度（ug/ml）

V：

取样量（ml）

二、NO2-－N

是含氮有机物分解的中间产物，水中检出亚硝酸盐氮，说明污染有机氮化合物正在分解，水体在不久前受到污染，结合NH3-N、NO3--N，可推测水体污染和自净程度。

饮用水NO2--N不得超过0.001mg/L

比色法

1、原理：

在稀盐酸溶液中，亚硝酸与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，生成重氮化对氨基苯磺酸，后者再与盐酸甲萘胺偶合产生紫红色偶氮染料，在540nm处比色测定亚硝酸盐的含量。

2、操作：

处理后水样调至中性标准系列

↓＋水至50ml

↓＋对氨基苯磺酸混匀放置3分钟

↓＋醋酸钠缓冲溶液混匀

↓＋盐酸甲萘胺混匀放置10分钟

比色测定

3、注意事项：

（1）有色金属离子干扰测定，用Al（OH）3絮凝法，过滤除去悬浮物。

（2）重氮化最佳PH1.4，偶合化最佳PH2.0～2.5，用醋酸钠缓冲溶液来维持。

（3）显色速度与温度有关，温度低于15℃时，可适当进行水浴加热。

染料的稳定性也与温度有关，温度低，显色慢褪色也慢；温度高，显色快褪色也快。

（4）试剂加入次序应严格遵守操作步骤，试剂的加入要间隔合适的反应时间。

三、NO3-－N

是水中含氮有机物无机化作用的最终产物，如果水中只有NO3--N，有机氮、NH3-N、NO2--N都不存在，则表示污染的有机物已分解完全。

但NO3--N含量过高，对人体健康有害，可引起儿童血液中变性血红蛋白增加。

有些国家规定，饮用水中NO3--N不得超过20mg/L。

1、麝香草酚分光光度法

（1）原理：

硝酸盐与麝香草酚在浓硫酸溶液中生成硝基酚，在碱性溶液中发生分子重排而变为黄色化合物，415nm处比色测定。

（2）注意事项：

a去除颜色：

用Al（OH）3絮凝法，过滤除去悬浮物。

b去处氯化物：

AgNO3→AgClCl－＋NO3－→NO＋NOCl

c扣除亚硝酸盐的影响：

加高锰酸钾

NO2－＋H2SO3→NO＋HNO3

2、二磺酸酚比色法

浓硫酸与酚作用生成二磺酸酚，二磺酸酚在无水条件下与硝酸根作用，生成硝基二磺酸酚，中和至碱性，后者发生分子重排而变为黄色化合物，410nm处比色测定。

3、镉柱还原法

4、紫外分光光度法

第二节、耗氧量的测定

一、概述

1、定义：

COD（chemicaloxygendemand）是指水中还原性物质在规定的条件下，被强氧化剂氧化，所消耗氧化剂相当于氧的量。

结果以O2mg/L表示。

用于表明水中有机物的含量，是评价有机物污染的指标之一。

水中有机物包括碳水化合物、蛋白质、油脂、氨基酸、脂肪酸、酯类等，其来源一是动物或植物的残骸分解，二是来自排入水体的生活污水和工业废水。

二、测定方法

1、酸性KMnO4法

（1）原理：

水中还原性物质在酸性条件下，加热至沸时被KMnO4氧化，剩余氧化剂用H2C2O4还原，根据KMnO4的量求COD。

（2）操作步骤：

100.0ml水样置于处理锥形瓶＋H2SO4+10.0mlKMnO4

↓＋加热至沸10min

↓＋10.0mlH2C2O4

↓＋KMnO4→v1

↓＋10.0mlH2C2O4

↓＋KMnO4→v2

计算0.01N（N1VI=N2V2）

（3）注意事项：

a测定要严格按操作条件进行。

b反应要维持一定的酸度，以[H＋]0.43M为宜。

太高KMnO4自动分解；过低反应速度太慢。

酸度只能用H2SO4调节。

c水样消耗KMnO4为原加入量的一半左右，如果水样COD值较高（即高锰酸钾的特征色很快消失）。

则需将水样稀释后测定，稀释水样要做空白测定。

由于稀释倍数不同COD值不同。

因此测定结果要注明稀释倍数。

d要测平行样eCl-浓度大于300mg/L有干扰

2、碱性KMnO4法

（1）原理：

水样的还原性物质在碱性条件下，用KMnO4氧化，过量的KMnO4在酸性条件下用H2C2O4还原。

（2）操作步骤：

由于碱性条件下KMnO4氧化力低，可防止Cl－干扰。

酸性CODMn大于碱性CODMn。

3、K2Cr2O7

一定量的水样在强酸性条件下，K2Cr2O7将有机物氧化，剩余的氧化剂K2Cr2O7以邻菲罗啉为指示剂，用硫酸亚铁铵回滴，由消耗氧化剂K2Cr2O7的量求COD。

4、以上三种方法的比较

方法

酸性KMnO4法

碱性KMnO4法

K2Cr2O7

氧化剂

KMnO4

KMnO4

K2Cr2O7

反应

条件

H＋＋KMnO4

沸水浴30分钟

OH－＋KMnO4

加热10分钟

H2SO4AgSO4

回流2小时

适用

范围

清洁水Cl－

小于300mg/L

清洁水Cl－

大于300mg/L

污水及工业废

水

特点

简单,分析时间短,

重现性好,大量Cl－

有干扰,氧化不完全

50%左右

能消除大量的

Cl－干扰，氧

化更不完全

＜10%

费事，操作繁

杂，重现性好

氧化完全

95～100%

第三节、挥发性酚的测定

一、酚的分类

挥发性酚：

是指蒸馏时能随水蒸气一起挥发出的，多数沸点小于230℃的酚。

结果以C6H5Omg/L计，多数是指一元酚类。

二、苯酚特性

弱酸性、易氧化、易吸附、易被微生物分解，mp42℃，bp181.7℃

四、测定方法

1、水样的采集与保存

硬质玻璃瓶，采样后尽快分析，加保存剂后也只能在4℃不超过24h。

保存方法：

a、＋NaOH使PH<11→钠盐，降低挥发性，抑制微生物分解。

b、＋H3PO4→PH=4，加CuSO4抑制微生物

2、样品前处理

水蒸气蒸馏：

全玻蒸馏器

250ml水样＋H3PO4→PH=4＋CuSO45ml蒸馏收集250ml馏液（各种酚馏出的速度相差很大）

3、溴化滴定法

a.原理：

在含过量溴的溶液中，酚与溴反应生三溴苯酚剩余的溴与碘化钾作用，释放出游离碘，再以硫代硫酸钠标液滴定，根据硫代硫酸钠标液的用量。

与空白溶液比较得出酚的含量。

b.操作：

酚的溴化碘的游离滴定

c.注意事项：

不能直接取溴水：

剧毒易挥发，取量不准确且新生态反应活性高，有利于溴化反应完全进行。

4、4－氨基安替比林比色法

（1）原理：

在PH=10.0±0.2和铁氰化钾作为氧化剂的条件下，显色剂4－氨基安替比林与酚类化合物生成红色安替比林染料，比色测定。

水溶液中λ=510nm颜色稳定30分钟；CHCl3溶液中λ=460nm颜色稳定4h

（2）方法特点：

不能测定对位有取代基的酚；直接比色法适于0.1～2mg/L水样；

萃取比色法适于0.002～0.1mg/L水样。

（3）注意点：

a使用全玻磨口蒸馏器。

b蒸馏时用H3PO4调。

c严格遵守加液顺序。

d加入氨缓冲溶液，使溶液呈碱性，防止4－氨基安替比林缩合为安替比林红。

e加入4－氨基安替比林与酚缩合。

f加入氧化剂以形成醌式结构的红色氨替比林染料，先加氧化剂可将酚氧化成醌。

第四节、铬的测定

2、测定Cr（Ⅵ）

（1）二苯碳酰二肼比色法

a原理：

在酸性条件下，六价铬与二苯碳酰二肼生成紫红色络合物。

比色测定。

b注意点：

造成Cr（Ⅵ）损失和污染的因素：

样品的保存期尽量短，容器内壁要光滑，否则易吸附，不能用刷子刷，容器不能用铬酸洗液洗。

影响比色定量的因素：

水样本身有色，水样浑浊。

影响氧化还原的因素：

酸度对反应有影响，温度影响稳定性。

（2）测总铬

碱性KMnO4

a原理：

Cr3+＋KMnO4→Cr6+＋MnO2↓

KMnO4（剩）＋C2H5OH→CH3CHO+MnO2↓

MnO2用MgO→Mg（OH）2絮凝→MnO2·Mg（OH）3（MnO2·Mg（OH）3对Cr6+有吸附）转移（过滤、洗涤）、定容

b特点：

由于要过滤，所以适用于浑浊水样，多用于工业废水和生活污水；

氧化力较弱；重现性较好。

酸性KMnO4

a原理：

Cr3+＋KMnO4→Cr6+＋MnSO4

KMnO4＋NaN3＋H2SO4→N2↑＋MnSO4

b特点：

氧化力强，多用于清洁的地表水；重现性较差，NaN3还原能力强

第二部分：

食品理化检验

第二节、食品样品的采集和保存

一、食品的特点：

1、不均匀性2、易变性

二、采样方法

1、采样原则——样品有代表、真实性、准确性、及时性、合理性

2、采样方法:

随食品的形状、种类和检测项目的要求而异。

（1）同属性（同质）食品样品的采集

（2）不同属性的样品的采集

单独采样，分别测定。

三、样品的保存

1、保存原则：

防止污染、防腐败变质、稳定水份、固定待测成分

2、保存方法：

净、密、冷、快

第三节、食品样品的前处理

一、食品样品的制备（常规处理）

1、除非可食的部分

2、去机械性杂质

3、均匀化处理：

防污染、全部过筛

二、食品样品的无机化处理

无机化处理：

是针对无机成分测定的前处理方式。

1、湿消化法

（1）定义：

简称湿法，适量样品中加入浓HNO3HClO4H2SO4等氧化性强酸，结合加热来破坏有机物。

有时加一些氧化剂KMNO4，H2O2或催化剂CuSO4，HgSO4，SeO2，V2O5等，以加速样品的氧化分解，完全破坏有机物，使待测的无机成分释放出来。

（2）常用的氧化性强酸的特点（持久性、氧化能力）

①HNO3

HNO3温热及光照O2+NO2+H2O

O2+NO

氧化力强、溶解力强、持久性差（bp121.8℃）、有NOX干扰

②浓热HClO4

浓热HClO4加热新生态O+O2+Cl2

氧化力强、持久性较好（bp203℃）、容易发生爆炸

③浓H2SO4

碳化力强、溶解度不好、持久性较好（bp338℃）、氧化能力较弱：

N→NH3

（3）常用混合酸

HNO3－HClO4HNO3－H2SO4HNO3－HClO4－H2SO4

（4）终点判断：

无色透明或淡黄色透明不再变化

（5）消化的操作技术

①敞口消化法②回流消化法③冷消化法④密封罐消化法⑤微波消化法

湿法消化装置（p12）

（6）消化操作的注意事项

①消化所用的试剂，做空白实验

②防暴沸

③消化过程中需要补加酸和氧化剂时，首先要停止加热，稍冷后沿瓶壁缓缓加入，以免发生剧烈反应，引起暴沸，造成对操作者的危害和样品的损失，以及对环境的污染。

2、干灰化法

（1）高温干灰化法

②优点：

空白值较低；称样量较大（可达10g左右）；操作简便，需要设备少；

灰化过程中不需要人一直看守；适合大批量样品的前处理，省时省力。

③缺点：

易挥发损失和吸留损失（低沸点的元素回收率较低）。

④提高回收率的措施：

适宜的温度；加入助灰化剂，促进灰化和防止损失。

（2）低温干灰化法

三、其它前处理方法

1、挥发法和蒸馏法：

扩散法、顶空分析法、氢化物发生法

2、沉淀法3、色谱分离法

4、透析法5、溶剂提取法：

浸提法、萃取法

第二章：

营养成分的测定

第一节、水分的测定

三、测定方法

1、直接干燥法

本法操作简便，应有范围广。

适用于多数样品特别是较干样品的水分测定，不适合含挥发性成分多，或在100℃左右易分解氧化的物质。

（1）原理：

一定量样品，在常压下，于95－105℃烘箱烘烤，食品中水分蒸发逸出，直至样品的质量不再减轻，称重，所减少的重量即是水分重量。

以百分含量计。

（2）操作：

①将样品混匀，磨碎，全部过60目筛，混匀。

②将扁形称瓶洗净，105±1℃烘1h，干燥器中冷却0．5h称重，再烘干1h，冷却0．5h，称至恒重。

3精确称取2－10g样品于已恒重的称瓶，散开铺平，半开瓶盖，105±1℃烘烤3h取出，干燥器中冷却0．5h称重；再烘1h，冷却，称重至恒重。

4计算：

以百分含量计。

（3）注意事项：

①样品须磨细，铺层不宜太厚＜5mm，扁形称瓶。

②半固体样品，应放在水浴上蒸去大部分水分，再放烘箱。

3粘稠样品可加海沙，水浴上边加热边搅拌，增大蒸发面积，防止结痂，再放烘箱。

4恒重。

前后两次烘烤冷却后称重，重量差在规定水平＜2mg。

关键在于第一次尽量烘够，放入干燥器冷却的时间尽可能一致。

2、减压干燥法

本法时间短，温度低，适合在100℃易分解氧化的样品、水分多挥发慢及冻胶状样品、淀粉制品、豆制品、味精、含糖量高、油脂等。

原理：

减压干燥法是在真空干燥箱中进行，箱体密闭，可抽气减压，通常采用压力为40－55kPa，温度50－60℃，2－3h即可达到恒重。

3、蒸溜法

（1）原理：

在样品中加入与水互不相溶且比水轻的有机溶剂，加热使水分与有机溶剂一起蒸溜出来（利用两种互不相溶的液体沸点低于各组分别的沸点），蒸溜出来的蒸汽被冷凝、收集于标有刻度的集水管中，当管中水量不再变化时，直接读水的体积，既是样品的含水量。

（2）注意事项：

①甲苯能溶解少量的水，所以甲苯要先用水饱和。

②防止水分附着在管壁，仪器需清洗干净。

③蒸馏结束后，冷凝管上的水珠应全部冲下。

④集水管小刻度为0.1ml，即100mg以下的质量为估计值，精确度较烘干法差。

第二节、食品中蛋白质的测定

二、测定蛋白质的意义

测定蛋白质的含量，虽不能决定蛋白质的营养价值的大小，但却是评价其营养价值的基础，为合理调配膳食及开发食品资源提供依据。

1、含量2、消化率3、生物学价值4、蛋白质的互补作用

三、测定方法--凯氏定氮法

1、原理：

样品与浓硫酸在催化剂的共同作用下一起加热，破坏有机物，使蛋白质分解的NH3+与H2SO4生成（NH4）2SO4,在强碱的作用下,释放NH3↑,通过蒸溜使氨与其它物质分开，用适当吸收液吸收，HCl滴定，根据HCl的消耗量→含氮量→蛋白质含量。

消化、蒸溜、滴定、计算。

2、说明：

如无特别说明，食品含氮量均按16%计算。

消化过程只能用H2SO4、K2SO4CuSO4。

3、步骤：

（1）、样品消化称取样品约2.00g（±0.001g），移入干燥的100mL凯氏烧瓶中，加入0.2g硫酸铜和6g硫酸钾，稍摇匀后瓶口放一小漏斗，加入20mL浓硫酸，将瓶以450角斜支于有小孔的石棉网上，使用万用电炉，在通风橱中加热消化，开始时用低温加热，待内容物全部炭化，泡沫停止后，再升高温度保持微沸，消化至液体呈蓝绿色澄清透明后，继续加热0.5h，取下放冷，小心加20mL水，放冷后，无损地转移到100mL容量瓶中，加水定容至刻度，混匀备用，即为消化液。

试剂空白实验：

取与样品消化相同的硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸，按以上同样方法进行消化，冷却，加水定容至100mL，得试剂空白消化液。

（2）、定氮装置的检查与洗涤检查微量定氮装置是否装好。

在蒸气发生瓶内装水约三分之二，加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠（或沸石）以防止暴沸。

测定前定氮装置如下法洗涤2~3次：

从样品进口入加水适量（约占反应管三分之一体积）通入蒸汽煮沸，产生的蒸汽冲洗冷凝管，数分钟后关闭夹子a，使反应管中的废液倒吸流到反应室外层，打开夹子b由橡皮管排出，如此数次，即可使用。

（3）、碱化蒸馏量取硼酸试剂20mL于三角瓶中，加入混合指示剂2~3滴，并使冷凝管的下端插入硼酸液面下，在螺旋夹a关闭，螺旋夹b开启的状态下，准确吸取10.0mL样品消化液，由小漏斗流入反应室，并以10mL蒸馏水洗涤进样口流入反应室，棒状玻塞塞紧。

使10mL氢氧化钠溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，用少量水冲洗立即将玻塞盖坚，并加水于小玻杯以防漏气，开启螺旋夹a，关闭螺旋夹b，开始蒸馏。

通入蒸汽蒸腾10min后，移动接收瓶，液面离开凝管下端，再蒸馏2min。

然后用少量水冲洗冷凝管下端外部，取下三角瓶，准备滴定。

同时吸取10.0mL试剂空白消化液按上法蒸馏操作。

（4）、样品滴定以0.0500mol/L盐酸标准溶液滴定至微红色为终点。

（5）、计算

X——样品蛋白质含量（g/100g）；V1——样品滴定消耗盐酸标准溶液体积（mL）；

V2——空白滴定消耗盐酸标准溶液体积（mL）；c——盐酸标准滴定溶液浓度（mol/L）；

0.0140——1.0mL盐酸]/000.1）（[LmolHClc=标准滴定溶液相当的氮的质量（g）；

m——样品的质量（g）；

F——氮换算为蛋白质的系数，一般食物为6.25；乳制品为6.38；面粉为5.70；高梁为6.24；花生为5.46；米为5.95；大豆及其制品为5.71；肉与肉制品为6.25；大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83；芝麻、向日葵5.30。

计算结果保留三位有效数字。

4、注意事项

1、本法也适用于半固体试样以及液体样品检测。

半固体试样一般取样范围为2.00g~5.00g；液体样品取样10.0mL~25.0mL（约相当氮30mg~40mg）。

若检测液体样品，结果以g/100mL表示。

2、消化时，若样品含糖高或含脂及较多时，注意控制加热温度，以免大量泡沫喷出凯氏烧瓶，造成样品损失。

可加入少量辛醇或液体石蜡，或硅消泡剂减少泡沫产生。

3、消化时应注意旋转凯氏烧瓶，将附在瓶壁上的碳粒冲下，对样品彻底消化。

若样品不易消化至澄清透明，可将凯氏烧瓶中溶液冷却，加入数滴过氧化氢后，再继续加热消化至完全。

4、硼酸吸收液的温度不应超过40℃，否则氨吸收减弱，造成检测结果偏低。

可把接收瓶置于冷水浴中。

5、在重复性条件下获得两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%

第四节、食品中脂肪的测定

二、提取方法

1、索氏提取法：

粗脂肪（crudefat）或醚萃取物。

（1）索氏提取器：

球瓶、提取筒和冷凝管三部分组成，各部分用磨砂玻璃密合。

（2）称重方法

增重法：

、适宜于脂肪含量较高的样品。

否则称重误差增大。

、球瓶必须事先彻底清洗、烘干，并称至恒重。

、不得沾污，防止水浴沾污球瓶外壁。

、挥干有机溶剂时温度不能太高，以免脂肪氧化而增加质量和恒重的困难。

、每套仪器只能作一份样品，较难保证平行操作条件。

减重法：

、样品中脂肪含量高低均适用。

、清洗要求不必很严格，球瓶无须事前烘至恒重。

、除去有机溶剂时，直接烘烤滤纸包，有机溶剂损失少。

、样品滤纸包无脂肪，不存在高温下脂肪氧化的问题，易恒重。

、一套仪器安装好后可连续操作，只需更换新的样品滤纸包即可。

、在一套仪器中放入数份样品，可得较好的平行结果。

（3）注意事项：

I、要求样品充分干燥和磨细，本法不适用于液体和半固体样品中脂肪的直接提取

II、正确安装仪器，各部接口必须密闭吻合，不得在接口处涂抹凡士林。

III、球瓶中有机溶剂不宜装得过满，装2/3体积即可。

IV、装样品的滤纸包不得超过虹吸管的高度，否则提取不完全。

V、滤纸包应严密，不漏样品细粉，滤纸事前用乙醚浸泡进行脱脂处理。

VI、所用的乙醚或石油醚，应无水、无醇、无过氧化物。

VII、提取完全的依据：

色素、薄纸片油迹、根文献资料、滤纸包烘干称重，再提取。

2、酸水解法：

总脂肪（totalfat）或水解后的醚萃取物。

（1）原理：

（2）操作：

固体样品2-5g，液体样品10g,

↓加水8ml,盐酸10ml或加盐酸10ml；

↓置于70-80度水浴中，加热40-50min，搅拌

↓稍冷后乙醇蛋白质沉淀

↓再加1+1的乙醇-石油醚混合液

↓分层准确取一定体积的醚层于小锥形瓶

↓水浴中蒸干置100-105度烘箱干燥2h，恒重

计算食品中总脂肪的含量。

3、碱水解法

本法适用于乳、乳制品以及含有乳类食品中脂肪的测定，在方法上与酸水解法类似；只是用氨水代替盐酸，使乳中的酪蛋白钙盐溶解，并破坏胶体状态，释放出脂肪，再用乙醚-石油混合液萃取。

第四节维生素A的测定

一、实验方法比色法

二、实验原理：

维生素A在三氯甲烷中与三氯化锑相互作用，产生蓝色物质，其深浅与溶液中所含维生素A的含量成正比。

该蓝色物质虽不稳定，但在一定时间内可用分光光度计于620nm波长处测定其吸光度。

三、实验步骤

维生素A在空气中易被氧化，对日光和紫外线敏感，实验操作应在微弱光线下进行。

样品前处理：

皂化法

（1）皂化法：

皂化：

根据样品中维生素A含量的不同，称取0.5g～5g样品于三角瓶中，加入20～40ml无水乙醇及10ml1：

1氢氧化钾，于电热板上回流30min至皂化完全为止。

（皂化法适用于维生素A含量不高的样品，可减少脂溶性物质的干扰，但全部实验过程费时，且易导致维生素A损失）

（2）提取：

将皂化瓶内混合物移至分液漏斗中，以30ml水洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗。

如有渣子，可用脱脂棉漏斗滤入分液漏斗内。

用50ml乙醚分二次洗皂化瓶，洗液并入分液漏斗中。

振摇并注意放气，静置分层后，水层放入第二个分液漏斗内。

皂化瓶再用约30ml乙醚分二次冲洗，洗液倾入第二个分液漏斗中。

振摇后，静置分层，水层放入三角瓶中，醚层与第一个分液漏斗合并。

重复至水液中无维生素A为止。

（3）洗涤：

用约30ml水加入第一个分液漏斗中，轻轻振摇，静置片刻后，放去水层。

加15～20ml0.5mol/L氢氧化钾液于分液漏斗中，轻轻振摇后，弃去下层碱液，除去醚溶性酸皂