PCR实验室SOP文件.docx

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PCR实验室SOP文件

PCR实验室SOP文件

目  录

文件名称：

管理文件                                                                                                              页码：

1.PCR实验室设置及管理…………………………………………………………5

2.PCR实验室人员配置及管理……………………………………………………7

3.实验人员的培训程序……………………………………………………………8

4.仪器设备的管理程序……………………………………………………………9

5.实验室内务管理及清洁制度……………………………………………………10

6.检验报告单管理程序……………………………………………………………11

7.试剂准备区的配置、功能、管理文件…………………………………………12

8.标本制备区的配置、功能、管理文件…………………………………………13

9.扩增及产物分析区的配置、功能、管理文件…………………………………14

【来源：

检验地带-检验医学|医学检验】

附件：

 1：

临床基因扩增实验室规章制度

2：

试剂准备区工作制度

3：

标本制备区工作制度

4：

扩增分析区工作制度

标准操作、程序文件

10.SLAN荧光定量扩增仪使用、维护和校准程序………………………………15

11.离心机使用与维护标准操作程序………………………………………………19

12.超净工作台使用与维护标准操作程序…………………………………………21

13.生物安全柜的使用与维护标准操作程序………………………………………22

14.旋涡振荡器使用与维护标准操作程序…………………………………………23

15.加样器使用与维护标准操作程序………………………………………………24

16.加样器校准标准操作程序………………………………………………………28

17.冰箱使用与维护标准操作程序……………………………………………   29     

18.紫外线消毒车的使用、维护标准操作程序……………………………………30

19.恒温金属浴的使用、维护与校准标准操作程序………………………………31

20.传递窗的使用及维护标准操作程序……………………………………………32

21.仪器故障时的标记、放置标准操作程序………………………………………33

22.临床标本的采集标准操作程序…………………………………………………34

23.标本验收和保存的标准操作程序……………………………………………35

24.样品编号的标准操作程序………………………………………………………37

25.实验台摆放规范…………………………………………………………………38

26.核酸扩增及产物分析检测的操作程序…………………………………………………39

27.乙型肝炎病毒核酸扩增荧光定量检测标准操作程序…………………………40

28.结核分支杆菌（TB）核酸扩增（PCR）荧光检测标准操作程序……………………42

29.检测结果报告程序………………………………………………………………44

30.实验结果的保存程序……………………………………………………………46

31.实验结果有效性判断……………………………………………………………48

32.室内质量控制程序………………………………………………………………49

33.实验室室间质量评价标准操作程序……………………………………………50

34.实验室生物防护程序……………………………………………………………51

35.实验室废弃物处理程序…………………………………………………………52

36.实验室清洁程序…………………………………………………………………53

37.试剂质检的标准操作程序………………………………………………………54

38.实验室耗材消毒的管理程序……………………………………………………55

39.实验室消耗品购买、验收和贮存程序…………………………………………56

40.实验室化学试剂贮存程序………………………………………………………57

41实验室常用溶液配制标准操作程序……………………………………………58

42抱怨处理程序……………………………………………………………………59

43.应急处理程序……………………………………………………………………61

44.室污染紧急防范措施……………………………………………………………63

 【来源：

检验地带-检验医学|医学检验】

附图及附表

附图：

 1.基因扩增实验室平面图

2.报告单模式

附表：

 1.实验室主要负责人简历表

2.实验室工作人员一览表

3.主要仪器设备一览表

4.拟开展的临床扩增项目表

5.工作区冰箱温度记录表

6.工作区温度、湿度记录表

7.试剂清点及配置登记表

8.标本超低温保存记录表

扩增仪运行状况登记表

10.离心机运行状况登记表 

11.实验室清洁消毒记录表

12.试剂及消耗性材料验收记录

13.实验室基础工作出室记录表

14.室内质控结果记录表

扩增拒受标本记录表

扩增可接受标本记录表

17.生物安全柜运行状况登记表

18.超净工作台运行状况登记表  

19:

实验结果记录表

20：

应急处理登记表

21：

抱怨记录和处理反馈意见登记

【来源：

检验地带-检验医学|医学检验】

实验室设置及管理

1.目的：

根据卫生部卫医发[2002]10号文件关于临床基因扩增检验实验室管理暂行办法及临床基因扩增检验实验室基本设置标准精神，确保PCR扩增质量和检验结果的准确性，防止实验污染、减少检验医学差错与医疗事故的发生为目的，特制订本程序。

2. 范围；实验室的设置、设备、工作流程及内务管理等。

3. 职责：

临床PCR检验实验室工作人员共同遵守、相互监督。

因科研需要，进入实验区域（试剂准备区、标本制备区、扩增及产物分析区）的非本室人员需首先熟悉本程序的各项规定并严格执行。

4.程序：

临床基因扩增实验室是检验科下设的专业实验室，从事临床标本的基因扩增检测及相关实验工作。

本实验室采用实时荧光定量PCR技术作为临床基因诊断的主要手段，实验室分

为试剂准备区、标本制备区、扩增及产物分析区共三个区，实验室布局见基因扩增实验室设置平面图。

各工作区有专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等，各区不可混用。

各工作区配置、功能和内务管理见各区工作制度（附件）和SOP。

工作人员一旦进入各个工作区域基因工作扩增时,应严格遵守从“试剂准备区→标本制备区→扩增及产物分析区”的单一流向制度，不得逆入前一工作区。

非本实验室工作人员，必须经许可并登记（PCR实验室外来人员进出登记薄）后方可入内；进修、实习或其他科人员需在本室进行相关实验，须在本实验室人员指导下进行。

实验完毕做好清洁消毒工作。

5.引用的文件及图表

基因扩增实验室设置平面图；见附图1

临床基因扩增实验室规章制度：

见附件1；

各工作区工作制度：

见附件2、附件3、附件4 

【来源：

检验地带-检验医学|医学检验】

PCR实验室人员配置及管理

1.目的：

为了出具高质量的检验报告，实验室必须具备足够数量的工作人员和严格的劳动管理制度，特制订本程序。

2.范围：

PCR实验室的人员配置及管理。

3.职责：

本程序由实验室负责人在科主任的监督、配合下负责实施。

4.人员要求：

鉴于PCR技术要求的特殊性、复杂性，本实验室工人员应为有经验的医学检验专业人员。

实验室工作人员应参加卫生部或省临检中心举办的PCR技术培训，并取得合格证。

在岗未取得培训合格证书者，应先作专业培训，在条件许可时，尽快获得上岗培训合格证书。

其临床检验过程和检验报告须在具有培训合格证书的技术人员监督下完成。

实验室工作人员上岗前必须学习并掌握PCR实验室管理文件。

5.人员配置：

目前本实验室配置3人，由实验室负责人负责全面管理、技术指导、解决与临床沟通及技术疑难问题。

6.引用的表格：

实验室工作人员一览表（附表2）

【来源：

检验地带-检验医学|医学检验】

 实验人员的培训程序

1.目的:

保证实验室有足够的技术力量和科室适应长远发展的需要。

2.适用范围:

核酸扩增荧光检测实验室实验人员及预备培训的人员。

3.负责实施人:

 施金俏

4.培训计划:

实验室现有持上岗人员3人:

施金俏、王塞女、胡玲

对于新进入本室的人员，如尚未取得PCR技术培训合格证，在实验室有培训合格证的上级技术人员的指导下进行实验工作，实验报告由有资格人员出具，并在最短的时间内取得上岗培训合格证。

实验室负责人每年必须参加上级管理部门组织的有关PCR内容的会议。

5.开展步骤:

根据卫生部临检中心对实验人员的要求选择人员。

参加卫生部临检中心实验室培训班并取得上岗证。

派人参加有关的继续教育培训班。

6.培训内容:

以《临床基因扩增检验技术》（申子瑜、李金明主编）为教材,

以下相关内容:

荧光定量技术的基本原理

基因诊断相关项目的临床意义及应用

分子生物学相关的基础理论

生物防护的内容及意义

严格遵守SOP文件的规定,按标准操作规程操作

【来源：

检验地带-检验医学|医学检验】

仪器设备的管理程序

1.目的：

保证PCR实验室的仪器设备得到妥善的管理，控制仪器设备良好的工作状态。

2.范围：

PCR实验室的所有仪器设备。

3.职责：

仪器设备的管理、维护、保养等的具体事项由设备的管理负责人负责执行。

由PCR实验室主任负责组织执行和监督管理。

4.工作内容：

建档管理：

仪器设备的档案管理应包括以下内容：

4.1.1仪器设备的一般情况：

名称、制造商、型号或序号、接收日期、接收状态（全新、改装等）、启用日期、目前放置区域、接收人员签字等。

仪器设备的相关文件：

仪器设备的说明书、操作手册、保修卡等，有关文件（或复印件）的文件序号、名称、保存方式、管理负责人等。

仪器设备的损坏、故障、修理须作如下记录：

日期、设备名称、设备标记号、损坏或故障的表现、损坏或故障的原因、修理人员及单位、修理的结果、记录人员签名、质量负责人签名等。

有问题的仪器设备加贴明显的红色停用标识，标识上应有停用日期及原因；可搬动的仪器移至设备处报修，不可移动的设备原地使用布罩封存待修，直至修复校验后重新标识。

仪器设备的报废处理：

因使用寿命，损坏，故障导致仪器设备不能满足检测需要时，该设备即行报废。

由管理人填写报废申请，科质量负责人核实，设备处批准后由质量负责人在设备档案中签名注销。

仪器设备实行严格的分区专用。

使用的仪器设备应进行校准和检定。

为保持仪器设备工作状态的稳定，应对其进行定期的、必要的维护和保养。

为使扩增仪处于稳定的工作状态，在该电脑上不得使用外来软盘，在使用本室软盘进行资料备份时，需在报告系统电脑上预先杀毒方可使用。

5．引用的表格：

实验室主要仪器设备一览表（附表3）

【来源：

检验地带-检验医学|医学检验】

实验室内务管理及清洁

1 目的：

保证实验室日常内务管理及清洁工作顺利进行。

2 范围：

实验室相关人员及医院清洁工人。

内务管理制度

 a）实验人员要有强烈的时间观念，按时上下班，不迟到、不早退。

b）进入实验室的工作人员必须遵守实验室单一流向的规定，禁止逆向走动。

c）实验人员必须熟悉仪器性能方允许操作，严格遵守操作规程。

d）所有仪器（如PCR扩增仪）须有专人负责。

e）注意保持仪器卫生整洁，严禁在室内抽烟，吃零食，非仪器操作人尽量少入。

f）每天了解仪器运转情况及试剂使用情况，负责仪器的整洁，安全，检查电源，水龙头，节假日指定人员负责检查实验室的仪器、设备，确保安全。

内务清洁制度

a）实验室地面保持平整、干净，通道要利于通行，没有无用的物品阻碍。

b）合理规划实验室内物品，做到摆放整齐、有序，无用的或使用效率低的物品放置到储存处，常用的物品要容易寻找到。

C）抽屉、柜子、文件类物品要作好标记，以方便识别。

d）实验结束后用1﹪的施康对台面进行清洁，并经紫外灯进行消毒。

e）每天实验结束后，紫外灯消毒60分钟后，依次关闭各区紫外灯并记录照射时间

f）每天下班前要关门、关窗、检查空调和仪器的电源是否关闭。

g）搞卫生时，依次清洁三个区的实验台面和地面，各区清洁消毒工具均专用，不可混用，注意按照单一方向流程的原则来进行清洁。

h）处理好各区废弃物，交医院集中处理。

i）每周将工作服交院洗衣房消毒洗涤，不同实验区的工作服分天洗

【来源：

检验地带-检验医学|医学检验】

检验报告单的管理程序

1．目的：

检测报告是检验过程的最终输出，为使报告的生成、发放、管理受控，特制订本程序。

2． 范围：

PCR检验结果报告的审核、发放、管理、查询和意见的反馈。

3.职责：

将病人的条形码输入报告系统，产生结果报告单，经实验室主任或经相关培训后获得上岗资格的工作人员及高年制检验人员审核签名后交工友送门诊和各病区；

4．工作流程：

要求：

检测报告结果进入LIS和HIS，在服务器保存，并涵盖满足临床随时查询、查询结果按本实验室LIS操作。

大厅服务台工作人员凭具同一唯一性标识的领取单（或病历本）发放检验报告，（本条遵从医院管理制度要求）；

.在检验报告发生遗失的特殊情况下，查明发生问题的环节后，决定是否重新补发报告。

补发的报告应注明补发的原因，并在补发报告单上作补发记录。

在现有条件下，目前暂不考虑使用电子文件的形式发放检测报告，患者若有类似要求，可在标本送检时，提交与病历一致的通信地址，检验报告以挂号形式发出。

实验室在接受电话查询时，关于检验结果仅能回答“某日送检的某个项目的检测已经完成（或未完成）。

结果请到服务台领取”，不得在无有效证据的情况下以任何方式提供诸如某人做过某项检查和/或检测结果的信息（包括提示性、暗示性语言）。

本院或挂钩单位的医护人员工作查询除外。

1． 引用文件：

PCR检测结果报告单见样单。

试剂准备区的配置、功能、管理文件

1．目的：

规范试剂准备区的配置、功能、内务管理等。

2．适用范围：

PCR实验室。

3．规范内容：

配置：

普通冰箱一台，净化工作台一台，台式离心机一台，混匀器一台，加样器一套，可移动紫外灯一台，空调一台，生物垃圾桶和生活垃圾桶各一个，办公用品若干。

功能：

储存溶液的准备，应用液、主混合液的准备，分装，成品试剂和化学试剂的贮存，75%乙醇，DEPC处理水等简单试剂的配制。

内务管理：

3.3.1着装和标识：

本区工作服以白色、专用设备以绿色为标识。

实验人员进入该区须穿本区专用白色工作服。

实验中须戴一次性手套、鞋套或本区专用拖鞋。

记录温湿度计读数和冰箱的温度计读数。

（本区每天在工作前利用本区的温控设备使温度控制在15-25℃之间）

根据当天的标本取出当天实验须配制和使用的试剂，其余试剂要立即收好放回冰箱内。

试剂的配制须在超净工作台内完成。

每次实验均应清点库存试剂，每周检查有无过期或将近到期的试剂，或作报废处理或优先使用，避免浪费，然后记录试剂的详细保存情况。

实验中使用的离心管、吸头等均为一次性用品，使用时应在消毒有效期内。

试剂准备工作完成后，将使用过的离心管、吸头置于盛有5%施康消毒液的废液缸中，还原实验台面。

将准备好的试剂放入传递窗中。

其他区的用品不得带入本区。

每次实验记录，书写工整详细，应使用本室专用的、带本室标识的记录本、纸和笔。

走出试剂准备室，在缓冲区脱下工作服，将手套及鞋套置于专用污物桶中。

工作完毕打开紫外灯消毒60分钟。

标本制备区的配置、功能、管理文件

1.目的：

规范样本处理区的配置、功能、内务管理等。

2.适用范围：

PCR实验室。

3.规范内容：

配置：

冰箱一台，生物安全柜一台，台式高速冷冻离心机一台，混匀器一台，加样器一套，可移动紫外灯一台，电热恒温水浴箱一台，恒温金属浴一台、空调一台，其它耗品、办公用品若干。

功能：

本区负责各种临床标本、质控样品的核酸提取纯化，储藏，样本贮存，DNA分析，合成cDNA。

内务管理：

3.3.1着装和标识：

本区工作服、专用设备均以蓝色为标识。

验人员进入该区须穿本区专用蓝色工作服。

实验中须戴一次性手套（手套需常更换）、鞋套或本区专用拖鞋。

从传递窗中取出试剂放入冰箱试剂存放专区暂存。

记录温湿度计读数和冰箱的温度计读数。

（本区每天在工作前利用本区的温控设备使温度控制在15-25℃之间）

核对标本的编号、类型和标本数量。

按试剂盒要求进行标本的裂解和提取处理，在生物安全柜上进行加样，加样后低速6000rpm离心数秒。

使用本室专用的经过无菌处理的加样器和带滤芯的吸头。

使用过的离心管、吸头须置于盛有5%施康消毒液的废液缸中。

使用带有本室标识的记录本、纸和笔。

其他区的用品不得带入本室。

患者标本应按有生物传染性危险品对待。

标本处理完成后，关闭所有仪器，记录运行状态。

走出标本处理区，在缓冲区脱下专用工作服，将手套、鞋套置于专用污物桶中。

实验完毕打开紫外灯消毒60分钟。

【来源：

检验地带-检验医学|医学检验】

扩增及产物分析区的配置、功能、管理文件

1.目的：

规范基因扩增、分析区的配置、功能、内务管理等。

2.适用范围：

PCR实验室。

3.规范内容：

配置：

LightCycler型核酸扩增荧光定量检测仪一台，电脑一台、打印机一台、可移动紫外灯一台、空调一台、其它耗品、办公用品若干。

功能：

进行扩增反应并对产物进行分析。

内务管理：

3.3.1着装和标识：

本区工作服、专用设备均以红色为标识。

实验人员进入该区须穿本区专用红色工作服。

实验中须戴一次性手套（手套需常更换）、鞋套或本区专用拖鞋。

从传递窗中取出已加样并离心好的反应管上机扩增。

按荧光扩增仪的标准操作文件对各种标本进行检测。

扩增结束后对检验结果进行分析。

记录温湿度计读数。

（本区每天在工作前利用本区的温控设备使温度控制在15-25℃之间）

作好扩增仪的维护、实验数据的记录、质控记录。

关闭扩增仪，记录运行状态。

实验结束后将已经扩增的反应管放入塑料套袋中密闭后带出，脱下手套、鞋套置于专用污物桶中，由卫生员（经培训）清除。

实验完毕打开紫外灯消毒60分钟。

LightCycler型核酸扩增荧光检测仪操作及分析程序

1.目的:

使LightCycler型核酸扩增荧光检测仪能够正确和正常使用，保证扩增及结果分析的标准化、规范化。

2.适用范围:

LightCycler型核酸扩增荧光检测仪。

3.操作人:

王塞女、胡玲

4.操作程序:

点击计算机桌面上Lightcycler图表

RUN

 是否自检是                

                  Start Slftest是      Skip Selftest

自检是否通过

   是

报错信息                Selttest passed

联系Roche维修工程师       设计一个新实验项目 否     

    是                   

                       New Experiment     Open Experiment File

                                               （打开已有项目）

保存项目名：

例如HBV-XX。

EXP

输入一个新程序名：

如1、2、3

设定：

温度（Targer emperature）

     恒温时间（Incubation Time）

                 温度变化率（Temperature Transition Rate）

          荧光检测模式（Acquisition Mode）

循环数（Cycles）

   分析模式（Analysis Mode）

       荧光显示模式（Display Mode）

    Add           否          结束设计项目

（增加一个程序）                          是

Sace Experiment File

（保存项目设计）

-                      加入样品

Edit Samples

编辑样品

设定:

样品数量（Maximum Position）

                        样品名（Sample name）

样品类型（Type）

标准品浓度（Concentration）

          Done

          Run

       是否保存数据    否

              是

输入文件名,如HBV20020401。

ABT

          Done

                             否

LC检查样品数是否与设定值一致     

                                              是      继续运行

         是                       否

        开始运行             终止反应

5.分析程序

Data Analysis                                    读取/打印结果

设定分析区域（绿浅间区域）                          Step3:

Analysis

                                        原则:

1在阴性对照线上            

设定荧光显示模式                                 2与所有扩增曲线相交

Fluorescence:

如F1/F2                                 3相交点在曲线的平滑区

                                                  4位置尽可能低

Quantification

              是                                        

是否手动分析        Fit Points                   Step2:

Noise Band

       否

Second Derivative Maximum