临床分子生物学检验复习提纲.docx

临床分子生物学检验复习提纲.docx

《临床分子生物学检验复习提纲.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《临床分子生物学检验复习提纲.docx（12页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。

临床分子生物学检验复习提纲

Companynumber：

【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】

临床分子生物学检验复习提纲

临床分子生物学检验

1.DVA的一级结构是由哪种化学键连接

两条单链间：

碱基氢键；相邻碱基间：

范德华力；脱氧核苷酸间：

3’-5’磷酸二酯键

2.可以出现在人体循环系统中的游离核苷酸是

脱氧核苷酸，核糖核酸

3.原核生物DNA的复制方式是θ型半保留复制

4.核小体结构中的组蛋白是哪些蛋白各自的作用有

H2A、H2B、H3、H4：

核心颗粒，形成核小体。

H1：

连接线上，锁定核小体、参与包装

5.PCR体系中抑制Taq酶活性的物质有哪些过量加入什么会减少Mg2+浓度导致Taq酶活性降低

游离的Mg2+浓度；dNTP、引物和模板DNA等中的磷酸基团，螯合剂如EDTA均可与镁离子结合减少Mg2+浓度。

6.PCR扩增时，链的延伸从什么地方开始对于引物是哪一端模板链呢

从引物的3’端开始，方向5’到3’；模板DNA序列的3’端；3’端

7.在波长260nm的紫外线下，A值=1时双链DNA的浓度大约相当于

50ug/ml的双链DNA。

（40ug/ml的单链DNA或单链RNA，33ug/ml的单链寡聚核苷酸）（紫外分光光度法，核酸浓度的鉴定）

计算公式：

双链DNA＝50×A260样本×稀释倍数

÷1000（ug/ul）

单链DNA／RNA＝40×A260样本×

稀释倍数÷1000（ug/ul）

单链寡聚核苷酸DNA＝33×A260样本

×稀释倍数／1000（ug/ul）

8.关于基因的定义正确的是

能编码有功能的蛋白质多肽链或合成RNA所必需的全部核酸序列，是核酸分子的功能单位。

是遗传的结构和功能单位。

一个基因大都包括编码蛋白质多肽链或RNA的编码序列，保证转录和加工所必须的调控序列（启动子，增强子），5’端、3’端非编码序列。

9.β—地中海贫血患者的基因缺陷主要是

基因突变中的点突变

酶的特性有

有很高的耐热稳定性

酶量增加使反应特异性下降，酶量过少影响反应产量；

TaqDNA聚合酶无3′→5′外切酶活性，因而无校正功能，在复制新链的过程中会发生碱基错配；

TaqDNA聚合酶在每次循环中产生的移码突变率为1/30000，碱基替换率为1/8000，因此扩增的片段越长，错配的机率越高。

11.实时荧光定量PCR技术中非特异性荧光染色技术

SYBRGreenI

12.人类基因组DNA多态性的形式

限制性片段长度多态性（RFLP）；短序列重复序列（STR）;单核苷酸多态性（SNP）

13.常用于菌种鉴定的分子标志物是

16sRNA

14.真核生物染色体的DNA三级结构不是闭环双链超螺旋结构的是

15.原核生物RNA聚合酶的特性有

原核生物细胞中只有1种RNA聚合酶，可参与合成mRNA、tRNA和rRNA。

RNA聚合酶催化聚合反应时需要Mg2+或Mn2+。

该酶无校正功能。

16.PCR反应的特异性取决于

引物

17.DNA的变性是指

在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。

变性后其它理化性质变化：

增色效应粘度下降

比旋度下降浮力密度升高

酸碱滴定曲线改变生物活性丧失

18.参与DNA复制的酶有哪些

（1）DNA聚合酶

（2）拓扑异构酶：

:

兼具内切酶和连接酶活力，能迅速将DNA超螺旋或双螺旋紧张状态变成松驰状态，便于解链。

（3）DNA解链酶

（4）单链结合蛋白（SSB）：

结合在解开的DNA单链上，防止重新形成双螺旋。

（5）引物酶和引发体：

启动RNA引物链的合成。

（6）DNA连接酶

19.第一个分离到的抑癌基因是

视网膜母细胞瘤基因（Rb基因）

年简悦威采用Southen分子杂交技术检测出了什么疾病

镰状细胞贫血症

21.核酸的分离和纯化中，沉淀DNA的常用试剂是

常用的有机溶剂有：

乙醇、异丙醇、聚乙二醇

常用的盐类有：

醋酸钠、醋酸钾、醋酸铵、氯化钠、氯化钾、氯化镁等。

22.通过紫外分光光度法可对核酸纯度进行鉴定，怎么鉴定反过来是否成立否

通过A260与A280的比值来判断有无蛋白质的污染。

在TE缓冲液中：

纯DNA的A260／A280比值为；

纯RNA的A260／A280比值为

【注意事项：

（1）蛋白质及酚的污染均可使比值下降，可通过蛋白质在280nm的高吸收峰与酚在270nm的高吸收峰来鉴别。

（2）RNA污染可致DNA样品的比值高于。

（3）比值为的DNA溶液不一定是纯DNA溶液，可能兼有蛋白质、酚、RNA的污染。

（4）是高质量的RNA的标志，但由于RNA二级结构的不同，其读数可能会在～之间波动。

（5）RNA溶液的pH值会影响A260／A280的读数，在水溶液中A260／A280的比值比在Tris缓冲液（）的读数低～。

因此，精确测定RNA的浓度应使用水溶液，精确测定RNA的纯度应使用Tris10mmol/L（）溶液。

】

23.对于等位基因突变位点已被阐明的一些遗传病，可以采用基因诊断的方法是

直接诊断：

Southern印迹技术

多重PCR技术

PCR-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）

等位基因特异性寡核苷酸（ASO）

DNA芯片技术（DNAchip）

单链构象多态性（SSCP）

变性梯度凝胶电泳（DGGE）

DNA序列分析（DNAsequencing）

24.限制性内切酶的（通常指Ⅱ类）特点是（Ⅱ类限制性核酸内切酶识别序列特点）

回文结构

CCTAGG

切口：

平端切口--平末端

粘端切口--粘性末端

【同功异源酶：

来源不同的限制酶，能识别和切割同一位点。

同尾酶：

有些限制性内切酶虽然识别序列不完全相同，但切割DNA后产生相同的粘性末端】

例如:

淀粉液化芽胞杆菌

（Bacillusamyloliguefaciens）H株

第1种限制性内切酶，命名为BamHⅠ

25以mRNA为模板合成cDNA的酶是（RT—PCR内容）

逆转录酶

法DNA测序时ddNTP（双脱氧核苷酸，少一个羟基）的作用是

ddNTPs是反应终止剂，可以当作正常碱基参与复制，一旦链入DNA中，其后就不能再继续连接。

27Southern印迹法的步骤有

待测核酸样品的制备

琼脂糖凝胶电泳分离待测DNA样品

电泳凝胶预处理

转膜

探针标记

预杂交

Southern杂交

洗膜

放射性自显影检测

芯片技术的本质

核酸分子杂交技术

29.影响限制性内切酶活性的物质有

乙醇、EDTA、SDS、酚、氯仿和Mg2+等某些高浓度金属离子,均会降低限制酶的催化活性,甚至使限制酶不起作用.

30.大肠杆菌（原核生物）基因组的特点

DNA较小；基因数目较少；通常为一条环状双链DNA（dsDNA）；只有一个DNA复制起始点；GC含量差异很大；基因组DNA位于细胞中央的核区，无核膜，形成类核结构；结构基因中无内含子；多数为单拷贝基因，编码rRNA、tRNA的基因为多拷贝；具有编码同功酶的基因。

31.乙肝病毒（病毒）基因组特点

分子较小，基因数少；

双链DNA病毒（逆转录：

是一类特殊类型的单链正链RNA病毒，含有RNA指导的DNA聚合酶，能使RNA反转录生成DNA。

）【每种病毒只含一种核酸（RNA或DNA），可为双链或单链、环状或线性】

基因组中有基因重叠现象；

有操纵子结构和相关基因丛集；

少或无重复序列；

基因组中编码序列占90%以上；

含有不规则结构基因。

32检测目标是RNA的杂交技术是

Northern印迹杂交

32.检测目标是DNA的杂交技术是

Southern印迹杂交、反向点杂交（RDB）、原位杂交

33.细胞内寿命最短的RNA是mRNA

34.细胞内含量最多的RNA是rRNA

35.细胞内具有调控功能的RNA是miRNA

37.PCR结果电泳图的阅读，各个条带分别代表的意义哪些是marker,哪些是有效条带

38.哪些是非特异扩增哪些是引物二聚体产生这些条带的原因

1　DNA模板浓度过高

引物浓度过高，形成引物二聚体

TaqDNA聚合酶酶量过多

dNTP浓度过高

Mg2+浓度过高

退火温度过低

延伸时间过长

C+G碱基含量在引物中比例过高

2　【引物二聚体是在PCR反应中，两条引物上的互补碱基相结合形成的聚合体，这种聚合体出现了，就相当于原本可以扩增的原料链减少了，即会导致扩增的效率降低。

】

●其中很重要的一个就是引物自身的原因，也就是设计的引物特异性不好，不能有效的和模板进行结合，而出现引物自身配对结合的情况

●其次还可能是PCR体系及反应条件的问题，如果PCR体系中引物、镁离子以及酶浓度过高，模板量过低，退火时间过长等，都容易产生二聚体

39.根据碱基互补原则计算DNA中ATGC各种的含量

40.和人类线粒体基因组有关的疾病有哪些（了解）

耳聋，糖尿病

链的合成方向5’→3’

42.抑癌基因的作用

（存在于正常细胞内的一类可抑制细胞过度生长与增殖的基因，从而有潜在抑癌作用，当这类基因发生突变、缺失或失活时，可引起细胞恶性转化而导致肿瘤的发生。

）

1　诱导终末分化

2　维持基因稳定

3　触发衰老，诱导细胞程序性死亡

4　抑制蛋白酶活性或改变DNA甲基化酶活性

5　调节血管形成

6　促进细胞间联系

43.参与原核生物转录终止的因子是ρ因子

【原核生物转录的终止有两种主要机制.一种机制是需要蛋白质因子ρ（Rho）的参与,称为依赖ρ因子（ρfactor）的转录终止机制,另一种机制是在离体系统中观察到,纯化的RNA聚合酶不需要其他蛋白质因子参与,可使转录终止,称为不依赖ρ因子的转录终止机制.】

44.原核生物DNA聚合酶Ⅰ具有的酶活性有主要用于修复DNA

5’→3’聚合酶活性与延伸能力

3’→5’外切酶活性与校对功能（保真性）

5’→3’外切酶活性与切口平移

45.编码血红蛋白β链第六位谷氨酸的密码由GAG突变为GTG所引起的血红蛋白病为

镰刀状红细胞贫血

46.PCR反应中的污染最主要的来自于

污染主要来自于：

扩增产物的污染（为最主要的来源）、试剂及器材污染、标本间的交叉污染、实验人员的污染等。

【污染是导致PCR假阳性的主要原因。

】

47.翻译的基本方式（基本过程/进位、转钛、移位）成为什么循环

核糖体循环

48.核酸的分离与纯化的步骤有哪些第一步是什么

1　核酸的释放

2　核酸的纯化

3　核酸的浓缩和沉淀

4　核酸的鉴定与贮存

49.基因诊断的方法对感染性疾病进行诊断的主要优点是

快速、灵敏、特异等优点

50.原核生物DNA聚合酶具有的酶活性有

5’→3’聚合酶活性与延伸能力

3’→5’外切酶活性与校对功能（保真性）

5’→3’外切酶活性与切口平移

51.影响融解温度（Tm值）的因素/影响DNA变性的因素有

1　Tm值取决于核酸分子的G-C含量

2　温度；溶液PH值；变性剂（如尿素、酰胺以及某些有机溶剂如乙醇、丙酮等）

52.基因诊断的间接诊断策略中的不确定性的原因是

●遗传标志所带的信息有限

●新突变

●基因重组

●家系成员不够完整

53.在基因组DNA的提取过程中为了保护DNA一级结构的完整性而应该采取的措施有

苯酚的使用：

（1）使用还原酚：

氧化酚可使DNA断裂。

重蒸酚并加入8-羟基喹啉

（2）使用水饱和酚：

酚可溶解5～10%水，从而溶解一定的核酸。

用Tris-HCl缓冲液饱和酚并调节酚的pH。

异戊醇的使用：

在苯酚/氯仿抽提过程中加入异戊醇，使苯酚︰氯仿︰异戊醇=25︰24︰1，异戊醇可减少抽提时产生泡沫，利于有机相与水相的分离。

54.检测基因点突变的检测方法有

PCR-RFLP

PCR-ASO

PCR-SSCP

DGGE（变性梯度凝胶电泳）

融点曲线分析

PCR-序列分析

55.探针的全程标记的方法有

缺口平移法；随机引物法；化学法全程；全程RNA探针标记