倒置荧光显微镜操作说明.docx

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倒置荧光显微镜操作说明

显微镜及数码成像系统操作简要第一部分观察方法步骤

1、明场观察方法步骤

2、相差观察方法步骤

3、荧光观察方法步骤

第二部分使用IPP拍摄图像流程（相差观察、荧光观察）第三部分使用BX2-BSW拍摄图像流程（明场观察）

第一部分观察方法步骤

1、明场观察方法步骤

步

骤

涉

及部件打开电源开关

拨到“I”

主开关

观察筒选择杆拨至最内

选择LI镜观察光路

三目

镜选择钮

聚光镜选择明场（BF）

聚光

放入标本于载物台

相差移出光路

载物台、标本夹

选择合适物镜进入光路

物镜选择钮

开始观察

调节瞳间

距

观察筒瞳间距调节调节屈光

度

□镜屈光度调节环

寻找标

本载物台控制手柄

手动调焦

调节光照亮度

图像采集

准备工作：

柯勒照明光轴中心调节

第一次观察须完成此调试，完成后不需要再调节，直至装卸过部件后，使用过程中请不要扭动聚光镜中心调节旋钮。

1聚光镜升

咼

到最高位

置

聚光镜高度升降旋钮

2用10X物镜聚焦至清晰

3视场光

阑

打至最

小

视场光阑

4逐步下降聚光镜，使视场中出现清晰正多边形图像聚光

镜升降旋钮

5调节聚光镜中心调节旋钮，使正多边形移至视场中心聚光镜中心调

节旋钮

6逐步打开视场光阑，使正多边形与视场边缘内

切

视场光阑

7稍

加大视场光阑，使它的图象刚好与视场外切即

可

视场光阑

2、相差（PH）观察方法步骤

步

骤

涉

及部件

打开电源开关

主开关拨到“I”

三目

选择L1镜观察光路

观察筒选择杆拨至最内

放入标本于载物台

载物台、标本夹

选择合适物镜进入光路

物镜选择钮

选择与物镜匹配的相差环进入光路

聚光镜选择钮

PH1对应10X物镜、PH1对应20X物镜、PH2对应40X物镜

开始观察

调节瞳间

距

观察筒瞳间距调节调节屈光

度

目镜屈光度调节环寻找标

本

载物台控制手柄

手动调节

调节光照亮度

图像采集

3、荧光观察方法步骤

准备工作：

高压汞灯对中（第一次观察时调整，以后观察时不需调整，除非更换汞灯）

及部件

主开关拨到“I”

选择合适的荧光激发块

打开光闸

开始观察

选择合适的物

镜物镜选择按钮

选用合适的ND滤色

片荧光反射照明器上ND片插槽

调节汞灯透镜聚焦旋钮使视场亮度均

一汞灯透镜聚焦旋钮

调节视场光阑和孔径光阑改善反

差视场光阑/孔径光阑

图像采集

准备工作：

高压汞灯对中（第一次观察时调整，以后观察时不需调整，除非更换汞灯）调整完成后，请不要触动对中部件，如汞灯对中旋钮，视场光阑对中钮等。

汞灯供电器开关打到“I”

汞灯供电器主开关：

拨到“I”，待弧光稳定后进行调节。

选择LI镜察光路

光路选择杆

标本放于载物台中

载物台

选择蓝色荧光激发块进行调节，打开光闸，光路通过

荧光激发块选择按钮

载物台控制手柄

10X物镜转入光路，标本聚焦清晰

物镜选择

钮

手动调焦

调节瞳间

距

观察筒

调节屈光

度

取下物镜或使空物镜孔进光路

屈光度调节环

物镜转盘

视场光阑拉出至最小，此时对中标本表面出现2个斑点

视

场光阑杆

晰

使两斑点最清汞灯透镜聚焦调节旋钮

使两斑点重合（先水平后重

10X物镜转入光路，向对中标本聚焦清晰，视场光阑推进至最大

物镜选择按钮

视场光阑杆

调节视场亮度均匀一致集光透镜聚焦旋钮

（亮度最大）

对中视场光阑

视场光阑拉出至最小

调整正多边形至视野中央视场光阑中心调节钮

完成高压汞灯对中

第二部分使用IPP拍摄图像流程

2.在菜单栏中，（采集）Acquire菜单下点击（视频/数字图像采集）

Video/DigitalCapture,或点击工具栏中画，即出现控制CCD拍照的对话框。

文件（E）编辑（些乎集⑷序列（$）増强©

園園］^11劃Dig回

3•有两种拍照界面可选，点击图—BasicDialog和图二Advance即可在两种模

4•点击图三More/Less按钮即可在基本对话框和扩展对话框间转换。

5.相机有两种状态可选：

，一种是预览（Preview）模式，用来观察动态图像，一般在聚焦和确定感兴趣区域时使用；另一种是拍摄（Snap）模式，用来获取图像。

6.点击预览后，如果显示的图像为完全黑色，最大的可能是光路转换器没有切换到CCD,所以请把光路转换器切换到CCD。

7.点击预览后，一般会有图像太亮或太暗的情况，这是因为曝光时间不适合造成的，如下面两图所示。

8.自动曝光：

自动曝光可以帮我们找到比较适合的曝光时间，即我们关心的样本看到比较清晰。

当出现一个非常暗或者非常亮的图像时，可以通过以下三种方法之一获得自动曝光时间。

A.点击自动曝光按钮。

B.先点击AutoExpArea（自动测光区域），用鼠标在预览图上选定感光区域

（或者点击ResettoFullFrame恢复全图预览），然后点击CalcAutoExp,就可以根据设定的区域自动计算曝光时间。

B方式C方式

C.点击AutoSet,此时软件将先自动计算曝光时间，然后提示选取一个区域做自动白平衡（一般选在图像上最亮白的地方，此部分的详细操作请参考下面的“第12步：

自动白平衡”）。

9.预览时图像覆盖着一层透明膜的效果：

在预览图片上点击右键，Transparency选择OFF可以关闭此功能。

10.预览图像的直方图实时显示：

在预览图像上点击右键，选中LiveHistogram即可显示，此功能可以帮助我们判断图像效果，但波峰在直方图中间部分时效果比较好。

11.如果预览图像中有很多红色的条带或比较多的红色点：

这是因为我们选中了“饱和提示SaturationWarning"功能，如下图所示，把“饱和提示”功能关闭即可。

12.自动白平衡：

在预览图像上右击鼠标，可以选择自动白平衡（AutoWhiteBalance），或者点击以下菜单上的“AutoWhiteBalancen，此时可以在预览图像上选定白色区域，然后点击Calculate按钮即可实现自动白平衡。

（下图中的选项在图像拍摄界面点击More后即可显示）

13.手动调整曝光时间：

当使用了自动曝光以后，可以通过手动调整来更加精确的得到更好的图像效果。

选中“AdjustExpforBinning"后，可以看到曝光时间会自动调整，此时虽然预览和拍摄曝光时间不同，但是图像效果相同。

14.预览和拍摄图像条件的锁定：

很多状况下，预览和拍摄的图像效果不一致，可以锁定界面中的锁定钮使两种状况一致。

包含以下条件的锁定：

A.拍摄区域的锁定：

如果要改变区域，点击“SETPVWAREA"的按钮，即可看到以下界面

此时，选择SelectAreafromLivePreview即可在图像上划定感兴趣的区域；选择Resetareatofullframe即可重新把感兴趣区域划定为全图。

B.预览和拍摄Binning锁定：

如果标本荧光较弱，可以采用Binning模式增强CCD敬感度。

C.预览和拍摄Gain,Gamma,Offset的锁定

D.肖以上条件均已锁定，但色彩仍然不一致时，请到：

CameraConfiguration一〉ActiveCameraSettings,在ColorCorrection下面，把Preview和Acquire都选中或者都不选中。

15.拍摄动态图像：

如果需要连续拍摄动态多幅图像，把拍摄界面转化到基本模式，并点击

Image,如下所示：

一般情况下，拍摄单张图像时，选取NewImage,拍摄连续动态图像时，一般选取Sequence（如果需要直接存储在硬盘中，选取F订e・“Browse…输入图像名称）。

IPP提供两种拍摄动态图像的模式，一种是以最快的速度连续拍摄，另一种是图像有间隔时间拍摄，

A.需要以最快速度拍摄时，请输入拍摄帧数，并选中"UseMinimumpossibleInterval”，做了此设定后，在点击拍摄时，就会以最快的速度拍摄一定帧数的图像。

B.需要以一定间隔时间拍摄时，把"UseMinimumpossibleInterval"去掉，

然后点击SetTime,在弹出的对话框中输入两幅图像的间隔时间，比如：

10秒，点击0K确定。

此时，界面如下图所示。

在拍摄帧数下就会有两幅图像之间间隔时间的显示。

做了如此设定后，再点击拍摄时，就会以10s的时间间隔拍摄一定帧数的图像。

警告：

当不使用动态拍摄模式时，请务必把Image选项选中

“NewImage”，否则，每次点击拍摄，都会得到动态图像。

16.CCD属性对话框的使用:

CameraConfiguration：

A.当使用单色CCD时，有时会看到彩色图像，这是因为在相机确认里选择了彩色滤镜，所以，到CameraConfiguration中，把ColorFilter的选项去掉即可。

B.制冷型CCD要选择制冷模式，使芯片工作在制冷状态下，所以，到Camera

Configuration中，选中EnableCooling,如下图所示:

17.当以上条件可以满足一定的试验要求时，可以保存所有的参数设置，这样，以后做类似试验时，可以直接调出相关试验条件，从而节省时间，并使试验过程简化。

操作：

直接点击Save/Saveas,然后输入文件名，选择目录保存即可。

调出时直接点击标有三个黑点的钮，选择要调出的文件即可。

IPP提供了六个试验条件文件调出的快捷方式，如下图所示：

这样调出的文件可以显示在基本模式的简单控制条中，便于试验使用。

第三部分使用BX2-BSW拍摄图像流程（明场观察）

打开DP-BSW软件

启动DP控制器。

调节显微镜。

（见明场观察部分）

显示预览图象。

①

设置曝光时间。

②

手动

③

曝光模式？

设置曝光时间

自动

选择测光区域

（30%,1%,0.1%）o④

按下手动控制盒自动对焦红色按键，进行自动

聚焦。

（打开BX2-BSW软件）

手

动

精细调节曝光时间

曝光模式？

光。

⑤

自动

移动曝光区域，

校正曝

象。

⑦

调节白平衡。

⑥

记录图

⑧

进入DP管理器。

添加注释或图释。

⑨

象。

③

具体的参照图见下页的内容。

DP-BSW软件:

测光模式

（30%/1%/0・1%）

曝光模式

预览

拍照

校正曝

光。

⑤

调节白平衡。

⑥

记录图

象。

⑦

⑧

进入DP管理

器。

添加注释或图

释。

⑨

象。

储存图

③

具体的参照图见下页的内容。

DP-BSW软件:

•■I•1,炉0'•i・・1・・・■细”・-■C>•!

•

测光模式

（30%/1%/0.1%）曝光模式预览拍照