黄芪多糖的提取工艺及含量测定研究图文精.docx

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黄芪多糖的提取工艺及含量测定研究图文精

安徽农业科学,JournalofAnhuiA一.蹦.2009,37（10:

4493,4498责任编辑金琼琼责任校对夏蓉黄芪多糖的提取工艺及含量测定研究

李万才（滨州职业学院生物工程系。

山东滨州256603

摘要[目的]研究黄芪根中多糖的含量,[方法]采用分光光度法测定膜英黄芪中多糖的含量,以葡萄糖为对照品.以苯酚一浓硫酸为显色荆.在波长486m处测定样品溶液的吸光度。

【结果]标准曲线为A=51.654C+0.0372.r=0.999

8,脚。

为1.28%.BSD2为1.50%。

[结论]该方法操作简单,灵敏度高。

关键词黄芪根;多糖含量;分光光度法

中图分类号s567.23+9文献标识码A文章编号0517—661l（200910—04493—01

ResearchonExtractionProcessandContentDeterminationofAstragalusPolysaccharides

LIWan-cai（DepartmentofBiologicalEngineering,BinzhouVocationalCollege,Binzhou,Shandong256603

AbstractObjective]111Pstudyre.archesthepoly鲴echaridecontentintheAstragalusroot.fMethodUsingspectrophotometrydeterminespolysaceharidecontentinAstragalusmembranaceus.takingslucose酗compari.,“m,takingphenol・concentratedsulfuricacid黯developeranddeterminingtheabsorbencyofsample∞lutionunderA=486nln.『Resultl111PstandardcurveisA=51.654C+0.0372。

r=0.9998.冗sD.js1.28%andRSD,is1.5%（n=5.IConclusion111ismethodissimple,sensitiveandaccurate.

KeywordsAstragalusroot:

Polysaccharidescontent;Spectrophotometry

黄芪（RadixAstragalus是豆科植物,膜荚黄芪[Astraga—lusmembranaceus（Fisch.Bge.]的干燥根含有多糖、木质素类、黄酮类化合物、香豆苯醚类、生物碱类、皂苷类、甾体类、氨基酸、微量元素等众多的生物活性物质¨。

J,具有补气同表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌之功能博J。

膜荚黄芪多糖不仅是机体的重要组成部分。

还具有提高机体免疫能力、抗菌、抗病毒、抗衰老、抗肿瘤、抗突变、降血脂、降血糖、防辐射以及改善动物生产性能等功能,同时由于它自身对细胞毒性极小,对正常细胞影响很小,因此将多糖作为药物对于治疗多种免疫缺损疾病和自身免疫疾病有显著的效果。

笔者采用可见分光光度法对膜荚黄芪根中多糖的含量进行了测定,旨在为膜荚黄芪的产品开发提供理论依据。

l材料与方法

1.1样品来源膜荚黄芪于lO月份采自山东,采后洗净、晾干,60℃烘干,粉碎后过60目筛备用。

1.2仪器与试剂SX722分光光度计（上海精密仪器仪表有限公司,8453E型紫外分光光度仪（美国Agilent,超声仪（SK8210HP,水浴锅,酒精计,漏斗,分液漏斗。

无水葡萄糖,苯酚分析纯,浓硫酸,95%乙醇,氯仿,正丁醇,活性碳。

1.3多糖的提取与精制一一训称取膜英黄芪根粉100g,加水适量,超声提取3次,30nlin/次,过滤,合并滤液,浓缩,加95%乙醇至含醇量为80%,静置过夜（4℃,过滤,分离出沉淀,加适量水溶解,加95%乙醇至含醇量为80%,再静置过夜（4℃,过滤。

分离出沉淀,加水溶解,除蛋白（氯仿:

正丁醇=4:

l,共除20次后,加活性炭脱色,抽滤,加95%乙醇至含醇量为80%,静置过夜（4℃,过滤,分离出沉淀,冷冻干燥得多糖0.5051g,密封备用。

1.4溶液的制备

1.4.1葡萄糖标准溶液。

精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖0.1g,置100rng容量瓶中,加蒸馏水至刻度,再精密吸取10IIll于另一容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀备用。

得O.1

作者简介李万才（1966一,男,山东滨州人.副教授,从事生物技术研究。

收稿日期2009-01-04ms/m1的葡萄糖标准溶液。

1.4.2苯酚溶液。

称取苯酚100g,加0.10g锌片、0.05gNaHCO,。

蒸馏,收集182℃馏分,称取该馏分5g,加蒸馏水95Ⅱd。

置棕色瓶中备用,得浓度为5%的苯酚溶液。

1.4.3膜英黄苠多糖溶液。

精密称取干燥至恒重的膜荚黄芪多糖0.1g,置100rng容量瓶中,加蒸馏水至刻度,再精密吸取10nd于另一容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀备用,得0.1mg/ml的膜荚黄芪多糖溶液。

1.5最大吸收波长的选择分别配制0.1r-,罾/IIlr的葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、醛糖溶液,再分别精密吸取lml于具塞试管中。

加苯酚试液lIIlI,摇匀,迅速加浓硫酸5rrII,振摇2min后,于沸水浴中旋转加热15min,取出置冷水中冷却至室温。

以苯酚一浓硫酸溶液为空白,用紫外分光光度仪在波长400~800Bin范围内,扫描光谱图,得上述糖溶液的最大吸收波长分别为486,488,479,488、479nnl。

以同样的方法处理膜荚黄蓖多糖样品溶液,在波长486nnl处有最大吸收。

2结果与分析

2.1葡萄糖标准曲线的绘制分别精密吸取O.1ms/m1的标准溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0IIll于具塞试管中,再分别加蒸馏水1.0、0.8、0.6,0.4、0.2,0ml,并给试管编号。

然后分别加苯酚试液lrnl,摇匀,迅速加浓硫酸5nll。

振摇2min后,于沸水浴中旋转加热15min,取出置冷水中冷却至室温,以苯酚一浓硫酸溶液为空白,于波长486舳处测吸光度,得回门方程A=51.654C+o.0372,r=o.9998（,l=5,说明线性关系较好。

2.2换算因子（,的测定精密称取已干燥至恒重的膜荚黄芪多糖4.048mg于100ml容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度,摇匀,得多糖供试品溶液。

精密吸取该溶液2lIll,按“2.1”方法,测定波长486illn处的吸光度为2.9322。

由回归方程计算供试品中葡萄糖的含量为0.056,W,/wa,按下式计算厶{=w/c

式中,1,0为供试液中膜荚黄芪多糖的量（4.048rag,由公式（下转第4498页

安徽农业科学

2009生

往受到限制。

而新的生物指纹图谱是能够鉴别生物个体之间差异的电泳图谱,多态性丰富且具有高度的个体特异性和稳定性,非常适合进行品种的鉴定工作旧“。

传统的鉴定手段更多是从生物的形态、结构上进行的鉴别,但生物的外形、结构在环境因素的影响下会发生一定程度的改变,例如同种植物在不同的气候、土壤、水分、日照等条件下,其形态、组织细胞都会有差异,因此有可能会造成错误的鉴别结果,特别是疑难种、易混种,用传统方法较难鉴别。

而DNA分子作为遗传信息的直接载体,不受外界因素、生物体发育阶段以及器官组织差异的影响,故以DNA分子特征进行物种鉴别准确可靠Ⅲ】。

RAPD技术正是依托DNA分子特征进行物种鉴别的、新兴、科学的鉴别方法,该技术在传统的鉴别技术基础上提升了一大步,对宁夏枸杞的鉴别起到重要作用。

3结语

枸杞鉴别作为与人类的现实健康生活息息相关的一个内容,在近年来的科研中日益提上日程,从传统鉴别手段的日臻完善,到新兴鉴别手法的蓬勃发展,无论是传统的、抑或是新兴的,其在现实的枸杞鉴别工作中都在继续发挥着各自的作用。

传统鉴别方法的优势是注重研究者的个人素质和专业技能,而新兴的高科技鉴别手法无疑注重研究者科学的手段和对精密的实验器材操作。

基于不同的研究者素质,以及枸杞鉴别方式的灵活和多样性,传统和新兴的鉴别方式都以其不同的功能在日益发展的枸杞鉴别工作中发挥着各自应有的作用。

在期待新的鉴别方式不断更新的同时,传统的鉴别方式同样是不可或缺的。

因此,先进的分子生物学技术与传统枸杞鉴别手段的有效结合,是宁夏枸杞鉴别方式的重要途径Ⅲ】,两者的结合可在各自原有鉴别的基础上起到锦上添花的作用。

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—+一—-卜-・・卜一-—卜.-+-.-4--.-+-.

为5.23%-9.13%。

可见,用分光光度法测定膜荚黄芪根中多糖的含量是可行的,该方法稳定可靠,简单易行。

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的吸光度。

多糖（%=CDf/w×100%

式中,C为样品溶液中葡萄糖的浓度;D为样品溶液的稀释倍数i厂为换算因子;∞为样品的质量。

由该公式得多糖平均含量为7.35%。

2.4精密度试验精密吸取0.1ms/ml葡萄糖对照品溶液

0.4ml

5份,0.1ms/m1膜荚黄芪多糖供试液O.4

IIll

5份,按

“2.1”的方法,分别测定波长486/lln处的吸光度,计算得

RSDl=1.28%,RSD2=1.50%。

3小结

通过对膜荚黄芪根中多糖含量的测定可知,其多糖含量

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黄芪多糖的提取工艺及含量测定研究

作者:

李万才,LIWan-cai

作者单位:

滨州职业学院生物工程系,山东滨州,256603刊名:

安徽农业科学

英文刊名:

JOURNALOFANHUIAGRICULTURALSCIENCES年,卷（期:

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