残留溶剂顶空分析方法验证方案模版最新版本.docx

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残留溶剂顶空分析方法验证方案模版最新版本

方案批准

起　草　　者

日期：

质量研究室审核

日期：

QC审核

日期：

法规事务部审核

日期：

QA审核

日期：

批准

日期：

注：

在方案批准部分签字表明签字者同意方案中规定的检测项目检测方法和记录要求。

在执行本方案的过程中可能会出现影响严格执行本方案的偏差，对较小的偏差将通过偏差报告的形式来解决，对于关键性偏差，如对方法的调整、对参数或接受标准的调整必须制定出增补方案并按照原方案批准程序得到批准才能进行。

所有的偏差报告和增补方案必须在提交验证报告供批准时一同提交。

1.概述

1.1根据ICH对药品中残留溶剂含量的要求及盐酸噻氯匹定生产工艺，必须控制盐酸噻氯匹定生产工艺中使用到的溶剂乙醇、丁酮、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺（DMF）的残留量。

限度分别为：

乙醇≤5000ppm、丁酮≤5000ppm、甲苯≤890ppm、DMF≤880ppm。

1.2分析方法草案见附件。

1.3本分析方法属于杂质定量分析，因此需要验证的项目有：

系统适应性、专属性、线性、准确度、检测限、定量限、精密度、耐用性，具体参数及接受标准要求见下表：

项目

参数

接受标准

系统适应性

残留溶剂峰面积的RSD

理论塔板数（N）

拖尾因子（T）

分离度（R）（残留溶剂间）

（1）RSD≤10.0%

（2）N≥10000

（3）T≤2.0

（4）R≥2.0

专属性

溶剂和已知杂质的干扰

（1）空白溶液图谱中目标峰出峰位置附近无显著干扰峰。

（2）供试品-标准溶液图谱中目标峰与相邻峰的分离度应不小于1.5。

（3）对各残留溶剂出峰位置进行定位，用RRT表示。

线性及范围

研究范围为：

定量限，10%，20%，40%，60%，80%，100%，120%残留溶剂限度水平，进行线性研究

（1）列出残留溶剂浓度与峰面积的线性回归方程，要求相关系数不小于0.99；

（2）Y轴截距绝对值与100%线性浓度水平响应值比值应小于5%。

（3）计算残差平方和；

（4）报告Y轴截距95%置信区间

（5）每个浓度水平三次重复进样峰面积RSD不大于10%。

检测限

信噪比S/N

S/N在3~5范围内

定量限

信噪比S/N

（1）S/N在10~15范围内

（2）定量限应不高于残留溶剂限度的50%

（3）三次重复进样定量限溶液

准确度

（回收率）

选取80%、100%、120%三种浓度，每一浓度配制3份，用9次测定结果评价方法的回收率。

（1）单一回收率应在80.0%~120.0%之间

（2）各浓度水平内的回收率及各浓度水平回收率平均值之间的RSD不大于2.0%。

（3）报告平均回收率95%置信区间

精密度

重复性

实验员A、仪器1测定

标准溶液峰面积RSD不大于10.0%

中间精密度

实验员A、仪器1连续三天测定

同一实验人员不同日期之间峰面积的RSD不超过10.0%

实验员A、使用仪器2测定

同一实验人员在不同仪器之间峰面积的RSD不超过10.0%

实验员B、使用仪器1测定

不同实验员，采用相同仪器，供试品峰面积结果的RSD不超过10.0%

耐用性

1.改变流速（±XX%）

同“系统适应性要求”

2.改变初始柱温（±XX℃）

3改变色谱柱的批号

2.参考资料

ICHQ3C（R3）,November2005.

ICHQ2（R1）,November2005.

<467>ResidualSolvents,UnitedStatesPharmacopoeia31,November2007.

<20424>ResidualSolvents,EuropeanPharmacopoeia6.0,June2007.

3.职责

姓名

部门

资质

职责

XXX

质量研究室

助理工程师

负责起草XX残留溶剂分析方法验证方案及执行

XXX

质量研究室

检验员

协助XX残留溶剂分析方法验证执行

伍蔚萍

质量研究室

工程师

负责审核XX残留溶剂分析方法验证方案并提供指导

XXX

质量检验部

负责审核XX残留溶剂分析方法验证方案并提供指导

何利军

法规事务部

工程师

负责审核XX残留溶剂分析方法验证方案并提供指导

周俊林

质量保证部

工程师

负责审核XX残留溶剂分析方法验证方案

陆本乐

质量副总经理

负责批准XX残留溶剂分析方法验证方案

4.色谱系统及色谱条件

4.1色谱系统

项目

第一台

第二台

第三台

GC主机

Agilent7890A

Agilent7890A

Agilent6890N

顶空进样器

AgilentG1888A

AgilentG1888A

Agilent7694E

自动液体进样器

Agilent7683B

Agilent7683B

Agilent7683B

工作站及版本号

ChemstationB.03.01

ChemstationB.03.01

ChemstationB.02.01

校正有效期

2009.09.20

2009.09.20

2009.09.20

4.2色谱条件

GC参数

柱温

40℃保持20min，10℃/min升温至240℃，并在240℃保持20min

检测器温度【℃】

250

进样口温度【℃】

140

载气

N2

载气流速【ml/min】

4.8

分流比

10:

1

运行时间【min】

60

氢气流速【ml/min】

40

空气流速【ml/min】

400

色谱柱型号

DB-624

检测器类型

FID

色谱柱规格

30m×0.53mm,3μm

顶空进样器参数

平衡温度【℃】

80

定量管温度【℃】

90

传输线温度【℃】

105

顶空瓶振摇方式

low

顶空瓶平衡时间【min】

45

加压时间【min】

0.5

顶空进样器参数

定量管填充时间【min】

0.2

定量管平衡时间【min】

0.1

进样时间【min】

1.0

进样量【mL】

1.0

5.器材与试剂

表2.器材列表

名称

级别/规格

编号

校正有效期

厂家

分析天平

分度值0.01mg

QC-BA-01

2009.09.20

MettlerToledo

分析天平

分度值0.1mg

QC-BA-02

2009.09.20

MettlerToledo

移液管

A/1.0ml,10.0ml

容量瓶

A/10ml,50ml,100ml

表3.　试剂列表

品名

批号

级别（纯度）

供应商/来源

有效期/复测期

乙醇

609995

AR

临安青山化学试剂厂

丁酮

050306

AR

汕头金砂化工厂

甲苯

20060601

AR

临安青山化学试剂厂

DMF

501124

AR

TEDIA

盐酸噻氯匹定供试品

20069028

EP

企业自制

6.验证试验

6.1系统适应性

目的：

对由分析设备、实验操作、被分析供试品组成的完整的系统进行评估。

接受标准：

计算标准溶液图谱中目标峰各检测参数：

●连续六次进样标准溶液所得图谱中目标峰峰面积RSD≤10%

●理论塔板数（N）：

≥10000

●分离度（R）：

≥2.0（残留溶剂间）

●拖尾因子（T）：

≤2.0

6.1.1溶液配制

空白溶液：

DMI。

标准储备溶液：

精密称取乙醇0.25g、丁酮0.25g、甲苯0.0445g、DMF0.044g置于已有20mlDMI的100.0ml容量瓶中，以DMI稀释至刻度，混匀。

标准溶液：

移取标准储备溶液10.0ml，置100.0ml容量瓶中，用DMI稀释至刻度，混匀。

即得乙醇250μg/ml、丁酮250μg/ml、甲苯44.5μg/ml、DMF44μg/ml。

分别移取5.0ml空白溶液、标准溶液，置于顶空瓶中，密封，即得。

6.1.2分析

色谱系统稳定后，按下列顺序进样分析：

编号

名称

进样次数

1

空白溶液

1

2

标准溶液

6

6.2专属性

目的：

对分析方法准确可靠测定被分析物的能力进行测试。

接受标准

●空白溶液图谱中目标峰出峰位置附近无显著干扰峰。

●供试品-标准溶液图谱中目标峰与相邻峰的分离度应不小于1.5。

●对各残留溶剂出峰位置进行定位，用RRT表示。

6.2.1溶液配制

注：

分别配制各残留溶剂限度水平的定位溶液，及残留溶剂混合定位溶液（标准溶液）。

乙醇定位溶液：

称取乙醇0.25g，置于已有20mlDMI的100ml容量瓶中，以DMI稀释至刻度，混匀。

移取上述溶液10ml，置100ml容量瓶中，以DMI稀释至刻度,混匀。

浓度250μg/ml。

丁酮定位溶液：

称取丁酮0.25g，置于已有20mlDMI的100ml容量瓶中，以DMI稀释至刻度，混匀。

移取上述溶液10ml，置100ml容量瓶中，以DMI稀释至刻度，混匀。

丁酮250μg/ml。

DMF定位溶液：

称取DMF0.044g，置于已有20mlDMI的100ml容量瓶中，以DMI稀释至刻度，混匀。

移取上述溶液10ml，置100ml容量瓶中，以DMI稀释至刻度，混匀。

DMF44μg/ml。

甲苯定位溶液：

称取甲苯0.0445g，置于已有20mlDMI的100ml容量瓶中，以DMI稀释至刻度，混匀。

移取上述溶液10ml，置100ml容量瓶中，以DMI稀释至刻度，混匀。

甲苯44.5μg/ml

标准溶液：

配制同“6.1系统适应性”项下。

供试品-标准溶液：

称取0.25g供试品，置20ml顶空瓶中，向其中加入5.0ml标准溶液，密封，即得供试品-标准溶液。

分别移取5.0ml空白溶液、标准溶液、各定位溶液，置于顶空瓶中，密封，即得。

6.2.2分析

色谱系统稳定后，按下列顺序进样分析：

编号

名称

进样次数

1

空白溶液

2

2

标准溶液

6

3

乙醇定位溶液

1

4

丁酮定位溶液

1

5

甲苯定位溶液

1

6

DMF定位溶液

1

7

供试品-标准溶液

1

8

标准溶液

1

6.3耐用性

目的：

确认在测定条件有微小变动时，测定结果不受影响的承受程度。

接受标准

●各项改变测试结果均应满足系统适应性要求。

6.3.1柱温改变试验（±2%），其他条件不变。

原柱温：

40℃

改变后柱温

（1）39℃

（2）41℃

溶液配制：

同“6.1系统适应性”项下。

分析进样：

同“6.1系统适应性”项下。

6.3.2改变载气流速（±5%），其他色谱条件不变。

原载气流速：

4.8ml/min

改变后载气流速：

（1）4.6ml/min

（2）5.0ml/min

溶液配制：

同“6.1系统适应性”项下。

分析进样：

同“6.1系统适应性”项下。

6.3.3改变色谱柱批号，其他色谱条件不变。

用同一型号、不同批号的色谱柱对系统适应性进行测试。

溶液配制：

同“6.1系统适应性”项下。

分析进样：

同“6.1系统适应性”项下。

6.4定量限

在仪器系统稳定后，连续进样空白溶液3次，记录空白溶液图谱基线噪声值。

按信噪比（S/N）在10~15范围的要求，配制定量限溶液，进样3次。

以下式计算信噪比（S/N）：

S/N＝

2H

h

上式中：

H—定量限溶液图谱中待测残留溶剂峰高；

h—空白溶液图谱中在待测残留溶剂出峰位置附近的基线噪声。

如有可能，基线噪声范围应对称地覆盖待测残留溶剂出峰位置。

接受标准：

残留溶剂定量限应不大于其限度的50%，3次重复进样所得目标峰面积RSD不大于10%。

6.5检测限

在仪器系统稳定后，连续进样空白溶液3次，记录空白溶液图谱基线噪声值。

按信噪比（S/N）3~5范围之内的要求，配制检测限溶液。

信噪比（S/N）计算方法同“6.4定量限”项下。

6.6线性与范围

目的：

测试在给定的范围内，待测物的响应值与供试品中被分析物的浓度成正比例关系的程度。

注：

线性范围从各待测残留溶剂定量限到标准溶液浓度的120%，共8个点，分别为：

定量限、10%水平、20%水平、40%水平、60%水平、80%水平、100%水平、120%水平。

残留溶剂线性范围最低浓度应为定量限浓度；若残留溶剂定量限溶液图谱峰面积大于某浓度水平线性溶液图谱中残留溶剂峰面积，则该浓度水平溶液及以下各浓度水平溶液不计算。

接受标准

用峰面积和与其相对的浓度绘制标准曲线y=mx+b。

●计算残差平方和；

●∣%bias∣≤5%。

●相关系数不小于0.99。

●报告Y轴截距95%置信区间。

●每个浓度水平溶液三次重复进样所得峰面积RSD%不大于10%。

%bias=100b/（mC+b）

其中：

C为100%水平线性溶液浓度，μg/ml

m为线性曲线斜率

b为线性曲线Y轴截距

6.6.1溶液配制

空白溶液：

DMI。

标准储备溶液：

精密称取乙醇0.25g、丁酮0.25g、甲苯0.0445g、DMF0.044g置于已有20mlDMI的100.0ml容量瓶中，以DMI稀释至刻度，混匀。

其中乙醇2500μg/ml、丁酮2500μg/ml、甲苯445μg/ml、DMF440μg/ml

标准溶液：

移取标准储备溶液10.0ml，置100.0ml容量瓶中，用DMI稀释至刻度，混匀。

即得乙醇250μg/ml、丁酮250μg/ml、甲苯44.5μg/ml、DMF44μg/ml。

线性溶液：

按照下列水平配制各水平线性溶液。

水平（%）

标准储备溶

液体积（ml）

容量瓶

体积（ml）

浓度（μg/ml）

乙醇

丁酮

甲苯

DMF

120

6

50

300

300

53.4

52.8

100

5

50

250

250

44.5

44.0

80

4

50

200

200

35.6

35.2

60

3

50

150

150

26.7

26.4

40

2

50

100

100

17.8

17.6

20

1

50

50

50

8.9

8.8

10

1

100

25

25

4.45

4.4

定量限

——

——

按6.5定量限浓度

6.6.2分析

在获得稳定的基线后，按下列顺序进样分析：

编号

名称

进样次数

1

空白溶液

2

2

标准溶液

6

3

定量限溶液

3

4

10％线性溶液

3

5

20％线性溶液

3

6

40％线性溶液

3

7

标准溶液

1

8

60％线性溶液

3

9

80％线性溶液

3

10

100％线性溶液

3

11

120％线性溶液

3

12

标准溶液

1

6.7准确度

目的：

考察残留溶剂分析方法测定结果与真实值或参考值接近的程度。

注：

分别向供试品中加入80%、100%、120%浓度水平稀释溶液，得三个水平准确度溶液。

每个水平配制三份。

接受标准

●单一回收率应在80.0%~120.0%之间

●各浓度水平内的回收率及各浓度水平回收率平均值之间的RSD不大于10.0%。

●报告平均回收率95%置信区间

6.7.1溶液配制

空白溶液：

DMI。

标准溶液：

同“6.1系统适应性”项下。

80％稀释液：

称取乙醇0.20g、丁酮0.20g、甲苯0.0356g、DMF0.0352g置于已有20mlDMI的100ml容量瓶中，以DMI稀释至刻度，移取上述溶液10ml，置100ml容量瓶中，用DMI稀释至刻度，混匀。

80％准确度溶液：

称取供试品0.25g，置20ml顶空瓶中，加入80％稀释液5.0ml，密封瓶盖，即得。

同法配制三份。

100％稀释液：

称取乙醇0.25g、丁酮0.25g、甲苯0.0445g、DMF0.044g，置于已有20mlDMI的100ml容量瓶中，以DMI稀释至刻度，移取上述溶液10ml，置100ml容量瓶中，用DMI稀释至刻度，混匀。

100％准确度溶液：

称取供试品0.25g，置20ml顶空瓶中，加入100％稀释液5.0ml，密封瓶盖，即得。

同法配制三份。

120％稀释液：

称取乙醇0.30g、丁酮0.30g、甲苯0.0534g、DMF0.0528g，置于已有20mlDMI的100ml容量瓶中，以DMI稀释至刻度，移取上述溶液10ml，置100ml容量瓶中，用DMI稀释至刻度，混匀。

120％准确度溶液：

称取供试品0.25g，置20ml顶空瓶中，加入120％稀释液5.0ml，密封瓶盖，即得。

同法配制三份。

6.7.2分析

在获得稳定的基线后，按下列顺序进样分析：

编号

名称

进样次数

1

空白溶液

1

2

标准溶液

6

3

供试品溶液1

1

4

供试品溶液2

1

5

80％准确度溶液1

1

6

80％准确度溶液2

1

7

80％准确度溶液3

1

8

100％准确度溶液1

1

9

100％准确度溶液2

1

10

100％准确度溶液3

1

11

120％准确度溶液1

1

12

120％准确度溶液2

1

13

120％准确度溶液3

1

14

标准溶液

1

6.7.3计算

以外标法计算准确度溶液中残留溶剂的测得量，减去供试品中残留溶剂的量，以此差值除以加入的稀释液中残留溶剂量，即得回收率，计算公式如下：

上式中：

CF为准确度溶液各残留溶剂的测定浓度，μg/ml；

W为供试品的称重，g；

C为供试品中残留溶剂的含量，ppm；计算公式见附件

CA为加入的稀释液各残留溶剂的浓度，μg/ml。

P为残留溶剂标准品纯度；

上式中：

AF为准确度溶液图谱中残留溶剂峰面积；

As为标准溶液图谱中残留溶剂峰面积；

Cs为标准溶液中各残留溶剂浓度，μg/ml；

6.8精密度

注：

由于实际供试品中目标残留溶剂有些能够检出，有些未检出，此时比较供试品含量测定结果无法反映精密度。

故以标准溶液代替供试品考察精密度。

6.8.1重复性

目的：

在相同的操作条件下，测试在较短时间间隔精密度。

接受标准

●连续六次进样标准溶液所得图谱中目标残留溶剂峰面积的RSD不超过10%。

6.8.1.1溶液配制

空白溶液：

DMI。

标准溶液：

同“6.1系统适应性”项下。

6.8.1.2分析

在获得稳定的基线后，按下列顺序进样分析：

编号

名称

进样次数

1

空白溶液

2

2

标准溶液

6

6.8.2中间精密度

目的：

按照重复性实验的测定程序，在同一实验室，评价在改变实验员、日期条件下所的结果之间的精密度。

接受标准

●不同实验者、不同日期、不同仪器的测试结果对应的RSD分别不大于10％。

6.8.2.1不同日期测定：

由实验员A，以仪器Ⅰ不同日期1，2，3天按照重复性实验的测定程序测定。

6.8.2.1.1溶液配制

同“6.8.1重复性”项下。

6.8.2.1.2进样顺序

同“6.8.1重复性”项下。

6.8.2.2不同仪器的测定：

由实验员A，以仪器Ⅱ按照重复性实验的测定程序测定。

6.8.2.2.1溶液配制

同“6.8.1重复性”项下。

6.8.2.2.2进样顺序

同“6.8.1重复性”项下。

6.8.2.3不同实验员的测定：

由实验员B，以仪器Ⅰ按照重复性实验的测定程序测定。

6.8.2.2.1溶液配制

同“6.8.1重复性”项下。

6.8.2.2.2进样顺序

同“6.8.1重复性”项下。

7.再验证周期

若分析方法的改变超出方法验证范围，或产品生产工艺发生改变，需对分析方法进行再验证。

8.偏差及纠正措施

应将所出现的所有偏差和所采取的纠正措施应记录在“偏差清单”中。

对因发生偏差而导致的任何变更控制，应将变更控制表附在本验证文件后或指出其所在位置。

应验证纠正措施并在相应的栏目内签名并注明日期。

偏差清单

偏差序号

偏差内容

纠正措施

负责人

完成日期

9.最终审核和批准

验证结束后，应分析所有验证数据，完成分析方法验证报告。

如果：

a.本分析方法验证方案中的内容均已执行，并附相应的实验报告，结果符合要求。

b.所有偏差均已被明确列出且得到纠正。

c.验证报告均已经过质量研究室主管、QC代表、法规事务部代表、QA代表审核。

则：

公司质量负责人批准验证报告。

药品残留溶剂顶空分析方法草案

1.试剂与试液：

正庚烷（AR）

N,N-二甲基甲酰胺（DMF）（AR或HPLC）

1,3-二甲基-2-咪唑基啉酮（DMI）（Fluka或等同）

2.仪器：

Agilent7890A气相色谱仪、G1888顶空进样器和色谱处理软件，或等同

3.色谱条件

GC参数

柱温

Temp0：

80℃Time0：

3minRate1：

15℃/min

Temp1：

140℃Time1：

0minRate2：

35℃/min

Temp2：

245℃Time2：

10min

检测器温度【℃】

250

进样口温度【℃】

200

载气

N2

载气流速【ml/min】

4.8

分流比

10:

1

运行时间【min】

20

氢气流速【ml/min】

40

空气流速【ml/min】

400

色谱柱型号

DB-624

检测器类型

FID

色谱柱规格

30m×530μm×3.00μm

顶空进样器参数

顶空瓶加热温度【℃】

100

定量管温度【℃】

130

传输线温度【℃】

140

顶空瓶振摇方式

High

顶空瓶平衡时间【min】

30

顶空瓶加压时间【min】

0.40

定量管填充时间【min】

0.20

定量管平衡时间【min】

0.10

进样时间【min】

1.00

进样量【mL】

1.0

4.溶液配制

空白溶液：

DMI。

标准储备溶液：

称取正庚烷0.100g、DMF0.176g，精密称定，置一已有约20mlDMI的100.0ml容量瓶中，并用DMI定容至刻度，混匀。

标准溶液：

取标准储备溶液10.0ml于100.0ml容量瓶中，并用DMI稀释至刻度，混匀。

供试品溶液：

取供试品1.00g，精密称定，置20.0ml顶空瓶中，加入5.0mlDMI，密封瓶盖。

同法配制2份。

分别移取5.0ml空白溶液和标准溶液，置20ml顶空瓶中，密封瓶盖，即得。

5.系统适应性

5.1系统稳定60min以上，进样空白溶液，根据需要可多进几针空白。

5.2取标准溶液顶空1.0mL分析，记录色谱图，重复进样6次各残留溶剂对应峰的峰面积RSD应不大于10％，理论塔板数不小于10000。

5.3测定

进样供试品溶液顶空1.0mL分析，并记录色谱图。

5.4计算

按照如下