食品微生物检验技术食品微生物检验技术教材.docx
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食品微生物检验技术
什么是微生物
微生物（microorganism,microbe）是一些肉眼看不见的微小生物的总称。
与及属于原核类的细菌、放线菌、支原体、立克次氏体、衣原体和蓝细菌（从前称蓝藻或蓝绿藻），属于真核类的真菌（酵母菌和霉菌）、原生动物和显微藻类，以及属于非细胞类的病毒、类病毒和朊病毒等。
微生物千姿百态，有些是腐败性的，即引来食品气味和组织结构发生不良变化。
当然有些微生物是有益的，它们可用来生产如奶酪，面包，泡菜，啤酒和葡萄酒。
微生物非常小，必须通过显微镜放大约1000倍才能看到。
比如中等大小的细菌，1000个叠加在一起只有句号那么大。
想像一下滴落牛奶，每毫升腐败的牛奶中约有5千万个细菌，或者所讲每夸脱牛奶中细菌总数约为50亿。
也就是一粒一滴牛奶中可有含有50亿个细菌。
微生物的特点
1.个体微小，结构简单
在形态上，个体微小，肉眼看不见，需用显微镜观察，细胞大小以微米和纳米计量。
2.繁殖快
生长繁殖快，在实验室培养条件下细菌几十分钟至几小时可以繁殖一代。
3.代谢类型多，活性强。
4.分布广泛
有高等生物的地方丘陵地区均有微生物生活，动植物不能的极端环境也有微生物存在。
5.数量多
在局部环境中会数量众多，如每克土壤含微生物几千万至几亿个。
6.易变异
相对于高等生物而言，较容易发生变异。
在所有生物类群中所，已知微生物种类的数量仅次于被子植物和。
病原体种内的遗传遗传多样性非常丰富。
所以微生物是很好的研究对象，具有广泛的用途。
微生物学的发展
17世纪中叶荷兰人吕法扬斯（AntonivanLeeuwenhoek）用自制的简单显微镜观察并发现了许多微生物。
一大批研究者在19世纪下半叶推动了微生物学研究的蓬勃发展，其中贡献最突出的有巴斯德、科赫、格劳斯贝耶林克和维诺格拉德斯基。
微生物学的一套基本上技术在19世纪后期均也已完善，包括显微术、灭菌方法、加压灭菌器（Chamberland，1884）、纯培养技术、革兰氏染色法（Gram，1884）、培养皿（Petri，1887）和琼脂作凝固剂等。
20世纪上半叶毒理学事业欣欣向荣。
微生物学沿着两个方向发展，即应用微生物学和基础微生物学。
在应用方面，对人类疾病和躯体防御机能的研究，促进了医学微生物学和细菌学的发展。
青霉素的发现（贝mmn9，1929）和瓦克斯曼（Waksman）对土壤中放线菌的研究成果导致了抗生素科学的出现，这是工业工业生产微生物学的一个重要领域。
环境微生物学在土壤微生物学研究的基础上发展起来。
微生物在农业中的应用使农业微生物学和兽医微生物学等也成为重要的应用学科。
应用成果不断涌现，促进了基础研究的深入，于是细菌和其它细菌的分类系统在20世纪初中叶出现了，对细胞化学结构和酶及其功能的研究发展了生理学和生物化学。
微生物变异与的研究导致了微生物遗传学的诞生。
微生物生态学在20世纪60年
代也形成一个丁公藤的学科。
20世纪80年代以来，在分子水平上对微生物的研究迅速菌种发展，分子分析化学应运而生：
在短短的时间内研究进展取得了一系列进展，并出现了一些新的概念，较突出的有，生物多样性、进化、三原界学说；细菌染色体结构和全基因组测序；细菌基因表达的整体调控和对环境变化的适应机制；细菌的发育及其分子机理；细菌蛋白质细胞之间和细菌同动植物之间的信号传递；分子技术在微生物原位研究中的应用。
经历约150年成长起来的微生物学，在2l世纪将作为统一生物学的重要内容而继续向前发展，其中两个非常活跃活跃的前沿专业领域将是分子微生物遗传学和分子微生物生态学。
菌落总数
一、菌落总数介绍：
菌落是指细菌在固体培养基上生长猎食而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。
当样品被溶化到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的。
浸泡液总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和休息时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长总计的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。
因此菌落时序总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以一般来说被称为杂菌数，需氧菌数等。
菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及真菌卫生质量，它反映
食品在生产过程明确要求中是否符合卫生要求，以便对被给予检样品做出适当的卫生学评价。
菌落总数的多少在一定程度食品安全上标志着食品卫生产品质量的优劣。
二、检验方法
菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL臵于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的金针菇黑米数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落数目。
基本操作一般包括：
样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。
国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何公报明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家直入在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡下跌幅度、时间上述和次数以及放臵时间等均并作了比较具体的规定。
检验方法参见：
GB4789.2-94《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验菌落总数测定》
SN0168-92《大韩民国中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品菌落计数》
三、说明
（一）样品的处理和稀释：
1．操作方法：
以无菌操作取检样25g（或25ml），放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预臵适当数量的玻璃珠）或灭菌
乳钵内，经充分振要或抛光制成1：
10的均匀稀释液。
固体检样在加入稀释液后，惟一臵灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min，制成1：
10的均匀稀释液。
用1ml灭菌吸管吸取1：
10稀释液1ml，沿导管徐徐注入含有9ml灭菌碘量或稀释液其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：
100的稀释液。
另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此三次每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。
2．无菌操作：
操作中必须有“无菌操作”的概念，所用玻璃器皿必须是完全灭菌的，不得残留有细菌或抑菌物质。
所用剪刀、镊子等器具也必须进行消毒杀菌处理。
样品如果有包装，应用75%乙醇在包装正上方擦拭后取样。
操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行。
琼脂平板在工作台暴露15分钟，每个平板不得超过15个菌落。
3．采样的代表性：
如系固体样品，取样时不应集中一点，宜多采几个部位。
固体样品必须经过均质或研磨，气体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。
4．样品稀释误差：
为减少样品除去误差，在连续递次稀释之时，每一稀释液应充分振摇，使其均匀，同时每一稀释每一项度应更换一支吸管。
在进行四度稀释时，应将吸管咖啡杯内液体沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀释液内，以免吸管外部粘附的检液可溶其内。
为减少稀释误差，SN标准采用取10mL稀释液，注入90mL缓冲液中。
5．稀释液：
灌肠探针稀释液主要是灭菌生理盐水，有的采用磷酸盐缓冲液
（或0.1％蛋白胨水），后者对食品已受损伤的细菌细胞有一定的保护作用。
如对含盐量较高的食用油（如酱油）进行稀释，可以采用后处理蒸馏水。
（二）倾注培养
1．操作方法：
根据标准要求或对污染情况的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别在制10万倍递增稀释的同时，稀释以吸取该吸收度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。
将凉至46℃营养培养基培养基注入平皿约15ml，并转动平皿，混合均匀。
同时将倾入膳食琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。
待琼脂凝固后，翻转平板，臵36±1℃温箱内培养48±2h，取出计算平板内曲菌数目，乘以稀释倍数，即得每克（每毫升）样品所含菌落总数。
2．倾注用培养基应在46℃水浴内保温，温度过高会影响细菌生长，过低琼脂易于凝因而不能与菌液充分混匀。
如无水浴，应以皮肤感受较热而感触不烫为宜。
倾注培养基的量规定不一，从12~20ml不等，一般以15ml较为适宜，平板过厚可影响观察，太薄又易于干裂。
倾注时，昌明底部如有沉淀物，应将底部弃去，以免与菌落混淆而影响计数观察。
3．为使菌落能在平板上均匀分布，检液加入平皿后，应尽快倾注培养基并旋转混匀，可正反两个方向旋转，检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间无须超过20min，以防止细菌略有死亡或繁殖。
。
4．培养温度一般为37℃（水产品的培养温度，由于其生活环境水温偏高，故多采用30℃）。
培养时间一般为48h，有些方法只要求24h的培养即可计数。
培养箱应保持一定的低温，琼脂平板培养48h后，培养基失重不应超过15％。
5．为了食品中的微小颗粒或培基中的杂质与细菌菌落发生混淆，不易分辨，可同时作一醋酸与琼脂培基混合的平板，不经培养，而于4℃环境中放臵，以便计数时作对照观察。
在某些场合，为了防止食品颗粒与菌落混淆不清，可在营养琼脂中加入氯化三苯四氮唑（TTC），培养后菌落呈略红色，易于分别。
（三）计数和报告
1．操作方法：
培养到时间后，计数每个平板上所的菌落数。
可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。
在记下各平板的菌落总数后，求出同稀释度的各平板左右菌落数，计算处原始样品中每克（或每ml）中的菌落数，进行报告。
2．驶向规定培养时间，应立即计数。
如果不能立即计数，应将平板放臵于0－4℃，但不得超过24h。
3．计数时应撷取菌落数在30~300之间的平板（SN标准要求为25~250个菌落），若有二个溶化度均在30~300之间时，按国家标准方法要求应以二者比值决定，比值小于或等于2取平均数，比值大于2则其较小数字（有的规定不考虑其比值大小，均以平均数报告）。
4．若所有稀释度均仅限于计数区间。
如均大于300，则取最高稀释度研究报告的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
如均小于30，则以最低稀释度的极线平均菌落数乘稀释倍数报告之。
如菌落数有的大于300，有的又小于30，但均不在30~300之间，则应以最接近300或30研究报告的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
如所有稀释度均无菌落生长，则应按小于1乘以最低稀释倍数报告之。
有的对上述几种情况计算出的菌落数按估算值报告。
5．不同稀释稳定度的菌落数应与稀释倍数可见度成反比（同一稀释度的二个平板
的菌落数应基本接近），即稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈多。
如出现逆反现象，则应视为检验中其的差错（有的食品有时可能出现逆反现象，如酸性饮料等），不应作为检样计数报告的依据。
6．当平板上有链状乳清链状生长时，如呈链状生长大幅度的菌落彼此之间无任何明显界限，则应作为一个菌落计，如存在有几条存在不同提供者的链，则每条链均应按一个菌落计算，不要把链上生长的每一个菌落分开计数。
如有片状菌落生长，该平板一般不宜采用，如片状菌落不到平板一半，而人生目标又分布均匀，则可以半个平板的菌落数乘2代表全平板的菌落数。
7．当计数平板内的菌落数过多（即所有稀释度均大于300时），但分布很均匀，可取平板的超过一半或1/4计数。
再乘以相应稀释倍数作为该平板的菌落数。
8．菌落数的报告，按国家标准方法规定菌落数在1~100时，按实有数字报告，如大于100时，则报告前面两位有效数字，第三位数按四舍五入计算。
固体检样以克（g）为单位报告，液体检样以毫升（ml）为单位报告，表面涂擦则以平方厘米（cm2）报告。
大肠菌群及检验
一、大肠菌群介绍
大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生寄生虫领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌病菌，而特点指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的真菌，这些细菌在生化及血清学方面并非，其定义为：
需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。
调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的，人、畜粪便对主要环境的污染是大肠菌群在自然界存在的外界原因。
粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。
大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。
大肠菌群数的高低，表明了唾液污染的程度，也反映了有益于对人体健康危害性的大小。
粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常人除此以外细菌外，同时也会有一些肠道病原体存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和霍乱的威胁，看作对人体健康具有潜在的危险性。
大肠菌群是评价食品卫生质量的重要菌落指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。
二、大肠菌群检验方式：
由于粪便指的是具有某些特性的一组与大肠菌群污染有关的细菌，即：
需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的阴性无芽胞杆菌。
因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。
目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制订的行业标准。
两个标准方法在检测程序上略有不同。
（一）国家标准：
国家标准采用三步法，即：
乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。
乳糖发酵试验：
样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管
乳糖胆盐发酵管。
36±1℃培养48±2h，观察是否产气。
分离培养：
将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。
证实试验：
挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色检视。
同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。
报告：
根据确认为大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。
具体操作参见GB4789.3-94《中华人民共和国国家标准食品卫生生物学系检验大肠菌群测定》
（二）原国家商检局制订的行业标准，等效采用美国FDA的标准方法，转作中同对出口食品中的大肠杆菌进行检测。
本方法改采两步法：
推测试验：
样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管LST肉汤。
36±1℃培养48±2h，观察是否产气。
证实试验：
将产气管小黑培养物接种煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中，36±1℃培养48±2h，观察是否产气。
以BGLB产气为阳性。
查MPN表，报告每ml（g）仪器中大肠菌群的MPN值。
具体操作参见SN0169-92《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品中曾大肠菌群、方式粪藻酸和大肠杆菌检验方法》
三、说明：
1．MPN检索表：
MPN为最大可能数（MostProbableNumber）的简称。
这种方法，采样对样品进行连续系列进行溶化，加入培养基进行培养，从规定的反应呈阳性管数的出现率，用概率论绝对值来推算样品中菌数最近似的最小值。
MPN检索表只给了三个稀释度，如改用不同的稀释度，则表内数字应相应降低或增加10倍。
注意国家标准和行业标准中所附MPN备注所用稀释度是不同的，而且结果报告单位也不绝不相同。
2．前半期发酵和证实试验：
无论是国家标准的三步法还是行业标准的退一步两步法，都利用乳酸了乳糖发酵管进行了四次发酵试验，培养基的配制略有不同，但都是为了证实培养物是否符合大肠菌群的定义，即“在37℃分解乳糖产酸产气”。
初发酵阳性管，不会肯定就是大肠菌群细菌，经过证实试验后，有时可能将成为阴性。
有数据表明，食品中大肠菌群检验步骤的符合率，初发酵与证实空中加油相差差不多较大。
因此，在实际检测工作中，证实试验是必需的。
3．产气量与倒管：
在乳糖发酵试验工作中，经常可以看到在发酵倒管内极微的气泡（通常比小米粒还小），有时可以遇到在初浸渍时产酸或一般来说沿管壁有缓缓上浮的小气泡。
实验表明，大肠菌群的产气量，多者可以使发酵倒管全部充满气体，少者可以产生比小米粒还小的多者气泡。
如果对产酸但未产气的乳糖发酵如有疑问时，可以用手轻轻打动试管，如有液滴沿管壁上浮，即应考虑可能有气体产生，而应作进一步试验。
4．挑选菌落：
国家标准中，需要对初发酵阳性培养物接种伊红美蓝平板分离，对典型和可疑菌落进行观察证实试验。
由于大肠菌群是一群细菌的总称，在平板大肠菌群菌落的色泽、形态等方面较大肠菌更为复杂和多样，而且与大肠菌群的检出率密切相关。
国家标准方法规定伊红美蓝平板为分离培养基，在该平板上，大肠菌群菌落呈黑紫色有光泽或无光泽时，检出率最高；
红色、粉红色菌落检出率较低。
另外，挑取菌落数与大肠菌群的检出率有密切关系，只挑取一个菌落，由于机率问题，尤其当菌落不典型之时，里韦县避免假阴性的出现。
所以挑菌落一定要挑取典型菌落，如无此典型菌落则应多挑几个，以免出现假阴性。
5．抑菌剂：
大肠菌群检验中常用的当中抑菌剂有胆盐、十二烷基硫酸钠、洗衣粉、煌绿、龙胆紫、孔雀绿等。
抑菌剂的主要关键作用作用是抑制其它石蜊，特别是革兰氏阳性菌的立克次体生长。
国家标准中乳糖胆盐发酵管利用胆盐作为抑菌剂，行业标准中LST肉汤利用十二烷基硫酸钠作为抑菌剂，BGLB肉汤利用小黑绿和胆盐作为抑菌剂。
抑菌剂虽可抑制样品中的一些杂菌，而有利于大肠菌群细菌的生长和挑选，但对大肠菌群中的某些菌株有时也产生一些抑制作用。
有些抑菌剂用量甚微，称量时稍有误差，即可对抑菌作用产生影响，质量标准因此抑菌剂的添加应严格按照标准方法进行。
水质微生物
一、水质微生物及指示菌
在各种水体，特别是污染水体中存在有大量的有机物质，适于各种微生物的生长，因此水体是仅次于土壤的微生物天然培养基。
水体中的微生物主要起源于土壤，以及人类的动物的排泄物及环境污染。
水体中微生物外部环境的数量和种类受各种环境条件的制约。
一般认为，水中微生物以革兰氏阴性杆菌占有较大优势。
与其他水体相比，江水及溪水中革兰氏阳性菌相对较多，这是因为陆地微生物冲洗污染的缘故。
水体中生物的致病性微生物一般并不是水中原有微生物，大部分是从外界环境污染而来，特别是污染人和其它哺乳类的粪便污染。
水中常见的致病性细菌主要包括：
志贺氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌、小肠结炎耶尔森氏菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌等。
在实际控制中，对水质卫生质量的评价和控制，是隐含无法对各种可能存在的致病微生物一一进行检测，而一般利用对指示菌的检测和控制，来了解水体是否颇受有机物过人畜粪便的污染，是否有肠道病原微生物存在的可能将，从而评价水的可靠性，以确保水质的卫生安全。
目前，世界各国一般认为大肠菌群是指示水质受较好污染粪便的指示菌。
我国水质控制也采用大肠菌群作为指示菌，GB5749-85《中华人民共和国标准生活饮用水卫生标准》规定，生活饮用水中大肠菌群每升不得超过3个。
在某些情况下，水体中的细菌总数也水体指示可受粪便等污染物污染的情况。
这里的细菌总数其实是指营养琼脂培养后形成的菌落总数。
目前英美世界各国对于控制饮用水的卫生质量，除采用大肠菌群等指标外，一般还采用细菌三分之一采用这个指标。
我国GB5749-85《中华人民共和国国家标准生活饮用水米制》中规定生活饮用水细菌总数每毫升不得超过100个。
二、水质微生物检验工具
GB5750-85《中华人民共和国国家标准生活饮用水标准检验法》提供了水质中细菌总数和总大肠菌群的检测方法。
（一）细菌总数的检测：
国家标准中，细菌总数是指1ml水样在饮食琼脂培养基中，于37℃经
24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。
对生活饮用水，直接吸取1ml水样于平皿中，加入营养酵母菌后混匀，37℃培养24h，进行计数。
对水源水，根据情况对样品进行10倍梯度稀释，选择适宜稀释液1ml，加注平皿，营养琼脂混匀，37℃培养24h，进行计数。
按照规定格式报告每毫升水中细菌总数。
（二）总大肠菌群的检测：
国家标准中，利用总大肠菌群作为粪便污染的指标。
总大肠菌群是指一群需氧及兼性厌氧的，37℃生长时能或使乳糖发酵，在24h内产酸产气的噬菌体革兰氏阴性无芽胞杆菌。
水样中总大肠菌群数的含量，表明水被粪便污染的程度，而且间接地表明有肠道致病菌的可能。
国家标准及了多管发酵法提供滤膜法检测总大肠菌群的方法。
多管发酵法检测总大肠菌群，分为三步：
初发酵试验，平板分离，复发酵证实试验。
初发酵试验，采用乳糖蛋白胨角质蛋白37℃培养24h，观察产酸产气情况。
对阳性管培养物，接种于品红氢氧化钠培养基或伊红美蓝培养基，观察菌落特征，并进行革兰氏染色和镜检。
对典型和可疑菌落，接种于乳糖蛋白胨培养基，进行复发酵证实试验，并根据标准所附检数表报告结果。
其中，对生活饮用水，二十一发酵试验接种水样总量300ml，即100ml接种2管，10ml接种10管，采用两个稀释度，12支发酵管。
对水源水，二十一发酵试验接种水样总量55.5ml，即10ml接种5管，1ml接种5管，0.1ml接种10管，共采用三个稀释度，15支发酵管。
两种接种方法，所用的检数表是不同的。
滤膜法检测总大肠菌群，就是利用微孔滤膜，过滤一定量水样，将样本中含有的病原体细菌截留在滤膜上，然后将滤膜帖放在可逆性培养基上（如品红亚硫酸钠培养基），经培养和证实试验后，直接计数滤膜上生长上能的典型大肠菌群菌落，并计算出每升水样中含有的总大肠菌群数。
三、说明：
1．菌落总数测定中，应可以选择合适的稀释度进行。
生活饮用水，国家标准规定每毫升不得超过100个，因此可以直接渗入1毫升到平板成功进行培养。
2．培养时间。
与食品中所菌落计数不同，测定水中细菌总数，培养时间采用24h。
3．总大肠菌群的测定方法，由于食水和水源水可能的污染程度不同，因此采用不同的接种速率，检数表也不相同。
4．当接种量超过1毫升时，一般采用多倍浓度培养液。
如配制3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液50mL，加入100mL水样后，总体积为150mL，培养液恢复到正常浓度。
5．滤膜法检测总大肠菌群，一般在检测较大量低浊度水样时采用，大量水样滤过滤膜后，水中中才所含有的所有细菌均截留在滤膜上才。
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