基因工程习题41页wordWord文档格式.docx
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6.
多数
类限制酶反应最适
PH
是
C
PH:
2-4
4-6
6-8
8-10
4-10
7.
下列关于限制酶反应的说法错误的是
限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后，可能会阻碍限制酶的酶解活性。
许多限制酶对线性
和超螺旋
底物的切割活性是有明显差异的。
有些限制酶对同一
底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。
限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液，是由于磷酸根会抑制限制酶反应。
BSA
对许多限制酶的切割活性都有促进作用，所以酶切反应中常加入一定量的
8.
类限制酶反应中必须的阳离子是（
Na
+
Ca2+
Zn2+
Mn2+
9.
RFLP
形成的原因是
由于遗传变异造成同源染色体中碱基的随机变化。
使用不同的限制性内切酶进行切割。
杂交时使用不同的探针。
每种染色体存在两条。
提取不同的染色体
酶切。
10.
下列关于限制酶命名的表示方法，正确的是（
E
Sau.3A
B.amH
pst
Ecor
Hind
III
11.
需进行
部分酶切时，控制下列哪种条件最合适（
反应时间
反应体积
限制酶量
反应温度
12.
下列酶在反应中不需要
的是
coK
T4DNA
连接酶
BamH
EcoB
pol
I
13.
限制性内切酶可特异性识别
双链
的特定碱基对
的特定碱基序列
单链
RNA
的特定碱基序列
的特定碱基对
14.
下列与
相关的一条是
不同限制酶在单个染色体
上的限制性图谱。
两种物种个体间的限制性图谱。
同一个体等位基因的限制性图谱。
同一物种不同个体的限制性图谱。
非同源染色体用同种限制酶切形成的限制酶图谱。
15
限制酶的星号活性是指在非正常条件下，限制酶（
识别和切割序列发生变化。
切割活性大大提高。
识别和切割序列与原来完全不同。
可以任意切割
只能部分切割
二、多选题
下列因素中影响限制酶切割的有
A,B,C,D,E）
EDTA
浓度
甘油浓度
纯度
酶的自身活性
盐浓度
限制酶反应中出现星活性的可能原因是（
．酶浓度太高
低盐
盐浓度过高
高
>
5%
V/V
3
限制酶切割后的
电泳得到的电泳条带有些扩散，可能原因是（
．酶失活
有蛋白质与
结合
酶切条件不合适
有外切核酸酶污染
星号活性
4
下列有关回文序列的描述正确的是（
类限制酶的识别序列
是某些蛋白的识别序列
是基因的旁侧序列
是高度重复序列
是卫星序列
5
下列有关回文序列的一般特征正确的是（
可增强基因表达
有对称轴
是自我互补的序列
两条链从
‘
‘方向的序列一致
类限制酶的识别序列
6
关于
类限制酶说法正确的是（
具内切核酸酶和甲基化酶活性
仅有内切核酸酶活性
只识别非甲基化的
序列
类限制酶反应条件只需要
Mg2+
Mg2+,ATP
7
．通过限制性片段分析，可对等位基因进行精确比较是因为（
限制酶只切割两个变异等位基因中的一个
限制酶位点可作为遗传标记
它不依赖变异的等位基因的产物的功能
不同组织等位基因的核苷酸序列存在差异
同一组织等位基因核苷酸序列不会完全相同
下列关于
类限制酶的叙述正确的是（
它既有内切酶的活性，也有外切酶活性
在特异位点对
进行切割
同一限制酶切割双链
时产生相同的末端序列
有些限制酶切割双链
产生粘末端
产生平末端
9
限制酶反应结果若显示没有切割，可能原因是（
限制酶无活性
存在抑制剂如
SDS
不纯
缓冲液组成不合适
甲基化
10
．下列关于限制酶的叙述正确的是（
在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他限制酶就不能切割了。
限制酶在
中的识别
/
切割位点的二、三级结构影响酶切效率。
如果限制酶的识别位点位于
分子末端，那么接近末端的程度也影响切割。
已知某限制酶在一环状
上有
个切点，因此该酶切割这一环状
，可得到
个片段。
能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌，其自身的基因组中没有该酶识别的序列。
11
．酶在储存过程中迅速失活，可能原因是（
储存温度不合适
稀释后储存
储存缓冲液不合适
分装后储存
储存缓冲液中蛋白浓度低
12
．限制酶切反应结果显示为部分切割，可能原因是（
限制酶失活
有抑制剂如
等存在
反应条件不合适
不纯
结构（线形或超螺旋）的影响
13
．如果用限制酶切割
后得到的片段比预期的多，可能原因是（
限制酶的星号活性
有其他限制酶污染
有抑制剂存在
测试
中有其他
污染
14
．限制酶切割后的产物连接反应效果差，可能原因是（
．限制酶去除不完全
平端连接
核酸外切酶污染
．连接反应温度低于
16
．从限制酶消化中带来太高浓度的磷酸盐或其他盐类
．下列限制酶属同裂酶的是（
BamHI
G
↓
GATCC
Sau3AI
GATC
CCTAG
↑
CTAG
↑
Sal
TCGAC
Xho
TCGAG
CAGCT
GAGCT
C
EcoR
AATTC
CTTAA
G
Hpa
CGC
Msp
CGG
GGC
Xba
T
CTAGA
Nhe
CTAGC
AGATC
CGATC
三．填空题
1
．限制酶是一类专门切割
的酶，它能特异性识别切割
双
链（单、双）
2
型限制酶识别位点一般长度为
4~6
个核苷酸对。
．个体之间
限制酶片段长度存在差异称
限制性片段长度多态性（
）。
．限制酶命名采用
Smith
thens
提议的方案，第一个字母大写取自来源细菌的
属名
；
第二、三个字母取自来源细菌的
种名；
第四个字母（如果有）取自来源菌的
株系。
．需要部分酶切时可采取的方法有（
）减少酶的用量
）缩短反应时间
）增大反应体积。
．限制酶识别序列为
n
个碱基，则其切割频率的理论值应是
4n
．限制性内切酶通常保存在
50%
浓度的甘油溶液中。
8
．甘油浓度是导致一些酶的星活性的原因之一，在酶切时反应体系中的甘油浓度应控制在
以下。
．限制与修饰是宿主的一种保护体系，它是通过对外源
的
限制
和对自身
修饰
来实现的。
型限制酶既具有
识别位点
的专一性，也具有
切割位点
的专一性。
它作用时需要
离子作辅助因子。
四．简答题
．在酶切缓冲液中加入牛血清白蛋白（
）的目的与机理是什么？
答：
目的是保护酶的活性；
机理是通过提高反应体系中蛋白质的浓度，防止内切酶失活。
．如果用
酶切
时出现星活性，试分析原因？
主要原因有：
酶浓度太高；
低盐；
含
Mn2+
Cu2+
等非
金属离子；
甘油浓度高于
存在某些有机溶剂。
．下列序列中哪些可能是
类限制酶的识别序列？
ATATCG
CCCGGG
GATATC
AGCCGA
GAGTC
．用
Klenow
酶可将
‘粘末端填补成平末端，而导致某些限制位点消失，下列酶切后用
klenow
处理再连接不会丢失识别位点的是哪些？
XmaI
CCGGG
BssH
CGCGC
PstI
CTGCA
HhaI
GCG
HpaII
CGC
II,
HpaII
．当两种限制酶反应条件不同时，若要用双酶切，应采取什么措施？
为什么？
要避免星活性及部分酶切。
）先用低盐缓冲液中活性最高的酶切，再补盐和第二种酶；
）用一种酶消化后，以酚：
氯仿：
异戊醇抽提，再经乙醇沉淀，将
重新溶解与适合第二种酶的缓冲液，加第二种酶消化；
）先低温酶，后高温酶；
）使用通用缓冲液。
．试计算下列三种限制酶各自在某染色体
序列上的切割概率
Sau3A
GATC
Pst
CTGCAG
Hinf
GANTC
Acy
GPuCGPyC
1/46
）
x（1/22）
．一长为
4.2kb
片段，分别用
EcoRI
及
EcoRI+PstI
消化，电泳结果如下图所示，请根据结果绘出该片段限制性图谱
0.7kb
0.7kb
0.8kb
1.5kb
1.4kb
2.0kb
2.0kb
2.8kb
EcoRI
0.8kb
回收与连接
一．单选题
DEAE
膜片法回收电泳分离的
片段时，在紧靠目的
片段前方的凝胶切一裂缝，以插入
纤维素膜，该裂缝长度与
条带相比应（
略短
等长
略长
或
都可
.
都可
．用透析膜插片凝胶电泳法回收
片段时，再区带前挖一小槽，将透析膜置于槽中，这时应注意（
．透析膜要接触
区带一侧的胶缘
．透析膜不能接触
区带相对一侧的胶缘
．随意插入槽中即可。
．在回收
片段时，观察电泳结果为尽量减少对
的照射损伤应使用（
．长波长紫外
短波长紫外
长波长红外
短波长红外
ABCD
都不可
回收时，如要除去
EB
（溴化乙锭）可用下列那种试剂（
．正丁醇
苯酚
氯仿
异戊醇
乙醇
．在
分子克隆时，常用到部分填补法，填补时应注意（
．控制反应温度
控制酶的反应时间
控制
聚合酶的用量
控制反应
dNTP
的种类
．下列关于平末端连接的说法正确的是（
同等条件下连接效率高于粘末端连接的连接效率。
加入凝聚剂
PEG8000
可促进平末端连接。
平末端连接时反应温度要比粘末端连接温度高。
平末端连接方法的使用仅限于酶切后产生的两个平末端之间的连接。
平末端连接比粘末端连接更易产生自身环化。
．用同一种酶切割载体和目的基因后进行连接，连接产物会含大量自身环化载体，采用下列哪种酶处理，可防止自身环化（
．核酸内切酶
核苷酸激酶
核酸外切酶
末端转移酶
碱性磷酸酶
．分子克隆中用
载体主要是与下列哪种产物连接（
．单酶切产物
双酶切产物
同裂酶产物
PCR
产物
酶切后形成的平末端产物
．采用
单切载体和目的基因后，进行重组连接前要（
65
℃处理
分钟使
灭活。
用碱性磷酸酶处理载体防止其自身环化。
电泳检测酶切结果。
都正确。
只有
正确。
．粘末端连接的优点是操作简便且（
．可产生新的酶切位点
载体易自身环化
易于回收片段
．具有方向性
选时更简便
二．多选题
．重组连接时，反应体系必须的组分有（
PO43-
EDTA
片段重组连接可用下列哪些方法（
．平末端连接
粘末端连接
加接头连接
同聚尾连接
载体连接
．酚抽提法回收
片段后残余的哪些物质可能会影响连接反应（
．酚
微量的
琼脂糖
少量的乙酸钠
少量的乙醇
．产生平末端的方法主要有（
．用产生平末端的限制酶切
片段补齐
‘粘末端。
．用末端转移酶补齐粘末端。
Taq
聚合酶补齐粘末端。
S1
核酸酶降解粘末端。
重组连接时，常采用连接头连接（
linker
ligation
），其作用是（
．引入某些限制酶切位点。
人工构建载体。
．增加调控元件。
调整阅读框。
．通过接头引入与目的基因相同的限制酶位点，并对目的基因相应酶切点进行甲基化修饰保护，可保护目的基因不受限制酶破坏。
．构建载体时，使用双酶切相对于单酶切的优点在于（
．避免载体自身环化
提高连接效率
控制外源基因的插入方向
便于转化后的筛选
便于修改阅读框
．下列关于同聚物加尾法的说法正确的是（
．其核心是利用末端转移酶的功能，将载体和外源
‘端再加上一端寡核苷酸。
．不易自身环化。
连接效率高
适用于
CDNA
克隆
．可能会产生某种限制酶切位点。
．下列与
重组连接相关的说法正确的是
．不匹配的粘末端可通过部分填补后连接。
同聚尾法连接不仅连接效率高，也易回收插入的片段。
．限制酶切割
后加入
EDTA-SDS
终止液抑制限制酶活性，将有利于重组连接。
Mg2+-ATP
连接酶反应时的必须因素。
．平末端连接时，在反应体系中加入适量凝聚剂可提高连接效率。
．下列哪些因素对保证较高连接效率是有利的（
．高纯度
．载体与目的基因摩尔数之比为
：
3~5
．连接反应体系中
浓度较高。
浓度较低。
．如果
分子重组时，需要用平端连接，下列哪些方法可形成平末端（
‘突出的粘末端用
聚合酶加
dNTPs
填平。
‘突出的粘末端用核酸酶切平。
聚合酶
加
．利用切口为平末端的限制酶。
三、填空题
．形成平末端的方法有
用产生平末端的限制酶切，用
核酸酶切除粘末端
，用
聚合酶填平粘末端。
．载体与
连接重组可用的方法有
同聚尾连接酶，加人工接头连接法。
片段重组连接时，如要克隆
产物，
产物可直接用
载体连接，而无须用限制酶处理。
．回收
片段时，在确定
条带位置时，应使用
长
波长紫外灯，以最大限度减少对
的照射损伤。
片段时，常用
正丁醇
处理以除去
．在用单一限制酶切载体和目的基因并进行连接时，为防止载体自身环化，常用
碱性磷酸酶
处理载体，或用
α
-
互补
进行筛选。
片段重组连接的方法主要有
平端连接、粘端连接、同聚尾连接、加接头连接
．如何将一平末端的
片段与
形成的粘末端连接？
使用加接头连接法。
人工合成一段含
酶切位点的
短片段，然后与该平末端片段两端连起来，用
切割连接片段，即可形成
的粘末端。
．什么是同聚尾连接法？
具有哪些优缺点？
同聚尾
升级会员 