竹节参总皂苷免疫调节作用.docx

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竹节参总皂苷免疫调节作用

竹节参总皂苷免疫调节作用

【摘要】目的观察竹节参的有效成分竹节参总皂苷（totalsaponinsofPanaxjaponicus，TSPJ）的免疫调节作用。

方法灌胃给TSPJ14d，测定小鼠巨噬细胞碳清除率、血清溶血值，二硝基氟苯诱导的小鼠迟发性超敏反应（DTH），放射免疫法检测血中IL2，TNFα含量，观察TSPJ对小鼠免疫功能的影响。

结果与空白组比较，TSPJ对胸腺指数及碳清除率无明显影响；降低血清溶血素水平及抗体生成细胞数；能降低血中IL2，TNFα含量；25mg·kg-1TSPJig对DTH反应有一定的增强作用，100mg·kg-1TSPJig则有抑制作用。

结论TSPJ能明显调节小鼠免疫功能,这可能是其治疗风湿类疾病的机制之一。

【关键词】竹节参总皂苷免疫功能迟发型超敏反应血清溶血素细胞因子

　　Abstract：

ObjectiveTostudytheeffectofthetotalsaponinsofPanaxjaponicus（TSPJ）onimmunologicalfunctioninmice．MethodsMicewereadministratedwithTSPJ25,50,100mg·kg-1for14days．Thephagocytosisabilityofmacrophage，serumhemolysinconcentration，theweightofthymusandspleenofthemice,thelevelofIL-2，TNF-αproductsinserumweremeasured,andthedelayedtypehypersensitivity（DTH）wasobserved．ResultsComparedwithcontrolgroup,TSPJhadnoobviouseffectonphagocytosisabilityofmacrophageandtheweightofthymusofthemice,TSPJdecreasedtheserumhemolysinconcentrationandhemocytolysisplanque，andreducedthecontentsofIL-2，TNF-

αinserumsignificantly．TSPJ（25mg·kg-1）strengthenedDTH，butTSPJ（100mg·kg-1）inhibitedDTH.ConclusionTSPJcanregulateimmunologicalfunctionofmice，whichmaybeanimportantmechanismoftreatingrheumaticdiseases．

　　Keywords：

TotalsaponinsofPanaxjaponicus；Immunologicalfunction；Serumhemolysinconcentration;Delayedtypehypersensitivity；Cytokine

竹节参别名：

竹根七、萝卜七、峨三七（四川）。

PanaxjaponicumC.A.Mey.─五加科Araliaceae，以其根茎状如竹节而得名。

有滋补强壮、散淤止痛、止血、祛痰功能。

竹节参对动物机体的适应能力、抗炎、抗氧化能力都有一定的增强作用［1～3］。

国内对竹节参具体成分的系统性研究还很少。

笔者从药理学、生理生化、免疫学等多个角度系统研究竹节参皂苷对小鼠免疫功能的影响，为进一步了解竹节参的药理作用及分子作用机理奠定基础，为利用竹节参这一宝贵资源提供一定的科学依据。

　　1材料与方法

　　1.1仪器与材料

　　723分光光度计（上海仪器厂）；CENTRIFUGETDL-5型离心机；SN-695B型放射免疫γ计数器（上海原子核研究所,日环仪器厂）；竹节参为华中科技大学生命科学院天然产物实验室提供，通过标准品检测，TSPJ净含量33.32%；环磷酰胺（江苏恒瑞医药股份有限公司，批号06060321）；2，4-二硝基氟苯（DNFB，中国医药集团上海化学试剂公司）；香菇多糖片（浙江普洛康裕天然药物有限公司）；印度墨汁（欧瑞卡生物技术有限公司）；IL-2试剂盒、TNF-α试剂盒（北京福瑞生物工程有限公司，批号20061019，20061025）；葡萄糖及其它试剂均为分析纯。

　　1.2动物分组与处理

　　实验用小鼠为昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄各半，湖北省动物实验中心，合格证号：

SCXK（鄂）2003-0005；绵羊红细胞（SRBC）和豚鼠取自湖北省动物实验中心。

　　1.3方法

　　1.3.1分组

　　小鼠随机分为6组，每组12只。

Ⅰ组为正常对照组给等量蒸馏水，Ⅱ组为环磷酰胺（CTX）组，隔天ip40mg·kg-1，Ⅲ组为香菇多糖ig200mg·kg-1，Ⅳ，Ⅴ，Ⅵ组为竹节参总皂苷ig25，50，100mg·kg-1。

　　1.3.2碳廓清实验［5］

　　印度墨汁以生理盐水10倍稀释备用。

末次给药后24h，各鼠尾静脉注射墨汁0.1ml/10g体重；注射后第5min，第25min用毛细吸管分别从眶后静脉丛取血25μl；溶于2ml0.1%Na2CO3溶液中摇匀，置于721分光光度计在600nm下比色，测光密度（OD值）；颈椎脱臼致死，并取肝、脾、胸腺进行各项指标测定。

K=logOD1-logOD2/t2-t1a=3K×体重/（肝重+脾重）　　1.3.3血清血溶素实验［5］连续给药14d后取保存的绵羊红细胞，按每只鼠20%SRBC0.2ml腹腔注射致敏。

免疫4d后摘除小鼠眼球取血约1ml。

测定IgM时，上层血清用生理盐水稀释600倍后，取1ml，进行溶血值测定。

检测IgG时，需用同量的SRBC再次免疫动物，7d后摘除小鼠眼球取血，加等量2-巯基乙醇，其它同IgM。

　　1.3.4抗体生成细胞测定参照QHS法［4］连续给药14d后，每只鼠腹腔注射5%SRBC0.2ml致敏，免疫后5d，放血致死，取脾脏制成脾细胞悬液；取试管依次加入脾细胞悬液、0.2%SRBC、1∶10豚鼠血清各0.5ml，充分混匀，温浴，离心取上清，于413nm处测光密度。

　　1.3.52，4-二硝基氟苯（DNFB）诱导迟发性变态反应（DTH）［4］药后第8天每鼠腹部剪毛（3cm×3cm）．均匀涂抹1%DNFB50μl致敏，药后第5天再用1%DNFB10μl攻击右耳，24h后处死动物，用打孔器取下直径8mm的耳片，称重，以左右耳的重量之差（肿胀度）来表示DTH的程度。

肿胀度=右耳片重量-左耳片重量

　　1.3.6细胞因子测定末次给药后1h，摘眼球取血，分离血清，RIA法，按放免试剂盒说明书测定IL-2，TNF-α含量。

　　1.4统计学处理数据均以±s表示，应用SPSS12.0统计软件包进行分析。

　　2结果

　　2.1TSPJ对小鼠体重、脾脏、胸腺重量的影响见表1。

免疫器官是动物执行免疫功能的组织机构，它们的发育状况直接影响到机体免疫力的高低。

其中胸腺、脾脏在影响免疫因素中起重要作用。

从表1可以看出TSPJ对胸腺的重量指数影响不太明显，只有TSPJ100mg·kg-1组对脾脏有抑制作用。

表1TSPJ对小鼠脾脏、胸腺重量的影响（略）

　　2.2TSPJ对巨噬细胞吞噬碳粒的影响（碳廓清实验）TSPJ3个剂量组的K和a值与正常对照组比较无明显差异，对巨噬细胞吞噬功能无明显影响。

结果见表2。

表2TSPJ对小鼠巨噬碳粒的影响（略）

　　2.3TSPJ对血清溶血素、抗体生成细胞影响

　　与正常对照组比较TSPJ3个剂量组能明显降低血清溶血素水平及抗体生成细胞，尤其100mg·kg-1组非常明显。

结果见表3。

表3TSPJ对小鼠血清溶血素水平的影响（略）

　　2.4TSPJ对小鼠DTH影响与正常对照组比较，TSPJ25mg·kg-1组使小鼠耳肿胀度增大，TSPJ50mg·kg-1不明显，TSPJ100mg·kg-1组使小鼠耳肿胀度下降。

结果见表4。

表4TSPJ对DNFB诱导小鼠迟发性超敏反应的影响（略）

　　2.5TSPJ对细胞因子水平的影响IL-2主要由辅助T淋巴细胞（Th）分泌，能在一定程度上反应Th细胞功能状态，TNF-α主要由巨噬细胞分泌，在介导免疫反应及炎症反应中起重要作用；与正常对照组比较，TSPJ能降低血中IL-2，TNF-α水平，尤其是100mg·kg-1组。

结果见表5。

表5TSPJ对小鼠血清IL-2，TNF-含量的影响（略）

　　3讨论

竹节参的主要成分为竹节参皂苷，其结构与人参皂苷相似，因而本品具有人参、三七样药理作用，日本曾在20世纪80年代将该药作为人参的代用品，广泛应用于治疗风湿性关节炎、类风湿性关节炎和损伤性关节疾病，尤其是类风湿性关节炎。

机体内T细胞亚群中Th细胞（CD4）和Ts细胞（CD8）不仅对细胞免疫而且对体液免疫进行调控,还和吞噬细胞通过独特型抗体网络来控制自身抗体的产生，达到对自身免疫病理损伤的修复和维持自身的免疫稳定,形成严密的免疫调控网络以发挥正常的识别异己、保护机体的免疫调节作用［6］。

风湿性疾病的发生由免疫倡导［7］：

在病程中T细胞库的不同T细胞克隆发生变化，活化Th细胞，抑制Ts细胞，活化的Th细胞分泌细胞因子（IL-2，TNF-α）及各种介质，不仅B细胞激活，分泌大量免疫球蛋白，同时也使关节出现炎症反应和破坏。

从实验中可以看出，TSPJ使抗体产生减少，Th细胞活性下降，IL-2，TNF-

α减少，对免疫功能的调节作用,可能是该药抗炎、镇痛、抗风湿作用的重要机理之一。

【参考文献】

　　［1］袁德培，陈龙权.复方竹节参片抗炎和镇痛作用［J］.时珍国医国药，1999，10

（2）：

86.

　　［2］左锐，袁丁.竹节参化学成分和药理活性研究进展［J］.时珍国医国药，2005，16（9）：

838.

　　［3］陈龙全，陈朝俊，复方竹节参片抗风湿作用的免疫调节机制研究［J］.中国医药学报，2003，18（4）：

247.

　　［4］徐叔云，卞如濂，陈修．药理实验方法学，第3版［M］.北京：

人民卫生出版社，2002：

1420.

　　［5］陈奇.中药药理实验方法学，第1版［M］.北京：

人民卫生出版社，1993：

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　　［6］陈慰峰.医学免疫学，第4版［M］.北京：

人民卫生出版社，2005：

95.

　　［7］叶任高.内科学，第6版［M］.北京：

人民卫生出版社，2005：

885.

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