揭秘化妆品安全性评价技术(三).pdf

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摘要!

亿植品的急性毒性通常黾箭啄辩和活性或愦霉4学评愦鹩起始陆段，持统的急性毒性试验是以亡为毒性观察终点，翼科学蛙备受质疑也授动物福莉蛆织氍反对，经过科学界的努力2002徊#社会窿赊7经典挣LD50试验，i采纳7减少诂物数t和减轻动物痛苦的忧记方法?

礤秘讳离毒性的瞎卦纽咆试验方诗也通过7验证，有鼓减少7动物的使用和提高7毒性试齄程序的台4性。

揭秘化妆品安全性评价技术砉性毒性评价试验和体外预测方法芒L毒性是化妆安全性评价最基础的试验通常包括经13和经皮遮，i蚤径必要时对某些极端的暴露途径（如吸人J也应给予考虑。

急性毒性的主要目的是观察化学物急性毒性效应、剂量反应*系、靶器官病变厦其可逆性等D自从1927年T，e哪第一次引八了半数致死ILD50）的概念以来LD50为急性毒性的主要指标但是从*纪70年代*始LD50试验受到科学界和动物福利主义者的广泛批评此后经典急性毒性试验方案经过了多次改进。

2002年经典的经口LD50试验被废除，取而代之以3项优化方法。

后急性吸毒性的试验方法也进行了恬订并于2009年被法规t可。

-、性畦蕾化妆品急性毒性是指妊口或绕皮肤途径一寰接触或24小时内多发接触某一化学物质或4小时内吸八暴露化学物所引起的不良效应。

“一寰“接触，在经口途径染毒时是指瞬间给予实验动物染毒在经呼吸道与皮肤染毒时是指在一个规定的时间段内使实验动物持续接触化学物的过程。

而“多寰”接触是指女外源化学物毒性很低时即使一发给予实验动物最大染毒剂量仍不能观察到毒性作用，从而需要在24小时内对实验动韧进行多攻染毒以迭到规定的隈制剂量急性毒性试验可以分为两类。

一类是“亡文程树军焦红为毒性终点的经典试验，主要是求得LD50。

另粪实验不以死亡为观察终点这娄试验可得到受试物靶器官毒性和非致性不良反应的数据。

传统的急性毒性试验属于第一类。

1984年燕国毒理学会首先提T应使用大量动物来获得看似精确的LD50值1987年经典LD50试验法最先被欧洲委员会废除2002年被OECD指南废除。

对于。

急性吸A毒性试验“经典的动物试验于2009年得到了修订，增加了3只的内窖和非LD50的程序。

2008年OECD认日了德国提出的“急性吸毒性急性毒性分类CATC）方法“，其原理类似f经口毒性试验的ATC法。

2009年，重复剂量吸毒性f28天或14*试验）和慢性物毒性（90天试验）也按照3R的原则进行7更新。

急性皮肤万方数据毒性仍沿用动物试验它是指受试物应用于实验动物T超过体表皮肤面积的10经过14观察病理学检查毒性变化主测定LDS0值，蕞性皮肤毒性试验对于皮肤吸收和奠它亚慢性皮肤毒性试验的剂量确定是有用的。

化妆品急性毒性试验一般选用成年健康哺乳动物，首选大鼠，其次是小鼠，特别必要时才选择非啮齿粪动物（犬或猴k试验前首先要了船受试物的化学结构和理化性质根据受试物的用途和有关测试规范设计实验方章。

对于新化学物连应拯素与其化学结构和理化性质相fq的化学物的毒性文献资料、这样既能提高动物实验结果的有效性和准确性，对于减少和优化实验动物的使月也是必需的。

急性毒性的内涵是很丰富的不能简单地理解为R是LDSO的测定。

试验结果的观察记录内容主霉包括4千方面目临床症状麈发生过程、死亡情况和时间分布、体重和病理形态变化。

观寨时间一般要求14天。

二毪豳日H啊舵宵毫从法规的角度讲化牧品急性毒性试验的主要目的是按鼎有关管理规定对其组价的目有垂性进行基本了解和分类，目的是保护公众健康。

目前急性经口毒性试验的优化方法共有3项即是固定剂量程序法（OECDTG420）急性毒性分类方法fOECDTG423）和上下程序*（OECDTG425）。

每种方法均需预设剂量开始剂量的确定可基于小范匿内的预试验研究、纽胞毒性筛选或已有资料进行分抚染骺观察动物明显的毒性症状包括死亡（ATC或UDP）或毒性症状C如FDP）。

在欧姜等国家“死t为终点的试验B被所有涪规废障目此急性毒性试验中替代方法的使甩B成为强制性的方法。

三种替代方法中，ATC法嚣常用f在欧洲约50的经口毒性试验采用此方法】。

1目定捌量法cfixeddospme“FoH于1984年由英国毒理学舍【BTSl最早提出。

该试验TN动物死亡为观察终点m是利用预先选定的或目定的一系列剂量染毒从观察化学物的毒性反应体征作为终点来对化学物的毒性进行特级。

该方法的价值在于使估计化学品急性口毒性所需要的动物量达到最小。

试验各组选用目性别（通常选用雌性动物，阻5、50、300和2000mg旧口个目定剂f特殊需要可考虑增）J口5000mgkg）顺发进行妊口染毒。

根据预试验结果确定的能够产生毒性反应但RTi于引起死亡韵剂量作为起蛄剂量。

根据毒性反应和亡的有来确定是否在更高耕量或更低女悝链续进行试验。

出现T列情E情况结束试验：

1I当出现明显的毒性反应或B确认多千一R动物死亡；2最高女慢未出现毒性反应；3最低剂量动物出现死亡。

以初始剂量为50mgkg为倒，5R实验动物f包括预试验1只）如果死亡数2R则再选择组动物给予5mgKg的曼试物；如$1只动物具有明显毒性或1R亡则将该受试物按GHS分类为3类物质；如表现为无毒性哪再选择一组动物给予300ragkg的受试物。

万方数据FDP法估计LD50在十R定的剂量间隔内结果可按月GHS分级系统舛峪物进行确分类2t性毒性分黉镕hcmetoxicca聃methodATC）由Sumiey于1990年提自，该试验是以死亡为终点的分阶段试验法+试验分步进行每一步使用单一性剐（通常为雌性）的3R动物，确定动物的死活情a后再决定T一步试验n有0种可能的结局“）无需进一步试验即可丹缎；

（2）月一剂量水平再馓3只动物；（3）在高一级或低级剂量水平另做3只动物。

以开始剂量300mgkg为倒蛤予3R动物染毒+如出现23R动物亡，则T一步试验降低一掘剂量1d50mgkg剂量染毒；如出l帅1只动物死亡m0下一步试验再用目一剂量水平进行另外3R动物的染毒。

与经典急性毒性试验法相比，采月ATC法仅需24帅p目判定急性毒性分类所用太鼠不超过12R，有效地减少7动物的使用量。

3T量法fUpandDownprdUDP】又称阶梯法序贯法。

由Dixon和Mood于1948年首次提出1985年9ruce,#行7改进。

1997年法方法被美国材料学会fASTM）采纳，2001年被OEcD采纳溥方法最大的特点是太大减少实验动物的使用，不但可以进行毒性表现的现寨还目以估算LD50及其可信限适台于能引起动物健速死亡的受试物。

uDP由限度试验和试验组成限度试验分：

女2000mg吣和5000mgKg两个剂量球平用于受试物毒性转_、的情况。

试验是个预先设计的染毒程序，每攻染毒1只动物由第1R动物染毒后的反应决定第2个动物接受化学物的剂量者动物存活第2R动物给予高一级剂量，若第1R动物亡或m现濒死状态第2只动物始予低一缎剂量。

在对每只檠毒动物仔细观察48h后可以挟定是吾对下1只动物染毒m及确定染毒剂量。

当满足停止试验的标准时可以结束试验。

根据终止时所有动物的状态用最太日能性法计算LD50值。

采用上下增减女量法确定LD50R需要69只动物。

4蠢性q毒性睦毒性分*镕是将急性经口途径的分类法应用于吸八造径原理与试验过程与经口的ATC相同OECD，0为TG436。

该试验能满足大多散法规监营的需要，提供一十对LG50GHS分类的范目估讯与传统的急性人毒性相比，替代方法使用了更少的动物女然新方法法满足所有监管和科学研究的需要，必要时可执行修订后的动物试验f即TG403）。

三苎酗悖嘲帕喇防磕早在上世纪50年代，利用体外细胞系统预测体内急性毒性效应的研究就开始7、们发现体外细胞毒性与动物急性毒性死亡剂量之间具有橱差高度性，有研究表明诱发体外细胞毒性的化学物浓度与血液该物质的致旅度之间存在相关性，体外撕胞霉性的用途首先是代替LD50试验中的剂量确定试验用于预测急性经口毒性的开始剂量，其发作为列绍台试验的部分、做为新化学物质分类和标识的万方数据。

厂一罗獬帆豳依据+以减少或替代现行的动物实验，此外还可用于毒性机制的研究中，1砸酣t*蛄捌最早由替代方法验证中心fZEBETl提出7利用体外细胞毒性预测急性纽口毒性试验的策略在细胞毒性的CSO和急性经口毒性的LD50数措之间建标准目归方程，用细胞毒性估计体内经口毒性的LD50的值，作为体内试验的开始剂量。

目前经过验证的月珏日胞试验方*分SJJBABLc3T3成纤维细胞中性红摄取试验和常角质细胞（NHK）中性红摄取试验。

经过大量e有体内和体外毒理学数据的分析，目前B认的预测模型是公式log（LD50）=o435log（C50x）+0625。

对于改良后的经口毒性试验如果郭能从细胞毒性试验资料获得最佳开始剂量的台理预测则可以减少13个剂量的试验步骤。

对于一个实验室如何将细胞毒性试验数据用于ATC、UDP等动物实验方法开始剂量的计算呢7Spielman提出4步建议：

第一步，从细胞毒性数据库中选择1020种参考化学物质，用标准细胞毒性试验方法进行测试最硼BABLc3T3中性红摄取*；第=步，用细胞实验中得到的IC50值与细胞毒性数据库中的LD50值进行线性回归分析计算出本实验室的目归方程；第劲，将本实验室得到的回归方程与公认的目归方8tt较判断是否与之一致并处于确定的预测间内：

第口步如果符台上连条件则可能用于体内毒性试验的预测否则，建议改进细胞种类或试验方法以调整试验方法的敏感性：

2舅急性毒酗”组台试验细胞毒性试验可作为蛆台试验的一部分，用于急性毒性的预测。

这几项目胞试验采用的是3种人类细胞+由以T4个实验组台成1HepG2细胞蛋白容量试验肝细胞瘤细胞HepG9暴露于测试物中通过Lowry法测定蛋自客量的改变检测细胞毒性。

作为序列试验的一部分与耄i和霉组合或仅与试验鞠台可藏少经口急性毒性的动物数量。

学HL-60细胞ATP含量试验：

HL-60目胞f粪急性前髓细胞淋B瘤细胞）暴露于测试物质中月（Lucifer-LU试剂盎）黄光祟一荧光素酶反应产生的生物发光强度检测ATP含量（Kangas1984）。

作为序列试验的一部分与J、圆和组台，壶便与试验1蛆台可减少经13急性毒性的动物数量万方数据-_皤瓤岔，够蛳岔，弩够蛳吣够青l奄鼙t蒸纛黧熬器瓣蒸黧薹琴万方数据r1是吾有B知的人类或动物数据来显示该物质是息性毒素【数据包括“往体内外急性毒性测试、流行痔学研究结果、毒物单位数据、药物不良反应等1果数据质量与数量足以迭14分类标识或风险评估的要求则不要求做测试；若吾进轻抵、茹评怙理化性质：

理化性质数据有助于确定生物活性段在第7步PBPK研究中划分的进第3步；口、日i用计算机方法预测急性毒性7例如应用局部QSAR或适宜专家系统（如TOPKAT,Mu【lJCASE、OASIS、ToxBoxes、DEREK）。

如可成功应用一种以上的预测方法则预测可被接纳与吾受试物急性毒性预测可应用于革7步的PBPK研究的进八第4步。

可否用计算机及体外方法预测日能的代谢产物及其毒性代谢进行PBPK及生物动力学模拟眦预测主要靶器官毒性代谢作用，体内收。

“PBPK模拟研究结果确定靶器官及第8步进一步体外试验的体内剂量浓度。

、进行体外靶g官毒性测试例如，包括肝、肾、神经心肺细胞毒性试验。

靶器官研究结果可用于证据权重评估的进人第9步。

将迄夸为止所有数据进行证据权重评估。

如证据足以显示物质是否具急性毒性，进行分类和标识或风险评f古，不再要求做其它试验否则进第10步。

进行优化的急性毒性试验以中性红摄取法夏其它报关研究预测初始剂量再进行优化的动物试验（经口和吸I或传统的动物实验f经皮肤）。

急性毒性实验的主要目的是为了预测化学物质对体的作用目前的研究结论认为基于人类细胞进行的检测与体内试验具有较好的相关性目此可以把体外胞试验方法用于监管目的以评价化台物的危害水平。

首先需要正确7解急性暴露化学物质后引起的致效应其发才是对特定器官的损害。

因此，科学可行的方法是采用分步骤的方案代替目前的急性经口毒性试验，即通过建i蛆台试验或阶梯试验预测化台物对体的作用具体包括简单的细胞毒性试验生物动力学（代谢I试验和器官特异性实验。

编辑林婕黛一万方数据