烟叶常规测定方法.docx

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烟叶常规测定方法

3，5—二硝基水杨酸（DNS）比色法测还原糖

一、仪器与用具

25ml刻度试管；离心管；100ml玻璃烧杯；100ml三角瓶；刻度吸管1ml、2ml、10ml；沸水浴；离心机；电子天平；分光光度计。

二、试剂

1.1mg/ml葡萄糖标准液：

准确称取100mg分析纯葡萄糖（预先在80℃烘至恒重），在小烧杯中用蒸馏水溶解后定容至100ml，摇匀，冰箱中保存备用。

2.3,5－二硝基水杨酸（DNS）（显色液）：

6.3g3,5－二硝基水杨酸和262ml2mol/LNaOH，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解。

冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶备用。

三、实验步骤：

1．可溶性糖的提取：

准确称取烟叶样品0.100g，置于离心管中，加入8ml80%乙醇，于80℃水浴浸提30min，冷却后于4000转离心5min收集上清液，残渣再加入8ml80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于100ml容量瓶中并定容至100ml。

2．标准曲线的绘制：

取干洁25ml试管6支，依次加入葡萄糖标准液（1mg/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml和蒸馏水1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml，再分别加入DNS试剂1.5ml，于沸水浴中加热5min，取出后立即浸入冷水冷却至室温，再用蒸馏水定容至25ml刻度处，摇匀，然后在540nm波长处比色。

3．还原糖的测定：

取提取液1ml于试管中（空白中用1ml蒸馏水代替），加入DNS试剂1.5ml，摇匀，于沸水浴中加热5min，取出后立即浸入冷水冷却至室温定容至25ml，摇匀，然后在540nm波长处比色。

4．计算：

还原糖（％）=〔（C×V/a）/（W×1000）〕×100

C—标准曲线方程求得的还原糖含量mg数；

V－提取液的体积（ml）；W—样品重量（g）;a=0.01

注意：

1.在称取烟叶前离心管内先加入4ml80%乙醇，加入烟叶后立即充分摇匀，以防烟叶凝结成块，影响还原糖测定。

2.称取完烟叶后，在浸提之前先混匀后静置10min。

3.在第一次浸提过程中应充分摇匀3-4次，第二次和第三次充分摇匀2次，摇匀之前先将盖子打开，释放管内热蒸汽，以防管内液体喷出。

4.吸取提取液之前应再次摇匀提取液，比色之前也应将待测液充分摇匀后才能进行比色，因为还原糖沉降速度极快，不充分摇匀将严重影响实验数据的准确性。

5.水浴锅内水位必须达到离心管内液面之上

6.比色之前应先检查比色杯空杯（内乘双蒸水）的吸光度是否一致。

最好选用差别在0.003之内的比色杯。

烟叶中烟碱的测定（提取脱色法）

（一）方法原理

由于烟碱和无机酸结合较有机酸强，因此，用一定浓度的无机酸提取，完全可以把烟碱从烟叶中分离出来。

同时，用粉状活性炭脱去提取液中杂色。

然后根据烟碱对紫外光有选择吸收，其吸光度与烟碱含量呈正相关，可由紫外分光光度计测得待测液的浓度，计算出烟碱的含量。

（二）试剂及仪器

40g/kgHCl：

吸取4mLHCl倒人80mL水中，定容至100ml

分析天平、紫外分光光度计、恒温水浴锅。

（三）操作步骤

1．待测液的制备称取粉碎均匀通过60目筛的烟样30mg左右，置于100mL三角瓶中，加入1/3角勺粉状活性炭和40g/kgHCl25mL，不断振荡10min，然后过滤到100mL容量瓶中，并少量多次用蒸馏水冲洗三角瓶，将洗液滤入容量瓶中，并定容至刻度，充分摇匀，以备测定用。

另把40g/kgHCl25mL加入100mL容量瓶中，用蒸馏水定容后，摇匀做空白。

2．测定将上述待测液置紫外分光光度计上，以空白作参比，调吸光度为零，在236nm、259nm、282nm处测定待测液的吸光度。

（四）结果计算

1.059×[A259－1/2（A236+A282）]

烟碱%＝————————————×100

W（1-水%）×34.3×1000

式中W——干样重（g）；

1.059——换算为重量法测定值的校正系数；

34.3——烟碱的吸光系数。

（五）注意事项

（1）不要用颗粒状活性炭。

（2）及时清洗用具，否则活性炭很难洗干净

烟叶中氯含量的测定（浸提法）

——热蒸馏水法

一、实验原理

依据烟叶中的氯大都以离子状态存在的特点,用热水将氯从烟叶中提取出来,可节省时间、提高效率,但提取液中有影响滴定终点的黄色素。

根据碱性醋酸铅常用作液体澄清剂的特点,在用热蒸馏水浸提烟叶中氯的同时,加入碱性醋酸铅,有效去除浸提液中干扰测定的色素,得到一个快速制备氯待测液前处理的简便方法（浸提法）。

在含有C1-的溶液中，以K2CrO4作指示剂，用AgNO3标淮溶液瘸定，由于AgCl的溶解度比Ag2CrO4小，反过来说，铬酸银的溶液度比AgCl的高，开始时只生成AgCl沉淀，待CI-作为AgCl全部沉淀完毕后，过量一滴AgNO3才生成Ag2CrO4砖红色沉淀。

NaCl十AgNO3_——＞AgC1（乳白色）十NaNO3。

铬酸钾和银盐的反应如下：

K2CrO4十2AgNO3——＞2KNO3十Ag2CrO4（砖红色）

由消耗的标准硝酸银用量，即可计算出氯离子的含量。

二、试剂与仪器

1.材料烟叶样品经40℃烘干,粉碎过60目筛,混匀。

2.主要仪器和试剂

（1）恒温振荡器及各种玻璃器皿；

（2）0.02mol/LAgNO3标准溶液,50g/LK2CrO4，1g/L酚酞指示剂，

200g/L碱性醋酸铅（pH8）

三、试验方法

1.准确称取1.0000g烟叶样品,置于150ml三角瓶中,加入60℃热蒸馏水50ml,200g/L碱性醋酸铅2ml,振荡20min,

2.待絮状沉淀完全后,过滤到100ml容量瓶中,冷却后定容至刻度,充分摇匀。

3.吸取滤液10ml于100ml三角瓶中,用蒸馏水稀释至30ml,用10％的H2SO4及12％Na2HCO3分别调待测液到微碱性，用酚酞指示剂，微红色为止。

4.加入50g/LK2CrO4指示剂10滴,用0.02mol/LAgNO3标准溶液滴定,不断摇动,当待测液出现砖红色沉淀时,记下AgNO3的用量,计算测定结果。

四、结果计算

式中V—滴定时所消耗硝酸银的体积

N—硝酸银的当量浓度

W—烟叶称祥重量（克），

0.0355—每l毫克当量氯离子的克数

100—换算成每100克烟叶中氮的百分含量。

五、注意事项

1.用铬酸钾做指示剂只能在中性或微碱性溶液中进行，测定溶液应在pH6.5—10.5之间。

这是因为在酸性溶液中，指示剂的铬酸根离子与氢离子发生如下反应：

2H+十2CrO4-＝2HCrO4=CrO4-十H2O

因而减低了铬酸根离子的浓度，影响铬酸银沉淀的生成。

然而在强碱性溶液中，则银离子与氢氧根离子反应生成氧化银沉淀，又会影响分析结果，其反应如下：

2Ag-十2OH-＝2AgOH==Ag2O十H2O

2.氯离子含量太高时，生成白色氯化银沉淀过多而影响终点，此时可减少待测液吸取量。

3.大量硫酸盐存在会对测定发生干扰，当待测液中硫酸根离子存在量在32毫克以下时对本测定一般无干扰。

4．滴定时要充分摇动：

在等当点前C1-没有被滴定完，但有一小部分C1—会被AgC1沉淀吸附，特使终点提前，所以要充分摇办使被沉淀吸附的C1—释放出来，以获得准确的结果。

烟叶中氯含量的测定（浸提法）

——硫酸法

一、实验原理

用酸提取烟叶中的氯。

二、试剂与仪器

1.材料烟叶样品经40℃烘干,粉碎过60目筛,混匀

2.试剂0.2mol/LH2SO4,0.02mol/LAgNO3标准溶液,50g/LK2CrO4

10%NaOH,0.1%酚酞指示剂

三、测定步骤

（1）氯待测液制备及测定精密称取经粉碎通过60目筛的烟叶样品0.5000g和1.0000g活性炭，置于100ml干燥的三角瓶中，加入25ml0.2mol·l-1H2SO4在25℃室温下振摇20min，随即过滤到洗净的50ml容量瓶中，定容摇匀。

取20ml于干燥的100ml三角瓶中，用10%NaOH调滴定液的pH为6.5～10.5。

再滴加5%K2CrO40.4ml摇匀后用标准的0.02mol/LAgNO3滴定至溶液中有砖红色沉淀出现不再消失为止。

记下AgNO3用量，然后根据公式计算待测液中氯的百分含量。

四、结果计算

Cl%=0.035×C×V×N×100/W

式中：

C—标准AgNO3浓度mol/L；V-AgNO3用量（ml）

N-2.5W—干烟样重（g）；0.035-Cl-的摩尔质量

钾含量的测定（浸提法-火焰光度法）

——硫酸法

一、实验原理

用常规法测定烟叶中钾和氯的含量,前处理分别用干灰化法和碱性干灰化法制备待测液。

其不足之处是时间长、效率低。

因为烟叶中的钾大多与有机酸结合成盐,用一定浓度的无机酸溶液即可将其从烟叶中提取出来,对常规法的前处理进行改进,改进方法是选用合适的酸在提取的同时,用活性炭脱去被溶出的色素,并和其他试验条件配合,建立测定钾前处理方法。

二、试剂和仪器

1.恒温干燥箱和振荡器各一台,各种玻璃器皿。

2.浓度0.2mol/LH2SO4,5%K2CrO4指示剂,浓度0.02mol/LAgNO3,浓度100mg/LK标准溶液,NaCl、NaOH和无氯粉状活性炭,所用试剂均为分析纯。

三、试验方法

1.准确称取经粉碎过60目筛的烟叶样品0.5g,置于150ml三角瓶中,加入1g活性炭和25ml浓度0.2mol/LH2SO4。

2.25℃以上振荡20min,过滤到100ml容量瓶中,并多次用少量蒸馏水冲洗三角瓶,洗液转移到容量瓶中并定容至刻度,充分摇匀。

K（%）=C×V×a×10-6×100/G

其公式中:

C——从标准曲线上查得待测液中K的质量浓度（μgml-1）;

V——待测液体积（ml）;

a:

待测液的分取倍数;

10-6:

微克（μg）换算为克（g）的换算系数;

G:

烘干样品质量（g）;

钾含量的测定（浸提法-火焰光度法）

——盐酸法

一、实验原理

同上

二、试验材料和试剂仪器

（1）钾标准溶液:

准确称取烘干（110℃4h）的分析纯氯化钾0.9534g于小烧杯中,用水溶解转移到500ml容量瓶中,定容至刻度,摇匀。

此溶液钾浓度为1000ppm（每ml含钾1.0mg）,准确取1000ppm钾标准溶液50ml定容成500ml,即为100ppm钾标准溶液,贮于塑料瓶中备用。

（2）0.5N盐酸溶液:

分析纯盐酸配制。

（3）仪器:

上海产6400型火焰光度计。

三、测定步骤

1.工作曲线的绘制

从100ppm钾标准液中吸取10、20、30、40、50ml,分别置100ml容量瓶中,再分别加入0.5N盐酸溶液15ml,用水定容至刻度,摇匀,即得到系列分别为10、20、30、40、50ppm的测定用钾标准溶液。

在火焰光度计上,以蒸馏水定检流计的零位,然后按从稀到浓的顺序测量上述一系列钾标准溶液,记录检流计的读数。

以检流计读数为纵坐标,以钾浓度（ppm）为横坐标绘制工作曲线。

2.　钾待测液制备及测定

精密称取经粉碎通过60目筛的烟叶样品0.1000g左右,置于100ml干燥容量瓶中,加入15ml0.5N盐酸,在20℃以上室温下,振摇20min,然后用水定容、摇匀,随即过滤到洗净烘干的试管中（弃去初滤的20ml左右）,直接在火焰光度计上测定,记下检流计的读数,然后从工作曲线上查得待测液的钾浓度（ppm）。

3.结果计算

K%=C·V×100×10-6/G

式中:

C———从工作曲线上查得的待测液含钾浓度（ppm）;

V———待测液的体积（100ml）;

G———干烟样重（g）;

10-6———重量换算系数。

烟叶钾的测定——NH4OAc浸提，火焰光度法

一、方法原理

以NH4OAc作为浸提剂与阳离子起交换作用，NH4OAc浸出液常用火焰光度计直接测定。

为了抵消NH4OAc的干扰影响，标准钾溶液也需要用1mol·L-1NH4OAc配制。

二、主要仪器与试剂

1.火焰光度计、往返式振荡机

2.试剂

（1）1mol·L-1中性NH4OAc（pH=7.0）溶液。

称取化学CH3COONH477.09g加水稀释，定容至近1L。

用HOAc或NH4OH调pH=7.0，在酸度计上调节）。

根据50mL所用NH4OH或稀HOAc的毫升数，算出所配溶液大概需要量，最后调至pH=7.0。

（2）钾的标准溶液的配制。

称取KCl（二级，110℃烘干2h）0.1907g溶于1mol·L-1NH4OAc溶液中，定容至1L，即为含100µg·mL-1K的NH4OAc溶液。

同时分别准确吸取此100µg·mL-1K标准液0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、40.0mL放入100mL容量瓶中，1mol·L-1NH4OAc溶液定容，即得0、2.5、5.0、10.0、15.0、20.0、40.0µg·mL-1K标准系列溶液。

三、操作步骤

称取通过筛的烟样2.00g于100mL三角瓶或大试管中，加入1mol·L-1NH4OAc溶液25mL，塞紧橡皮塞，振荡30min，用干的普通定性滤纸过滤。

滤液盛于小三角瓶中，同钾标准系列溶液一起在火焰光度计上测定。

记录其检流计上的读数，然后从标准曲线上求得其浓度。

标准曲线的绘制：

将上面配制的钾标准系列溶液，以浓度最大的一个定到火焰光度计上检流计为满度（100），然后从稀到浓依序进行测定，记录检流计上的读数。

以流计读数为纵坐标，钾（K）的浓度µg·mL-1为横坐标，绘制标准曲线。

四、结果计算

土壤速效钾（mg·kg-1，K）=待测液（µg·mL-1，K）×

式中：

V——加入浸提剂mL数：

m——烘干烟样的质量（g）。

五、注释

1．含NH4OAc的K标准溶液配制后不能放置过久，以免长霉，影响测定结果。