产单核李斯特菌生物危害评估报告.doc
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产单核李斯特菌生物危害评估报告
一、细菌的传播与致病
产单核李斯特菌是李斯特菌属中唯一可对人类致病的菌种，能够引起李斯特菌病，主要表现为脑膜炎和败血症。
健康的带菌者是主要的传染源，可以经粪-口途径传播，也可以通过胎盘和产道由带菌的母亲感染给新生儿。
如果人的眼睛或皮肤与带菌的病畜直接接触，也可造成局部感染。
产单核李斯特还能引起鱼类、鸟类和哺乳动物牛、羊等多种动物疾病。
二、细菌的生物学特性
产单核李斯特菌是一种革兰阳性短小杆菌，大小约为1~2μm×0.4~0.5μm，通常成双排列，偶尔可见双球状。
有鞭毛，但仅在18~20℃有动力，在37℃动力缓慢。
无芽胞，一般不形成荚膜，但在含有血清的葡萄糖蛋白胨水中能形成粘多糖荚膜。
兼性厌氧，对营养要求不高，普通培养基上可生长，在血平板上会形成β-溶血。
最适的生长温度是30~37℃，并可在4℃条件下进行冷增菌。
产单核李斯特菌与葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌等及大肠埃希菌具有共同抗原。
根据菌体及鞭毛抗原的不同，可将其分为4个血清型，1、3、4型还可分为若干亚型。
抗原的结构与毒力无关，致病的物质主要是溶血素和菌体表面成分。
其中1型主要感染啮齿动物，4型主要感染反刍动物。
但各型均可对人类致病，尤以1a和1b最为多见。
本菌耐碱不耐酸，对热较为敏感，加热50℃10min即可死亡。
同时该菌对多种抗生素敏感，以氨苄青霉素为首选，尚有青霉素、链霉素、四环素、氯霉素和红霉素等敏感。
但该菌对磺胺、杆菌肽和多粘菌素耐药。
三、细菌的实验室检查
1、标本采集采集来自临床的各种标本，如脑脊液和血液。
此外还可根据症状采集子宫、子宫颈、阴道、鼻咽部等部位的分泌物或组织，还有新生儿脐带残端、羊水及胎粪、尿等送检。
2、涂片镜检除了血液标本外，其余标本都可以涂片做革兰染色镜检，或用产单核李斯特菌1型和4型及多价荧光抗体进行染色。
3、动力检查在18~20℃有动力，在37℃动力缓慢。
若发现有动力，应立即报告并及早进行抗生素治疗，以预防本菌败血症或脑膜炎的发生。
4、分离培养取脑脊液离心后的沉淀物划线接种于羊血琼脂平板上，于10%CO2环境中进行培养，35℃孵育18~24h；血液标本5ml注入含有50ml培养基的血培养瓶中，同样在含10%CO2环境中进行培养；咽喉拭子、组织及粪便标本可接种于肉汤培养基置4℃冰箱中进行冷增菌。
结果：
产单核李斯特菌在血琼脂平板上能产生狭窄的β-溶血环，菌落呈灰白色，直径1~2mm；在肉汤中呈均匀混浊生长表面形成薄膜；在半固体培养基内，可形成倒伞形生长。
5、生化鉴定本菌可发酵多种糖类如葡萄糖、果糖、覃糖、麦芽糖核水杨素，产酸不产气。
甲基红和V-P实验阳性，触酶阳性，可使石蕊牛乳缓慢产酸并使其脱色，能水解精氨酸产氨。
不还原硝酸盐、不形成吲哚、不液化明胶和凝固血清，不分解尿素。
能水解七叶苷，有时还可形成硫化氢。
6、血清学实验用已知的李斯特菌1型、4型和多价抗血清玻片凝集试验对可疑菌进行鉴定。
7、动物结膜点种试验取幼兔或豚鼠一只，用本菌24h肉汤培养物1滴，滴入实验
8、动物一侧的结膜囊内，以另一侧为对照，观察5天。
一般产单核李斯特菌会在接种后的24~36h内，出现化脓性结膜炎。
四、细菌的生物安全防护
根据《病原微生物生物实验室生物安全管理条例》中的有关规定，人间传播的微生物名录（待颁布）产单核李斯特菌属于三类，BSL-2。
相关的防护事宜包括：
（1）操作要求
1、实验时，未经实验室主任同意，限制或禁止进入实验室。
2、不许在工作区域饮食、吸烟、清洗隐型眼镜和化妆。
食物应存放在工作区域以外专用橱柜或冰箱中。
3、对于污染的锐器，必须时刻保持高度的警惕，包括针、注射器、玻片、加样器等。
4、注射和吸取感染材料时，只能使用针头固定注射器或一次性注射器（即注射器和针头是一体的）。
用过的一次性针头必须弯曲、切断、破碎、重新套上针头套、从一次性注射器上去掉，或在丢弃前进行人工处理，要不将之小心放入不会被刺穿的、用于收集废弃锐器的容器中。
非一次性锐器必须放置在坚壁容器中，转移至处理区消毒，最好高压杀菌。
5、打碎的器皿不能直接用手处理，必须用其它工具处理，如刷子和簸箕、夹子或镊子。
盛污染的针头、锐器、碎玻璃的容器在倒掉前，应按照相关的规定进行消毒。
6、所有的培养物、储存物及其它规定的废物在释放前，均应使用可行的消毒方法进行消毒，如高压灭菌。
转移到就近实验室消毒的物料应置于耐用、防漏容器内，密封运出实验室。
离开该系统进行消毒的物料，在转移前应包装，其包装应符合有关的法规。
7、按日常程序、在有关传染源的工作结束后、尤其是传染源溅出或洒出后、或受到其他传染源污染后，实验室设备和工作台面应当使用有效的消毒剂消毒。
污染的设备在送去修理、维护前，要按照相关的规定消毒；在离开设施转移前，要按照相关的规定打包运输。
（2）安全设备
1、正确使用和保养生物安全柜、最好是二级生物安全柜、或其他合适的人员防护设施、或物理遏制装置。
2、确定可能形成传染性气溶胶或溅出物的实验过程，包括离心、研磨、匀浆、剧烈震荡或混匀、超声波破裂、开启装有传染源的容器、采集感染标本等。
3、涉及高浓度或大体积的传染源时，若选用密封转头或带安全罩的离心机，若转头或安全罩仅在生物安全柜中打开，则可在开放实验室内离心。
4、在实验室内，必须使用专用的防护性外衣、大褂、罩衫或制服。
人员到非实验室区域时，防护服必须留在实验室内。
防护服可以在实验室内处理，也可以在洗衣房中洗涤，但不能带回家中。
5、可能接触潜在传染源、被污染的表面或设备时，要戴手套。
一次性手套不用清洗、不能重复使用，不能用于接触“洁净”的表面（键盘、电话等），也不应当戴着到实验室外。
要备有带滑石粉的乳胶手套。
脱掉手套后，要洗手。
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