课题规划与实施阶段的文献查阅-.ppt

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课题规划与实施阶段的文献查阅,苏川南京医科大学病原生物学系86862774江苏省现代病原生物学重点实验室86862773,GR-3,一、科研任务的三个阶段,科研选题阶段课题实施阶段查阅文献草拟研究方案、选择实验方法预试验/方案与方法修正正式实验结果分析与论文撰写阶段,二、课题实施阶段文献查阅的原则,不善于查找文献或未能认真、有效地检索和阅读文献，是造成课题重复和无效劳动的关键因素。

合理使用、组合不同的检索词查阅不同种类的期刊、不同种类的文献大量阅读不同质量的文献，比较并批判性地采用,实验方案的选择（选用什么实验方案）：

三多一少多看好文章多比较：

找出共同点，分析各研究中采用不同方法的可能原因多请教有经验的人少单纯追求方法上的创新最适，并受诸多条件的限制实验方法设计的基本原则：

三、课题实施/方案修正阶段文献阅读的特点（着眼点）与科研选题阶段文献查阅的不同之处：

对照的设置（实验设计之关键）对照的意义：

对照的意义首先在于：

通过对照鉴别实验因素与非实验因素的差异。

对照的意义其次在于：

通过对照消除和减少实验误差。

设立对照的要点：

对照组与实验组有可比性对照的数量要足够对照处理的均衡性（一致性）对照的形式：

自身对照组间对照潜在对照历史对照重复实验重复多样本量有统计学意义不浪费,随机化：

单纯随机抽样系统抽样分层抽样整群抽样双步抽样实验方法细节的确定：

不盲目相信文献不完全相信文献多请教有经验的人,阅读文献时要注意实验设计的基本要素所谓实验，就是尽可能地排除外界的许多影响，突出主要因素，并且在能够仔细地观察到各种现象之间相互关系的条件下，使某一事物（或过程）发生或重演。

大多数医学研究课题，其目的都是为了阐明某些因素作用于某一研究对象时所产生的效应或影响。

因此，因素、对象、效应便成了实验设计中的三个基本组成部分（或三个基本要素）。

四、实验方案设计时的文献阅读须关注的细节,因素：

包括内在因素和外加因素A.内在因素：

受试对象本身的因素研究人群血脂水平与冠心病发病率的关系时，血脂水平是该项研究中的（内在）因素研究子女高血压发生频率与父母高血压病之间的关系时，要探索和考虑的是遗传因素B.外加因素：

处理因素，目的是为了观察受试对象的反应化学的：

药物、毒物、营养物等物理的：

按摩、理疗、温度、压力等生物的：

病毒、细菌、原虫等,C.对于因素，要注意数量、质量和强度三个方面数量：

一个实验中要研究的因素可为一个或多个，如同一种药可分为大中小三个剂量水平质量:

因素为一种化学药品：

生产厂家、剂型、批号、质量贮存方法等必须一致。

因素为一种手术：

在实验正式开始前必须先达到较为熟练的程度，否则在实验的前一阶段很不熟练，后一阶段才渐渐稳定下来，必然会对实验结果造成较大的误差。

强度：

对于外加因素的研究，要注意合理的、持续的强度。

如给药方法、用药次数、疗程和间隔时间等，在不同对象及整个研究过程中应保持一致。

对象：

受试的人、动物、细胞、器官、组织等受试对象基本条件是否具备：

诊断标准等受试对象选择标准必须统一、恰当。

受试条件的生物学特性：

注意动物的（品系）敏感性及国家标准、细胞的状态等。

研究对象的选择：

合适、最有利于检验假说人的选择动物的选择细胞、器官、组织等的选择人、动物、细胞等之间的选择,效应：

试验结果，其指标的检测要注意指标的性质合适观察指标与检测指标、定量指标与定性指标指标与研究目的的相关性指标的数量合适适量但足够说明问题数量太多也是一种浪费分清主要指标与次要指标尽量采用客观指标：

通过仪器或特定程序记录下来的各种数据资料。

指标的精密与准确,TargetedExpressionofGFP/TRAILFusionProteinfromhTERTPromoterElicitsAntitumorActivitywithoutToxicEffectsonPrimaryHumanHepatocytes,TongyuLin,JianGu,LidongZhang,XuefengHuang,L.CliftonStephens,StevenA.Curley,andBingliangFang2DepartmentsofThoracicandCardiovascularSurgeryT.L.,J.G.,L.Z.,X.H.,B.F.,VeterinaryMedicineL.C.S.,andSurgicalOncologyS.A.C.,TheUniversityofTexasM.D.AndersonCancerCenter,Houston,Texas77030,CANCERRESEARCH62,36203625,July1,2002,SomeAbbreviations,TRAILtumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligandGV16GAL4/VP16fusionproteinhTERThumantelomerasereversetranscriptaseGTGal4/TATANHFBnormalhumanfibroblastNHPHnormalhumanprimaryhepatocyte,Background,TRAIL:

Apo2LA40kDatypeIItransmembraneproteinOnecytokineoftheTNFfamilyThehighestaminoacidhomologywithFasL（28%）TNF-（23%）lymphotoxin-（23%）lymphotoxin-（22%）,ThefunctionofTRAIL,Apoptosis:

anticanceractivitySuppresstumormetastasisPreventauto-immunityVirusinduceddiseases,T.M.Baetu,J.Hiscott/Cytokine&GrowthFactorReviews13（2002）199207,Recentfindings:

Normalhumanhepatocytes,braintissue,andcertainepithelialcellsaresusceptibletorecombinantTRAILproteinsThepotentialtoxicityoftheTRAILproteinifadministeredsystemicallydirectintroductionoftheTRAILgeneintocancercellscanelicitapoptosisandsuppresstumorgrowthinvitroandinvivo.nontransducedneighboringcancercellscanbekilledbytheTRAILorGFP/TRAILfusiongenesthroughbystandereffects.,thehTERTpromotertargetproapoptoticgenestocancerstheGAL4generegulatorysystemaugmenttransgeneexpressionfromthehTERTpromoterwithoutlosingthetargetspecificity.Ad/gTRAIL:

expresstheGFP/TRAILfusiongenedrivenbythehTERTpromoterviaGAL4gene-regulatorycomponents.,Questions,1.IfAd/gTRAILhavetoxiceffectsonnormalhumanhepatocytesornot?

11：

invitro12：

invivoIfAd/gTRAILcaninduceapoptosisincancercellsornot?

21：

invitro22：

invivo,1.ConstructionandCharacterizationofAd/gTRAIL（Fig1A）,thehTERTpromoteraGAL4gene-regulatorysystem,Answer,abicistronicadenoviralvector,Ad/gTRAILwhichexpressestheGFP/TRAILfusiongenefromthehTERTpromoterviatheGAL4gene-regulatorysystem.,2.characterizethisvectorsfunctionality（Fig1B）,Humancoloncancercellline:

DLD-1Ad/CMV-GFP50%GFP-positivecellsnocelldeath.Ad/gTRAILthesamelevelofGFP-positivecells90%oftheAd/gTRAIL-treatedcellswerekilled48haftertreatment,Question1:

IfAd/gTRAILhavetoxiceffectsonnormalhumanhepatocytes?

Question1-1:

InvitroTransgeneExpressionandToxicityofAd/gTRAILinNormalHumanPrimaryHepatocytes（NHPH）orNormalHumanFibroblast（NHFB）Question1-2:

InvivoTransgeneExpressionandToxicityofAd/gTRAILafterSystemicAdministration,ToanswerQuestion1-1TransgeneExpressionandToxicityofAd/gTRAILinNHPHsorNHFBs,NHPHsorNHFBsPBS,Ad/CMV-GFP,Ad/gTRAIL,orAd/GT-TRAIL+Ad/PGK-GV16TwodayslaterAnalyzeGFPexpressionQuantifyapoptoticcellsbyflowcytometricassay,Cytometricanalysisofapoptosis（Fig2A）,GFP-positivecells（NHPHsorNHFBs）Ad/CMV-GFP:

50%Ad/gTRAIL:

30%apoptoticcellsinNHFBsAd/gTRAILAd/GT-TRAIL+Ad/PGK-GV16backgroundlevelsofapoptosis,toppanel:

levelsofGFPexpressionbottompanel:

apoptoticcelldeath,Fig2A,microscopicstudy（Fig2B）,cellmorphologyofNHPHsat48haftertreatment,Fig2B,cellviabilityassay（Fig2C）,Fig2C:

PBS（）,Ad/CMV-GFP（）,Ad/gTRAIL（）,andAd/GT-TRAIL+Ad/PGK-GV16（*）.,InvitroAd/gTRAILhavenotoxiceffectsonNHPHsorNHFBs,conclusion1-1,ToanswerQuestion1-2TransgeneExpressionandToxicityofAd/gTRAILafterSystemicAdministration（Fig3）,AdultBALB/cmicePBS,Ad/CMV-GFP,Ad/gTRAIL,andAd/GT-TRAIL+Ad/PGK-GV16HistopathologicalchangesLiverfunctiontest:

ASTALTWesternblotanalysisofGFPorGFP/TRAILfusionproteinexpression,HistopathologicalChanges,Ad/GT-TRAIL+Ad/PGK-GV16Ad/gTRAILAd/CMV-GFPPBS,liverfunctiontest（Fig3A）,PBSAd/CMV-GFPPBSAd/CMV-GFPAd/gTRAILAd/gTRAILAd/GT-TRAIL+Ad/PGK-GV16Ad/GT-TRAIL+Ad/PGK-GV16,1,DLD-1cancercellstreatedwithAd/gTRAIL24,liversamplesaftersystemicadministrationofAd/GT-TRAIL+Ad/PGK-GV1657,liversamplesaftersystemicadministrationofAd/gTRAIL89,liversamplesaftersystemicadministrationofAd/CMV-GFP,Fig3,InvivoAd/gTRAILdoesntshowmoretoxiceffects.,conclusion1-2,TreatmentofNHPHswithAd/gTRAILresultedinnodetectabletransgeneexpressionandinminimaltoxicityInvivostudyonmiceshowednotransgeneexpressionfromAd/gTRAILinliveraftersystemadministrationofahighdoseofAd/gTRAIL,conclusion1-1+1-2,4.Question2:

IfAd/gTRAILcaninduceapoptosisincancercells?

Question2-1:

InvitroTransgeneExpressionandApoptosisInductionbyAd/gTRAILinCancerCellsinVitroQuestion2-2:

InvivoSuppressionofTumorGrowthbyd/gTRAILinVivo,ToanswerQuestion2-1（Fig4）TransgeneExpressionandApoptosisInductionbyAd/gTRAILinCancerCellsinVitro（Fig4A）,humanlungcancercelllines（A549andH460）humancoloncancercelllines（DLD-1andLovo）Ad/gTRAILAd/CMV-GFPAd/GT-TRAIL+Ad/PGK-GV16,Twodayslater,cellswereharvestedandanalyzedforGFPexpressionandapoptosisbyFACS.Ad/CMV-GFPorAd/gTRAIL:

similarlevelsofGFP-positivecells（7090%）Ad/gTRAILdramaticallyincreasethenumberofapoptoticcells.,toppanel:

LevelsofGFPexpressionbottompanel:

apoptoticcelldeath,Fig4A,Ad/CMV-GFPhighlevelsoftransgeneexpressionbackgroundlevelsofapoptosisAd/GT-TRAIL+Ad/PGK-GV16backgroundlevelsofGFP-positivecellshighlevelsofapoptosisincancercellsAd/gTRAILhighlevelsoftransgeneexpressionhighlevelsofapoptosisincancercellscellkillingeffectsXTTassay,cellviabilityassay（Fig4B）PBS（）,Ad/CMV-GFP（）,Ad/gTRAIL（）,andAd/GT-TRAIL+Ad/PGK-GV16（*）.,Fig4B,InvitroAd/gTRAILinducesapoptosisincancercells,conclusion2-1,ToanswerQuestion2-2（Fig5）SuppressionofTumorGrowthbyAd/gTRAILinVivo,Ad/GT-TRAIL+Ad/PGK-GV16Ad/gTRAILAd/CMV-GFPPBSAd/gTRAILsurvivaladvantage,

（1）Intralesionaladministration（Fig5A）,

（2）cumulativeproportionsurvivalcurveofanimalsbearingDLD-1tumors（Fig5B）,（3）Posttreatmenthistochemicalexamination,Ad/gTRAILorAd/GT-TRAIL+Ad/PGK-GV16dramaticallyincreasedapoptosisAd/CMV-GFPorPBSbackgroundapoptosis,Fig5C:

InvivoAd/gTRAILinducesapoptosisinxenograftmodel.,conclusion2-2,Ad/gTRAILElicitapoptosisinmalignantcellsSuppresstumorgrowthinvivo,conclusion2-1+2-2,1.IfAd/gTRAILcaninduceapoptosisincancercellsornot?

Ad/gTRAILcaninduceapoptosisincancercellsbothinvitroandinvivo.2.IfAd/gTRAILhavetoxiceffectsonprimaryhumanhepatocytesornot?

Ad/gTRAILhavenotoxiceffectsonnormalhumanhepatocytesbothinvitroandinvivo.,answers,本文的优缺点,优点小有创新实验设计周到对照设置正确实验方法采用合理结果阐述恰当推理合适,缺点仅停留于现象观察而丝毫未及本质（为什么。

）研究专题的局限研究结果与意义缺乏普遍适用性新意不足,谢谢！

怎样才是一篇好文章,一、刊登在好杂志上（第一印象）杂志/文章分类按性质分综述类通讯类临床类科研类。

按专业类别分公共（通用）类专业类,二、科学意义评价高,影响因子高（多为公共类期刊）当年影响因子多年平均影响因子JournalImpactfactor在本专业地位重要（多为专业类期刊）,三、对科研的贡献大,影响因子高的公共类期刊新（发现、理论）从现象到本质实验设计无缺陷从多个角度证明同一个道理影响因子虽不高的专业类期刊在本专业的研究尚属前沿有创新但不大实验设计缺陷少其研究结果的通用性不大,如何来鉴赏一篇好文章,一、标题、作者、单位二、研究背景本研究的意义本研究的国内外研究背景/现状本课题组的研究基础目前尚存在的问题,三、方法、结果与分析实验设计无缺陷用最恰当的方法解决问题！

实验结果的合理分析四、讨论对单个实验结果作恰如其份的评价结合研究现状对整个研究的意义进行阐述五、参考文献时效性、权威性,