肝糖原的提取鉴定与定量第七实验室一类特选.docx
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肝糖原的提取鉴定与定量第七实验室一类特选
南方医科大学
生物化学实验报告
姓名:
学号:
专业年级:
组别:
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称
Folin-酚试剂法测定蛋白质含量
实验日期
实验地点
合作者
指导老师
评分
教师签名
批改日期
格式要求:
正文请统一用:
小四号,宋体,1.5倍行距;数字、英文用TimesNewRoman;标题用:
四号,黑体,加粗。
需强调的地方请用蓝颜色标出。
不得出现多行、多页空白现象。
一、实验目的
1、学习并掌握肝糖原提取和鉴定原理和方法;
2、学习并掌握蒽酮比色测定糖原含量的原理、注意事项和操作方法;
3、学习并掌握刻度吸管和微量加样枪的使用方式;
4、正确掌握使用离心机的方法步骤;
5、熟练运用溶液混匀的各种方法;
6、正确掌握溶液转移的操作;
7、正确掌握使用分光光度计的方法步骤
二、实验原理
实验1肝糖原的提取与鉴定
糖原是生物的主要储能物质之一,主要储存与肝细胞中,采用研磨匀浆等方法可以使肝细胞破碎。
肝细胞破碎,细胞内容物流出。
低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性,破坏肝组织中的酶并且使蛋白质沉淀,糖原则能够稳定地保存在上清液中,从而达到分离糖原与蛋白质等其他成分的目的。
糖原不溶于乙醇但可溶于热水,故可以先用95%乙醇将滤液中糖原沉淀,再溶于热水中。
糖原水溶液呈乳样光泽,遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中,依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
此外,糖原还可以被酸水解成葡萄糖,利用呈色反应和葡萄糖的还原性,可以判定肝组织中糖原的存在。
糖原水解溶液与班氏试剂混匀沸水浴加热2min后会出现砖红色沉淀。
CuSO4+2NaOH=Na2SO4+Cu(OH)2↓
2Cu(OH)2+C6H12O6=2CuOH+氧化型葡萄糖+H2O