银杏叶多糖的提取与含量测定论文.docx
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银杏叶多糖的提取与含量测定论文
银杏叶多糖的提取与含量测定（论文）
银杏叶多糖的提取与含量测定
摘要:
以干燥的银杏叶为原料，采用水提醇沉法提取其中的活性物质-银杏叶多糖，并测定其含量。
通过单因素实验研究了乙醇沉淀浓度、乙醇用量和沉淀次数对银杏叶提取纯化率的影响，从而确定了提取银杏叶多糖的优化条件为：
料液比1:
30，浸提温度80℃，浸提时间3h，浸提次数2次，在浸提液真空浓缩至原来体积30％，用1.5倍体积无水乙醇沉淀2次，干燥，洗涤，银杏叶多糖得率为4.925%。
关键词：
银杏叶多糖；单因素试验；提取纯化；含量测定
Abstract:
Choosingdriedginkgoleavesasrawmaterial.Weusedthemethodofwaterextractionandalcoholprecipitationtoextracttheactivesubstance.Thepolysaccharidesofginkgoleaf,anddeterminedthecontentofit.Usingsinglefactorexperimentalmethod,westudiedtheimpactsofalcoholprecipitationconcentration,alcoholdosageandprecipitationtimesonthepurityofextraction,andconcludedthattheoptimalconditiontoextractpolysaccharidesis:
materialliquidratio-1:
30.extractiontemperature-80℃,extractiontime-3hours,extractiontimes-twice.Whenextractionsolutionvacuumconcentratedto30%oftheoriginalvolume,use1.5timesthevolumeoftheabsolutealcoholtoprecipitatetwice,andthen,wash,dry,theyieldofpolysaccharidesreached4.925%.
Keywords:
polysaccharide;singlefactorexperiment;extraction
3.3单因素实验
3.3.1醇浓度的影响
称取已粉碎的银杏新叶5g5份，分别加入锥形瓶中，各加入150ml蒸馏水，并分别编号1~5号，于80℃水浴中浸提3h。
取出离心，取上清液，残渣同前再浸提一次，取出离心，合并两次上清液。
上清液在60℃下浓缩成30%的体积，分别加3倍体积的无水乙醇、95%乙醇、90%乙醇、85%乙醇、80%乙醇，置冰箱中沉淀24h。
再次离心，取沉淀，用85%、95%和无水乙醇反复洗涤，干燥，按标准曲线绘制项下方法测定其吸光度并计算多糖含量。
3.3.2醇沉淀次数的影响
称取已粉碎的银杏新叶5g3份，分别加入锥形瓶中，各加入150ml蒸馏水，并分别编号1~3号，于80℃水浴中浸提3h。
取出离心，取上清液，残渣同前再浸提一次，取出离心，合并两次上清液。
上清液在60℃下浓缩成30%的体积。
1号中加入3倍体积无水乙醇；2号中加入1.5倍体积无水乙醇，沉淀12h后，离心，取沉淀，上清液再加入1.5倍体积无水乙醇，沉淀12h；3号中加入1倍体积无水乙醇，沉淀8h后，离心，取沉淀，上清液再加入1倍体积无水乙醇，沉淀8h后，离心，取沉淀，上清液再加入1倍体积无水乙醇，沉淀8h。
再次离心，取沉淀并合并，用85%、95%和无水乙醇反复洗涤，干燥，按标准曲线绘制项下方法测定其吸光度并计算多糖含量。
3.3.3新叶与落叶的比较
称取已粉碎的银杏新叶5g2份，银杏落叶5g2份，分别加入锥形瓶中，各加入150ml蒸馏水，并分别编号1~4号，于80℃水浴中浸提3h，取出离心，取上清液，残渣同前再浸提一次，取出离心，合并两次上清液。
上清液在60℃下浓缩成30%的体积。
加1.5倍体积的无水乙醇，醇沉12h，离心，取沉淀，上清液再加入1.5倍体积无水乙醇，沉淀12h。
再次离心，合并两次沉淀，用85%、95%和无水乙醇反复洗涤，干燥，按标准曲线绘制项下方法测定其吸光度并计算多糖含量。
4结果与讨论
4.1葡萄糖标准曲线图
C（mg/ml）
0
0.001
0.002
0.003
0.004
0.005
0.006
A620nm
0
0.013
0.089
0.122
0.194
0.206
0.213
表1葡萄糖标准曲线表
图1葡萄糖标准曲线图
由葡萄糖标准曲线可以看出，在490nm处的吸光度值随着葡萄糖浓度的增加而线性增加，线性方程为y=0.040x-0.0419。
由此，我们可以根据葡萄糖标准曲线图而推断出银杏叶多糖的含量。
4.2影响银杏叶多糖提取的单因素实验
4.2.1不同乙醇沉淀浓度对银杏多糖的率的影响
组数（A）
1
2
3
4
5
银杏新叶（g）
5
5
5
5
5
乙醇浓度
无水乙醇
95%乙醇
90%乙醇
85%乙醇
80%乙醇
乙醇沉淀次数
1（1次）
1（1次）
1（1次）
1（1次）
1（1次）
银杏多糖得率（%）
4.921
4.056
4.019
3.942
3．600
图2醇沉淀浓度对银杏多糖的影响
不同乙醇沉淀浓度对银杏多糖的率的影响见图2，由图2可看出：
银杏多糖的得率随着乙醇浓度的降低而减少，当乙醇沉淀浓度从无水乙醇到95%乙醇时，多糖得率从4.921%减少到4.056%，多糖得率减少了0.865%，这可能是因为乙醇浓度的突然降低，小部分多糖溶于水未达到饱和状态而没有析出，因此导致多糖得率显著降低。
当乙醇沉淀浓度从95%乙醇到80%乙醇时，多糖得率从4.056%到3.600%，多糖得率减少了0.456%，这可能是因为此时多糖的析出因乙醇浓度的逐步降低达到了一个稳定而平衡的状态，因此多糖得率下降不显著。
最终可以得出，最佳的乙醇沉淀浓度为无水乙醇。
4.2.2不同乙醇沉淀次数对多糖得率的影响
组数（B）
1
2
3
银杏新叶（g）
5
5
5
乙醇浓度
无水乙醇
无水乙醇
无水乙醇
乙醇用量（ml）
3倍体积
1.5倍体积
1倍体积
乙醇沉淀次数
1（1次）
2（2次）
3（3次）
银杏多糖得率（%）
4.436
4.929
4.800
图3乙醇沉淀次数对多糖得率的影响
由图3可知，不同乙醇沉淀次数对多糖得率有显著的影响。
用3倍体积的无水乙醇1次沉淀和2次沉淀相比，沉淀2次的银杏多糖得率比沉淀1次要高出0.493%，这是因为沉淀1次时，溶液中银杏多糖的物质量浓度为1/4V，而沉淀2次时，溶液中银杏多糖的物质量浓度为1/2V*2V（假设溶液中银杏多糖的物质的量为1），由此可知，沉淀1次析出的银杏多糖比沉淀2次少。
由此推断，沉淀3次析出的银杏多糖应该比沉淀2次高，但是，沉淀3次时的银杏多糖得率却比沉淀2次减少了0.129%，这可能是因为沉淀次数太多而导致了银杏多糖在离心，取出等过程中损失增大，从而使得银杏多糖得率减少。
综上分析，可得出最佳沉淀次数为2次。
4.2.3银杏落叶与新叶多糖含量比较
组数（C）
重量（g）
乙醇浓度
沉淀次数
得率（%）
银杏新叶1
5
无水乙醇
2（2次）
4.961
银杏新叶2
5
无水乙醇
2（2次）
4.889
银杏落叶1
5
无水乙醇
2（2次）
4.450
银杏落叶2
5
无水乙醇
2（2次）
4.402
图4银杏落叶与新叶中多糖含量的比较
由图4可知，银杏新叶1、2组的银杏多糖得率分别为4.961%、4.889%，取其平均值可求得银杏新叶中多糖含量为4.925%。
银杏落叶1、2组的银杏多糖得率为4.450%、4.402%，取其平均值可求得银杏落叶中多糖含量为4.426%。
因此，银杏新叶中的银杏多糖含量比银杏落叶中的银杏多糖含量高。
这是因为，一方面银杏叶在凋落后，细胞没有完全死亡，消耗了叶中的多糖；另一方面，银杏叶在凋落之前，多糖可能发生了部分转移，导致银杏落叶中银杏多糖含量减少。
5结论
银杏是冰川时期存活在地球上的孑遗植物，素有“活化石”之称。
中国是银杏的发源地，其资源占世界总量的70%左右。
很多研究表明：
银杏叶中的活性物质—多糖，具有抗肿瘤、抗病毒、增强免疫力、延缓衰老、降血脂、降血糖、解毒、抗辐射等功效，而且目前，银杏叶制剂已从单纯的药用逐步应用到食品饮料、保健品等行业，含银杏叶提取物的护发、生发、护肤等化妆品的开发也取得一定的进展。
本实验采用单因素试验对影响银杏叶多糖提取条件进行了探讨，筛选出了最佳提取条件为醇沉淀浓度为无水乙醇，沉淀次数为两次，与前人提取,银杏叶多糖的工艺相比，水煮醇提法提取率更高，实验简单且所需时间短，具有很高的生产利用价值，为衡阳地区对银杏叶多糖的开发与利用提供了良好的依据。
与此同时，实验测得银杏落叶的多糖含量为4.426%，新叶多糖含量为4.925%，由此可知，衡阳地区的银杏落叶多糖含量比新叶低，但相差不大。
因此，利用提取落叶中的银杏多糖来大量生产银杏多糖药物、保健品等产品，既实现了“绿色生产”和“低成本，高收益”的宗旨，达到“绿色产品”和“废物利用与资源回收”的标准，又保护了世界孑遗物种—银杏不受破坏。
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35
7.附图
实验图1实验图2
离心机恒温水浴锅
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