化学需氧量CODcr的测定.docx
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化学需氧量CODcr的测定
实验八化学需氧量（CODcr）的测定
一、 标 准 法
一、目 的
1、了解化学需氧量的含义
2、掌握氧化－还原滴定法（重铬酸钾作氧化剂）测定水样中有机物的原理和方法。
二、原 理
化学需氧量（COD）是指在一定条件下，用强氧化剂处理水样时所消耗氧化剂的量，以氧的mg/L来表示，它反映了水中受还原性物质污染的程度。
水中还原性物质包括有机物、亚硝酸盐、亚铁盐、硫化物等。
水被有机物污染是很普遍的，因此化学需氧量也作为有机物相对含量的指标之一。
化学需氧量是一个条件性指标，它受加入的氧化剂种类、浓度以及反应的酸度、温度、时间等影响，为此测定时必须严格操作步骤。
对于工业废水，我国规定用重铬酸钾法测定，测得的值称为CODcr。
一定量的重铬酸钾，在强酸性条件下，将水中的有机物质氧化，过量的重铬酸钾，以试亚铁灵作指示剂，用硫酸亚铁铵溶液回滴，由消耗的重铬酸钾量即可算出水中含有有机物所消耗氧的量mg/L（CODcr）。
本法将大部分的有机物氧化，但直链烃、芳香烃等化合物仍不能氧化，若加硫酸银作催化剂时，直链化合物亦可被氧化，但对某些芳香烃仍无效。
氯离子在此条件下亦被氧化而生成氯气，消耗一定量的重铬酸钾，因而干扰测定。
重铬酸钾作氧化剂时与有机物的反应。
2Cr2O72-+16H++3C→4Cr3++8H2O+3CO2↑
过量的重铬酸钾以试亚铁灵为指示剂，以亚铁盐（溶液）回滴
Cr2O72-+14H++6Fe2+→6Fe3++2Cr3++7H2O
氯化物的干扰反应
Cr2O72-+14H++6Cl-→3Cl2↑+2Cr3++7H2O
在测定过程中加HgSO4,而排除氯离子的干扰，其反应式
Hg2++4Cl-→[HgCl4]2-
三、仪 器
1、回流装置（磨口三角烧瓶，或圆底烧瓶冷凝装置）
2、500mL三角烧瓶
3、移液管、容量瓶
四、试 剂
1、重铬酸钾溶液，C（1/6K2Cr2O7）＝0.2500mol/L
称取预先在120℃烘干2h的基准或优级纯重铬酸钾12.258g溶于蒸馏水中，移入1000mL容量瓶，稀释至标线，摇匀。
2、试亚铁灵指示液
称取1.485g邻菲啰啉（C12H8N2·H2O），0.695g硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）溶于蒸馏水中，稀释至100mL，贮于棕色瓶中。
3、硫酸亚铁铵溶液，C［（NH4）2Fe（SO4）2·6H2O］=0.1mol/L
称取39.5g硫酸亚铁铵溶于含有20ml浓硫酸而冷却的蒸馏水中，移入1000mL容量瓶，加蒸馏水稀释至标线，摇匀。
临用前，用重铬酸钾标准液标定。
标定方法：
准确吸取10.00mL重铬酸钾标准液于500mL锥形瓶中，加蒸馏水稀释至110mL左右，缓慢加入30mL浓硫酸，混匀。
冷却后，加入3滴试亚铁灵指示液（约0.15mL）用硫酸亚铁铵溶液滴定，溶液的颜色由黄色经蓝绿色至刚出现红褐色不褪即为终点。
记录硫酸亚铁铵所消耗的体积V。
C[（NH4）2Fe（SO4）2]＝0.2500×10.00/V
式中 C——硫酸亚铁铵标准溶液的浓度（mol/L）
V——硫酸亚铁铵标准滴定溶液的用量（mL）。
4、硫酸－硫酸银溶液
于2500mL浓硫酸中加入25g硫酸银。
放置1-2d，不时摇动使其溶解。
5、硫酸汞（结晶或粉末）
6、浓硫酸（比重1.84）。
五、实验步骤
1、用移液管吸取水样20.00mL于500mL的磨口锥形瓶中（若水样中氯离子浓度超过30mg/L），加2mL浓硫酸及0.4g硫酸汞，使溶解后，加10.00mL重铬酸钾标准液，玻璃珠数粒，慢慢加入含有硫酸银的浓硫酸28mL，边加边摇，接上冷凝管，加热回流2小时。
2、稍冷、用蒸馏水冲洗冷凝管等器壁后，再用蒸馏水稀释到350mL左右。
3、加试亚铁灵2－3滴，以标准硫酸亚铁铵标准液滴定到溶液由黄色－绿色－红蓝色为终点，记录所消耗硫酸亚铁铵的用量V1（mL）。
4、同时做空白试验，吸20.0mL蒸馏水代替水样，其它步骤与测水样相同，记录硫酸亚铁铵的用量V0（mL）。
六、计 算
耗氧量O2mg/L＝（V0-V1）×C×8×1000/V2
式中C——硫酸亚铁铵标准液的浓度（mol/L）；
V0——空的消耗的硫酸亚铁铵溶液的体积（mL）；
V1——水样消耗的硫酸亚铁铵溶液的体积（mL）；
V2——水样体积（mL）。
七、注意事项
1、使用0.4g硫酸汞络合氯离子的最高量可达40mg，如取用20.00mL水样，即最高可络合2000mg/L氯离子浓度的水样。
若氯离子浓度较低，亦可少加硫酸汞，使保持硫酸汞：
氯离子＝10：
1（W/W）。
若出现少量氯化汞沉淀，并不影响测定。
2、水样取用体积可在10.00－50.00mL范围之间，但试剂用量及浓度需按表2-7进行相应调整，也可得到满意的结果。
表2-7 水样取用量和试剂用量表
水样体积（mL）
0.2500mol/L
K2Cr2O7溶液（mL）
H2SO4-Ag2SO4溶液（mL）
HgSO4（g）
FeSO4（NH4）2SO4（mol/L）
滴定前总体积（mL）
10.0
5.0
15
0.2
0.050
70
20.0
10.0
30
0.4
0.100
140
30.0
15.0
45
0.6
0.150
210
40.0
20.0
60
0.8
0.200
280
50.0
25.0
75
1.0
0.250
350
3、对于化学需氧量小于50mg/L的水样，应改用0.0250mol/L重铬酸钾标准溶液。
回滴时用0.01mol/L硫酸亚铁铵标准溶液。
4、水样加热回流后，溶液中重铬酸钾剩余量应为加入量的1/5-4/5为宜。
5、CODcr的测定值应保留三位有效数字。
6、每次测定时，应对硫酸亚铁铵标准溶液进行标定。
二、快 速 法
一、目 的
掌握快速法测定CODcr的原理和方法
二、原 理
快速重铬酸钾法是采用提高重铬酸钾和有机物作用时的酸度，因而提高了回流时的反应温度，从而加快了反应速度，使回流时间由2h缩短到10min。
回流结束后用标准硫酸亚铁铵液滴定作用剩余的重铬酸钾。
由消耗重铬酸钾的量，算出水样中有机物消耗的氧量（O2mg/L）。
三、仪 器
所用仪器与标准法相同
四、试 剂
1、浓硫酸（含1％硫酸银）
2、硫酸亚铁铵溶液，C[（NH4）2Fe（SO4）2·6H2O]=0.1mol/L
3、重铬酸钾溶液：
在1000mL烧杯中，约加600mL蒸馏水，慢慢加入100mL浓硫酸及26.7g硫酸汞,搅拌,待硫酸汞溶解后,再加80mL浓硫酸和9.5g重铬酸钾,最后加蒸馏水使总体积为1000mL待用。
五、实验步骤
1、水样的测定
用20mL胖肚移液管吸水样20.00mL（如水样有机物含量高则先把水样稀释）。
加入具有磨口的500mL锥形瓶中，加15.00mL重铬酸钾液，再加40mL浓硫酸（含1％Ag2SO4）及玻璃子数粒摇匀：
另取20.00mL左右蒸馏水代替水样，其它操作与测水样时相同，作空白试验，按上回流冷凝器，加热，沸腾后适当降低温度，使回流速度为1-2滴/2min。
精确回流10min，稍冷，自冷凝管顶部各加蒸馏水150mL左右，冷却到室温,加试亚铁灵指示剂2滴左右。
用标准硫酸亚铁铵溶液回滴剩余的重铬酸钾、溶液由橙红色—绿色—红棕色刚出现（不褪去）为终点。
2、空白值的测定
以蒸馏水代替水样，其它步骤和测定水样相同。
六、计 算
计算方法和标准法相同。
七、注意事项
和标准法相同。
实验九溶解氧（DO）的测定
一、目的
掌握碘量法测定水中溶解氧的原理和方法
二、原理
测定水中溶解氧常采用碘量法及其修正法和膜电极法。
清洁水可直接采用碘量法测定。
其原理是：
水样中加入硫酸锰和碱性碘化钾，水中溶解氧将低价锰氧化成高价锰，生成四价锰的氢氧化物棕色沉淀。
加酸后，氢氧化物沉淀溶解并与碘离子反应，释出游离碘。
以淀粉作指示剂，用硫化硫酸钠滴定释出的碘，即可计算出溶解氧的含量。
反应式如下：
MnSO4+2NaOH＝Mn（OH）2↓（白色）+Na2SO4
2Mn（OH）2+O2＝2MnO（OH）2（棕色，即H2MnO3亚锰酸）
MnO（OH）2+2KI+2H2SO4＝I2+MnSO4+K2SO4+3H2O
I2+2Na2S2O3＝2NaI+Na2S4O6（连四硫酸钠）
三、仪器
（1）250mL具塞试剂瓶2个
（2）50mL滴定管2支
（3）1mL移液管3支，25mL、100mL移液管各1支
（4）10mL、100mL量筒各1个
（5）250mL碘量瓶2个
四、试剂
1、硫酸锰溶液
将MnSO4•4H2O480g或MnSO4•4H2O400g溶于蒸馏水中，过滤后稀释成1000mL。
（此溶液中不能含有高价锰，试验方法是取少量此溶液加入碘化钾及稀硫酸后溶液不能变成黄色，如变成黄色表示有少量碘析出，即表示溶液中含有高价锰）。
MnO32－+2I－+6H+＝I2+Mn2++H2O
2、碱性碘化钾溶液
称取500g氢氧化钠溶解于300－400mL蒸馏水中，冷却至室温。
另外称取150g碘化钾溶解于200mL蒸馏水中，慢慢加入已冷却的氢氧化钠溶液，摇匀后蒸馏水稀释至1000mL（强碱性溶液腐蚀性很大，使用时注意勿溅在皮肤或衣服上）贮藏于塑料瓶中。
3、浓硫酸
比重1.84，强酸腐蚀性很大，使用时注意勿溅在皮肤或衣服上。
4、1％淀粉指示液
称取2g可溶性淀粉，溶于少量蒸馏水中，用玻璃棒调成糊状：
慢慢加入（边加边搅拌）刚煮沸的200mL蒸馏水中，冷却后加入0.25g水杨酸或0.8g氯化锌ZnCl2为防腐剂。
此溶液遇碘应变为蓝色，如变成紫色表示已有部分变质，要重新配制。
5、（1+5）硫酸溶液
将浓硫酸（比重1.84）33mL慢慢倒入167mL蒸馏水中。
6、硫代硫酸钠溶液C（Na2S2O3）＝0.025mol/L
称取6.2g硫代硫酸钠（Na2S2O3•5H2O）溶于煮沸放冷的蒸馏水中，加入0.2g碳酸钠，用水稀释至1000mL。
贮于棕色瓶中，使用前用重铬酸钾C（1/6K2Cr2O7）＝0.0250mol/L标准溶液标定，标定方法如下。
于250mL碘量瓶中，加入100mL蒸馏水和1g碘化钾，加入10.00mL0.0250mol/L重铬酸钾标准液，5mL（1+5）硫酸溶液，密塞，摇匀，于暗处静置5min后，用待标定的硫代硫酸钠溶液滴定至溶液呈淡黄色，加入1mL淀粉溶液，继续滴定至蓝色刚好褪去为止，记录用量。
标定反应：
K2Cr2O7+6KI+7H2SO4＝Cr2（SO4）3（硫酸铬，绿色）+3I2+4K2SO3+7H2O
I2+2Na2S2O3＝2NaI+Na2S4O6（连四硫酸钠，无色）
C＝10.00×0.00250/V
式中C——硫代硫酸钠溶液浓度（mol/L）
V——硫代硫酸钠溶液消耗量（mL）
五、实验步骤
1、采样
将取样管插入取样瓶底让水样慢慢溢出，装满后再溢出半瓶左右后，取出取样管，赶走瓶壁上可能存在的气泡，盖上瓶盖（盖下不能留有气泡）。
2、溶解氧的固定
用移液管插入溶氧瓶的液面下，加入1mL硫酸锰溶液，10mL碱性碘化钾溶液，盖好瓶盖颠倒混合数次，静置。
待棕色沉淀物降至半瓶时，再颠倒混合一次，待沉淀物降到瓶底。
3、碘析出
轻轻打开瓶塞，立即用移液管插入液面下加入1.0mL硫酸，小心盖好瓶塞，颠倒混合摇匀，至沉淀物全部溶解为止，放置暗处5min。
4、滴定
取100.0mL上述溶液于250mL锥形瓶中，用硫代硫酸钠滴定至溶液呈淡黄色，加1mL淀粉溶液，继续滴定至蓝色刚好褪去为止，记录硫代硫酸钠用量。
六、计算
溶解氧（O2，mg/L）＝C×V×8×1000/100
式中C——硫代硫酸钠溶液浓度（mol/L）；
V——滴定时消耗硫代硫酸钠体积（mL）；
8——氧（1/2O）摩尔质量（g/mol）
七、注意事项
（1）一般规定要在取水样后立即进行溶解氧的测定，如果不能在取水样处完成，应该在水样采取后立即加入硫酸锰及碱性碘化钾溶液，使溶解氧“固定”在水中，其余的测定步骤可送往实验室进行。
取样与进行测定的时间间隔不要太长，以不超过4小时为宜。
（2）瓶中充满水样时，必须不留气泡，不然空气泡中的氧也会氧化Mn（OH）2，使分析结果偏高。
（3）水中如果有亚硝酸盐存在，亚硝酸氮含量大于0.1mg/L时，由于亚硝酸盐与碘化钾作用能析出游离碘，在反应中析出的NO在滴定时受空气氧化而生成亚硝酸。
2NO2－+4H++2I－→2NO+I2+2H2O
2NO+O2→2NO2
2NO2+H2O→HNO2+HNO3
亚硝酸又会从碘化钾中将碘析出，这样就使分析结果偏高。
为了获得正确的结果，可在用浓硫酸溶解沉淀之前，在水样瓶中加入数滴5%叠氮化钠溶液，其反应如下：
2NaN2（叠氮化钠）+H2SO4→2HH3（叠氮酸）+Na2SO4
HNO2+NH3→H2O+N2+N2O
（4）当Fe2+的含量大于1mg/L时，溶液酸化后Fe3+将与KI作用而析出碘，这样就使分析结果偏高。
2Fe3++2I－→2Fe2++I2
为了使测定溶解氧获得正确的结果，可以在沉淀未溶解以前，加入2mL40％的氟化钾溶液，然后用4mL85％的磷酸H3PO4代替硫酸，此时沉淀溶解，同时所有的Fe3+与F－或PO43－络合成[FeF6]3－或[Fe（PO4）2]3－，这样就抑制了Fe3+与KI的作用。
（5）如果水样中含有还原物质Fe2+、S2－、SO32－、NO2－和有机物等，则可采用在酸性条件下加高锰酸钾来去除，过量的高锰酸钾，用草酸还原去除。
去除的具体步骤如下：
水样约为250mL时，在水样瓶中，用移液管沿瓶口壁加0.7mL浓硫酸，再加1mL（0.6％）高锰酸钾溶液（移液管插入溶液），盖好瓶盖摇匀。
溶液为淡红色，如溶液中红色很快褪去，则再加1mL高锰酸钾溶液摇匀，红色保持5min不褪为止。
5min后，用移液管加2％草酸液1mL（移液管仍须插入液面之下），盖好盖子摇匀，红色褪尽。
若红色未褪尽，则需再加入草酸，草酸的用量要恰好为使高锰酸钾完全作用，否则要造成测定结果偏低的可能。
除去还原物质后的水样，其溶解氧测定按碘量法步骤进行。
（6）硫代硫酸钠标定中的注意事项
用重铬酸钾作氧化剂，必须在高酸度的条件下。
而碘和硫代硫酸钠定量的反应要求在微酸性或中性溶液中进行。
因为酸度高，会加快硫代硫酸钠的分解，因此，必须把高酸度的溶液稀释，与此同时，溶液稀释后亦可减少碘分子在滴定过程中的损失。
实验十五日生化需氧量的测定
一、原理
生化需氧量是指在规定条件下，微生物分解存在于水中的某些可氧化物质，主要是有机物质所进行的生物化学过程中消耗溶解氧的量。
分别测定水样培养前的溶解氧含量和在20±1℃培养五天后的溶解氧含量，二者之差即为五日生化过程所消耗的氧量（BOD5）。
对于某些地面水及大多数工业废水、生活污水，因含较多的有机物，需要稀释后再培养测定，以降低其浓度，保证降解过程在有足够溶解氧的条件下进行。
其具体水样稀释倍数可借助于高锰酸钾指数或化学需氧量（CODcr）推算。
对于不含或少含微生物的工业废水，在测定BOD5时应进行接种，以引入能分解废水中有机物的微生物。
当废水中存在难于被一般生活污水中的微生物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质时，应接种经过驯化的微生物。
二、仪器
1、恒温培养箱
2、5—20L细口玻璃瓶
3、1000－2000mL量筒
4、玻璃搅棒：
棒长应比所用量筒高度长20cm。
在棒的底端固定一个直径比量筒直径略小，并带有几个小孔的硬橡胶板
5、溶解氧瓶：
200－300mL，带有磨口玻璃塞并具有供水封用的钟形口
6、虹吸管：
供分取水样和添加稀释水用
三、试剂
1、磷酸盐缓冲溶液：
将8.5g磷酸二氢钾（KH2PO4），21.75g磷酸氢二钾（K2HPO4），33.4g磷酸氢二钠（Na2HPO4•7H2O）和1.7g氯化铵（NH4Cl）溶于水中，稀释至1000mL。
此溶液的pH应为7.2；
2、硫酸镁溶液：
将22.5g硫酸镁（MgSO4•7H2O）溶于水中，稀释至1000mL；
3、氯化钙溶液：
将27.5g无水氯化钙溶于水，稀释至1000mL；
4、氯化铁溶液：
将0.25g氯化铁（FeCl3•6H2O）溶于水，稀释至1000mL；
5、盐酸溶液（0.5mol/L）：
将40mL（ρ＝1.18g/mL）盐酸溶于水，稀释至100mL；
6、氢氧化钠溶液（0.5mol/L）：
将20g氢氧化钠溶于水，稀释至1000mL；
7、亚硫酸钠溶液（C1/2Na2SO3＝0.025mol/L）：
将1.575g亚硫酸钠溶于水，稀释至1000mL。
此溶液不稳定，需每天配制；
8、葡萄糖－谷氨酸标准溶液：
将葡萄糖（C6H12O6）和谷氨酸（HOOC－CH2－CH2－CHNH2－COOH）在103℃干燥1h后，各称取150mg溶于水中，移入1000mL容量瓶内稀释至标线，混合均匀。
此标准溶液临用前配制；
9、稀释水：
在5－20L玻璃瓶内装入一定量的水，控制水温在20℃左右。
然后用无油空气压缩机或薄膜泵，将此水曝气2－8h，使水中溶解氧接近于饱和，也可以鼓入适量纯氧。
瓶口盖以两层经洗涤晾干的纱布，置于20℃培养箱中放置数小时，使水中溶解氧含量大8mg/L左右。
临用前于每升水中加入氯化钙溶液、氯化铁溶液、磷酸盐缓冲溶液各1mL，并混合均匀。
稀释水的pH值应为7.2，其BOD5应小于0.2mg/L
10、接种液：
可选用以下任一方法，以获得适用的接种液
（1）城市污水，一般采用生活污水，在室温下放置一昼夜，取上层清液供用。
（2）表层土壤浸出液，取100g花园土壤或植物生长土壤，加入1L水，混合并静置10min，取上清夜供用。
（3）用含城市污水的河水和湖水。
（4）污水处理厂的出水。
（5）当分析含有难于降解物质的废水时，在排污口下游3－8km处取水样作为废水的驯化接种液。
如无此种水源，可取中和或经适当稀释后的废水进行连续暴气、每天加入少量该种废水，同时加入适量表层土壤或生活污水，使能适应该种废水的微生物大量繁殖。
当水中出现大量絮状物，或检查其化学需氧量的降低值出现突变时，表明适用的微生物已进行繁殖，可用做接种液。
一般驯化过程需要3－8d。
11、接种稀释水：
取适量接种液，加于稀释水中，混匀。
每升稀释水中接种液加入量生活污水为1－10mL；表层土壤浸出液为20－30mL；河水、湖水为10－100mL。
接种稀释水的pH值应为7.2，BOD5值在0.3－1.0mg/L之间为宜。
接种稀释水配制后应立即使用。
四、测定步骤
1、水样的预处理
（1）水样的pH值若超出6.5－7.5范围时，可用盐酸或氢氧化钠稀溶液调节至近于7，但用量不要超过水样体积的0.5％。
若水样的酸度或碱度很高，可改用高浓度的碱或酸液进行中和。
（2）水样中含有铜、铅、锌、镉、铬、砷、氰等有毒物质时，可使用经驯化的微生物接种液的稀释水进行稀释，或增大稀释倍数，以减少毒物的浓度。
（3）含有少量游离氯的水样，一般放置1－2h，游离氯即可消失。
对于游离氯在短时间不能消散的水样，可加入亚硫酸钠溶液，以除去之。
其加入量的计算方法是：
取中和好的水样100mL，加入1+1乙酸10mL，10％（m/V）碘化钾溶液1mL，混匀。
以淀粉溶液为指示剂，用亚硫酸钠标准溶液滴定游离碘。
根据亚硫酸钠标准溶液消耗的体积及其浓度，计算水样中所需加亚硫酸钠溶液的量。
（4）从水温较低的水域中采集的水样，可遇到含有过饱和溶解氧，此时应将水样迅速升温至20℃左右，充分振摇，以赶出过饱和氧。
从水温较高的水域或废水排放口取得的水样，则应迅速使其冷却至20℃左右，并充分振摇，使其与空气中氧分压接近平衡。
2、水样的测定
（1）不经稀释水样的测定：
溶解氧含量较高、有机物含量较少的地面水，可不经稀释，而直接以虹吸法将约20℃的混匀水样转移至两个溶解氧瓶内，转移过程中应注意不使其产生气泡。
以同样的操作使两个溶解氧瓶充满水样，加塞水封。
立即测定其中一瓶溶解氧。
将另一瓶放入培养箱中，在20±1℃培养5d后。
测其溶解氧。
（2）需经稀释水样的测定
稀释倍数的确定：
地面水可由测得的高锰酸钾指数乘以适当的系数求出稀释倍数（见下表）
高锰酸钾指数（mg/L）
系数
＜5
——
5－10
0.2、0.3
10－20
0.4、0.6
＞20
0.5、0.7、1.0
工业废水可由重铬酸钾法测得的COD值确定。
通常需作三个稀释比，即使用稀释水时，由COD值分别乗以系数0.075、0.15、0.225，即获得三个稀释倍数；使用接种稀释水时，则分别乗以0.075、0.15和0.25，获得三个稀释倍数。
稀释倍数确定后按下法之一测定水样。
一般稀释法：
按照选定的稀释比例，用虹吸法沿筒壁先引入部分稀释水（或接种稀释水）于1000mL量筒中，加入需要量的均匀水样，再引入稀释水（或接种稀释水）至800mL，用带胶板的玻璃棒小心上下搅匀。
搅拌时勿使搅棒的胶板露出水面，防止产生气泡。
按不经稀释水样的测定步骤，进行装瓶，测定当天溶解氧和培养5d后的溶解氧含量。
另取两个溶解氧瓶，用虹吸法装满稀释水（或接种稀释水）作为空白，分别测定5d前、后的溶解氧含量。
直接稀释法：
直接稀释法是在溶解氧瓶内直接稀释。
在已知两个容积相同（其差小于1mL）的溶解氧瓶内，用虹吸法加入部分稀释水（或接种稀释水），再加入根据瓶容积和稀释比例计算出的水样量，然后引入稀释水（或接种稀释水）至刚好充满，加塞，勿留气泡于瓶内。
其余操作与上述稀释法相同。
五、计算
1、不经稀释直接培养的水样
BOD5（mg/L）＝c1－c2
式中：
c1——水样在培养前的溶解氧浓度（mg/L）
c2——水样经5d培养后，剩余溶解氧浓度（mg/L）
2、经稀释后培养的水样
BOD5（mg/L）＝[（c1－c2）－（B1－B2）ƒ1]/ƒ2
式中：
B1——稀释水（或接种稀释水）在培养前的溶解氧浓度（mg/L）；
B2——稀释水（或接种稀释水）在培养后的溶解氧浓度（mg/L）；
ƒ1——稀释水（或接种稀释水）在培养液中所占的比例；
ƒ2——水样在培养液中所占比例
六、注意事项
1、测定一般水样的BOD5时，硝化作用很不明显或根本不发生。
但对于生物处理池出水，则含有大量硝化细菌。
因此，在测定BOD5时也包括了部分氮化合物的需氧量。
对于这种水样，如只需测定有机物的需氧量，应加入硝化抑制剂，如丙稀基硫脲（ATU，C4H8N2S）等。
2、在两个或三个稀释比的样品中，凡消耗溶解氧大于2mg/L和剩余溶解氧大于1mg/L都有效，计算结果时应取平均值。
3、为检查稀释水和接种液的质量，以及化验人员的操作技术，可将20mL葡萄糖－谷氨酸标准溶液用接种稀释水稀释至1000mL，测其BOD5，其结果应在180－230mg/L之间。
否则，应检查接种液、稀释水或操作技术是否存在问题。
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