第四章克隆相关产品.docx
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第四章克隆相关产品
第四章克隆相关产品
pGEM-4Z
目录号包装价格保存
P340020ug520.00-20℃
产品简介：
pGEM-4Z是一种克隆载体，可以作为高效率RNA体外
合成的模板。
它含有SP6和T7RNA聚合酶启动子，可从质粒的任
何一链合成相应的RNA。
另外该载体还有LacZα肽基因及多克隆
位点，可对重组子进行蓝白斑筛选。
pGEM-4Z和pGEM-3Z的差
别在于二者互换了两个启动子的位置。
宿主菌：
建议用E.coliDH5α和JM109作受体菌。
T7
↓
EcoRⅠ
SacⅠ
KpnⅠ
AvaⅠ
XmaⅠ
SmaⅠ
BamHⅠ
SalⅠ
AccⅠ
HincⅡ
PstⅠ
SphⅠ
SP6
↑
1start
7
17
23
23
23
25
28
34
40
41
42
50
56
58
pGEM-4Z
Vector
（2746bp）XbaⅠ
70
HindⅢ
NdeⅠ
2511
NarⅠ
2563
AatⅡ
2262
SspⅠ
XmnⅠ19392144
ScaⅠ1820
Amp'
ori
lacZ
pGEM-3Z
目录号包装价格保存
P330020ug520.00-20℃
产品简介：
pGEM-3Z是一种克隆载体，可以作为高效率RNA体外
合成的模板。
它含有SP6和T7RNA聚合酶启动子，可从质粒的任
何一链合成相应的RNA。
另外该载体还有LacZα肽基因及多克隆
位点，可对重组子进行蓝白斑筛选。
宿主菌：
建议用E.coliDH5α和JM109作受体菌。
SP6
↓
EcoRⅠ
SacⅠ
KpnⅠ
AvaⅠ
XmaⅠ
SmaⅠ
BamHⅠ
SalⅠ
AccⅠ
HincⅡ
PstⅠ
SphⅠ
T7
↑
1start
5
15
21
21
21
23
26
32
38
39
40
48
54
56
pGEM-3Z
Vector
（2743bp）XbaⅠ
69
HindⅢ
NdeⅠ
2509
NarⅠ
2561
AatⅡ
2260
SspⅠ
XmnⅠ19372142
ScaⅠ1818
Ampr
ori
lacZ
第四章克隆相关产品
第一节克隆相关载体
pUC18/19
目录号包装价格保存
P3518（pUC18）20ug100.00-20℃
P3519（pUC19）20ug100.00-20℃
产品简介：
pUC18/19是一种常用克隆载体，由pBR322改造而来，含
有抗氨苄青霉素基因、LacZ基因及与M13mp18相同的多克隆位点。
这两个质粒的结构几乎是完全一样的，只是多克隆位点的排列方向
相反。
重组pUC18/19的克隆转化细胞可用蓝/白斑法筛选。
宿主菌：
建议用E.coliDH5α、JM109及XL1-Blue做受体菌。
pBR322
目录号包装价格保存
P360020ug480.00-20℃
产品简介：
pBR322质粒是一个带抗四环素（Tetr）和抗氨苄青霉素
（Ampr）基因的克隆载体。
在Tetr基因中有8个单一的限制性内切酶
位点，在中Ampr有3个这样的位点，外源DNA插入会导致这些抗性
基因的失活。
PstⅠ3611
pBR322
Vector
（4361bp）
Amp'
ori
Tet'
PvuⅠ3736
ScaⅠ3846
EcoRⅠ4359
HindⅢ29
EcoRⅤ187
BamHⅠ375
SphⅠ566
SalⅠ651
BstZⅠ939
StyⅠ1369
PvuⅡ2066
Ctr10Ⅰ（1779）
ScaⅠ（2177）
XmnⅠ（2294）
SspⅠ（2501）
AatⅡ（2617）
EcoO109Ⅰ（2674）
NdeⅠ（183）
NarⅠ
HaeⅡ（235）
HaeⅡ（1050）
AlwNⅠ（1217）
pBR332
ori
HaeⅡ（680）
AllⅢ（806）
lacⅠ
lacZ'
pUC18/19
2686bp
M13mp
pBR322
GCCAAGCTTGCATGCCTGCAGGTCGACTCTAGAGGATCCCCGGGTACCGAGCTCGAATTC
GAATTCGAGCTCGGTACCCGGGGATCCTCTAGAGTCGACCTGCAGGCATGCAAGCTTGGC
EcoRⅠ
SacⅠKpnⅠSmaⅠ
XmaⅠ
BamHⅠXbaⅠ
SalⅠ
AccⅠ
HincⅡ
PstⅠ
SphⅠ
HindⅢ
HindⅢ
SphⅠ
PstⅠ
SalⅠ
AccⅠ
HincⅡ
XbaⅠ
BamHⅠSmaⅠ
XmaⅠ
KpnⅠ
SacⅠ
EcoRⅠ
Puc19
396455
Puc18
Amp'
162
TA克隆是目前克隆PCR产物最简便、快捷的方法。
其原理是：
Taq酶能够在PCR产物的3’末端加上一个非模板依赖的A，而T载体是一种带
有3’T突出端的载体，在连接酶作用下，可以快速地、一步到位地把PCR产物直接插入到质粒载体的多克隆位点中。
索莱宝公司提供TA克隆的全套试剂。
第二节TA克隆载体
快速连接试剂盒
目录号包装价格
QL001020T160.00
产品简介：
本试剂盒所带T4DNALigase能催化dsDNA、dsRNA或
DNA/RNA的5’-磷酸末端和3’-羟基末端形成磷酸二酯键。
该酶
不仅能催化平滑末端或粘性末端DNA之间的连接，还可以修复双链
DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口，在Solarbio公司特
制的2×QuickLigationBuffer中，室温（25℃）下反应5分钟即可完成
连接反应，反应液可直接用于转化，使用方便、快捷，极大地缩短
了试验时间。
本试剂盒可应用于DNA片段克隆入载体、文库构建、
TA克隆、Linker连接以及线性DNA的再环化等试验。
产品包装：
试剂盒组成20T保存
T4DNALigase20ul（200U/ul）-20℃
2×QuickLigationBuffer200ul-20℃
无菌去离子水1mlRT
单位定义：
在20ul连接反应体系、0.12uM（300ug/ml）的5’-末端浓
度条件下，16℃反应30分钟，能使50﹪HindIII消化的λDNA片段
连接所需的酶量定义为一个活性单位。
使用方法：
1、按下面配制反应体系
2×QuickLigationBuffer10ul
载体50ng
插入片段50-150ng
T4DNALigase1ul
ddH2Oupto20ul
2、室温下反应5分钟，反应产物冰上冷却，然后直接用于转化或冻
存于-20℃。
注意不要热失活，热失活会急剧降低转化效率。
当插入片段超过1.5kb时，延长反应时间至15-30分钟。
注意事项：
1、2×QuickLigationBuffer用前应彻底混匀，避免反复冻融，可适
当分装成小份以保证质量。
2、为保证有效连接，总的载体DNA插入片段的浓度应在1-10ug之
间。
对单插入来说，插入片段:
载体比例在2：
1-6：
1之间最好，
低于2:
1会降低连接效率，高于6:
1会产生多个插入。
3、如果是做电转化，请将连接产物纯化后再进行电转化。
163
第四章克隆相关产品
pBS-T载体连接试剂盒
目录号包装价格
T2100-2020T380.00
T2100-6060T960.00
产品简介：
pBS-T载体是高效克隆PCR产物的专用载体，由克隆
载体改建而成，使多克隆位点两侧的3’端带T。
由于大部分耐热聚
合酶反应时都会在PCR产物的3’端添加一个A，可与pBS-T载体
3’端的T互补连接，同时3’T突出端可以防止载体的自身环化，因
pBS-T载体酶切位点：
T3
↓
EcoRⅠ
KpnⅠ
PstⅠ
XhoⅠ
SalⅠ
BamHⅠ
SpeⅠ
SacⅠ
T7
↑
pBS-T
3.0kp
XbaⅠ
HindⅢ
Ampr
ori
lacZ
SmaⅠ
NotⅠ
TTGTAAAACGACGGCCAGTGAATTGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGGTACCGGGCCCCC
CCTCGAGGTCGACGGTATCGATAAGCTTGATATCGAATTCCTGCAGCCCGGGGGATCCACTAGTTCT
AGAGCGGCCGCCACCGCGGTGGAGCTCCAGCTTTTGTTCCCTTTAGTGAGGGTTAATTTCGAGCTT
GGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCC
T7Promoter
M13-20PrimerbindingsiteT7Primerbindingsite
KpnⅠEcoO109Ⅰ
ApoⅠ
DnaⅡ
XhoⅠEcoRⅤ
AccⅠ
HincⅡ
SaⅡClaⅡ
Bsp106Ⅰ
HindⅢEcoRⅠPstⅠSmaⅠBamHⅠSpeⅠXbaⅠ
T-CloningSite
...agcttgatTatcgaattc...
...tcgaactaTtagcttaag...
T3Promoter
T3Primerbindingsite
M13reversePrimerbindingsite
NotⅠ
EsgⅠBstXⅠSacⅡSacⅠ
试剂盒组成T2100-20T2100-60
pBS-T载体（50ng/ul）20ul60ul
T4DNALigase（3U/ul）20ul20ul×3
10×LigationBuffer50ul50ul×3
2×LigationBuffer100ul100ul×3
无菌去离子水1ml1ml
对照插入片段（700bp,50ng/ul）10ul10ul
pBS-T载体克隆位点图：
产品包装：
此可大大提高PCR产物的连接和克隆效率。
pBS-T载体包含有T7
和T3RNA聚合酶启动子，其侧端和多克隆位点区相接，多克隆位
点区位于β-半乳糖苷酶的α肽编码区内。
α肽插入失活使得菌落
在指示培养基中呈现不同的颜色，可根据颜色直接筛选重组克隆，
白色克隆为阳性重组克隆，蓝色克隆为载体自连的克隆（具体筛选
原理见分子克隆第三版）
pBS-T载体连接试剂盒适用于PCR产物的克隆，可将PCR产物连接
到pBS-T载体上，便于进行下一步试验。
DNA片段连接是很容易
出问题的步骤，为提高连接效率，本试剂盒提供了两种连接Buffer
供不同情况选择：
10×LigationBuffer适合于16℃连接过夜，可获
得最佳的连接效果；2×LigationBuffer是一种快速连接Buffer，
25℃连接10分钟即可转化，快捷方便。
164
pGM-T载体连接试剂盒
目录号包装价格
T2200-2020T380.00
T2200-6060T960.00
产品简介：
pGM-T载体是高效克隆PCR产物的专用载体，由克
隆载体改建而成，使多克隆位点两侧的3’端带T。
由于大部分耐
热聚合酶反应时都会在PCR产物的3’端添加一个A，可与pGM-T
载体3’端的T互补连接，同时3’T突出端可以防止载体的自身环
化，因此可大大提高PCR产物的连接和克隆效率。
pGM-T载体包
产品包装：
试剂盒组成T2200-20T2200-60
pGM-T载体（50ng/ul）20ul60ul
T4DNALigase（3U/ul）20ul20ul×3
10×LigationBuffer50ul50ul×3
2×LigationBuffer100ul100ul×3
无菌去离子水1ml1ml
对照插入片段（700bp,50ng/ul）10ul10ul
T7TranscriptionStart
5'...TGTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGGCCCGACGTCGCATGCTCCCGGCCGCCATG
3'...ACATTATGCTGAGTGATATCCCGCTTAACCCGGGCTGCAGCGTACGAGGGCCGGCGGTAC
GCGGCCGCGGGAATTCGATT3'
CGCCGGCGCCCTTAAGCTA
ATCACTAGTGAATTCGCGGCCGCCTGCAGGTCGAC
3'TTAGTGATCACTTAAGCGCCGGCGGACGTCCAGCTG
CATATGGGAGAGCTCCCAACGCGTTGGATGCATAGCTTGAGTATTCTATAGTGTCACCTAAAT...3'
GTATACCCTCTCGAGGGTTGCGCAACCTACGTATCGAACTCATAAGATATCACAGTGGATTTA...5'
SP6TranscriptionStart
T7Promoter
ApaⅠAatⅡSphⅠBstZⅠNcoⅠ
SpeⅠEcoRⅠNotⅠ
BstZⅠ
SacⅡEcoRⅠPstⅠSalⅠ
BstZⅠ
NotⅠ
（clonedinsert）
NdeⅠSacⅠBstXⅠNsiⅠSP6Promoter
pGM-T载体酶切位点：
含有T7和SP6RNA聚合酶启动子，其侧端和多克隆位点区相接，
多克隆位点区位于β-半乳糖苷酶的α肽编码区内。
α肽插入失活
使得菌落在指示培养基中呈现不同的颜色，可根据颜色直接筛选
重组克隆，白色克隆为阳性重组克隆，蓝色克隆为载体自连的克
隆（具体筛选原理见分子克隆第三版）。
pGM-T载体连接试剂盒适用于PCR产物的克隆，可将PCR产物
连接到pGM-T载体上，便于进行下一步试验。
DNA片段连接是
很容易出问题的步骤，为提高连接效率，本试剂盒提供了两种连
接Buffer供不同情况选择：
10×LigationBuffer适合于16℃连接过
夜，可获得最佳的连接效果；2×LigationBuffer是一种快速连接
Buffer，25℃连接10分钟即可转化，快捷方便。
pGM-T载体克隆位点图：
SP6
↓
EcoRⅠ
ApaⅠ
NcoⅠ
SalⅠ
NdeⅠ
SacⅡ
PstⅠ
SpeⅠ
T7
↑
AatⅡ
SphⅠ
BstZⅠ
BstZⅠ
NotⅠ
NsiⅠ
SacⅠ
EcoRⅠ
NotⅠ
BstZⅠ
BstXⅠ
52
14
37
90
97
49
88
64
20
26
31
43
43
127
109
70
77
77
118
1start
141
XmnⅠ2009
ScaⅠ1890NaeⅠ2707
（3015bp）
pGM-T
ori
flori
lacZ
TT
Ampr
165
第四章克隆相关产品
试剂盒组成T2300-20T2300-60
pCF-T载体（50ng/ul）20ul60ul
T4DNALigase（3U/ul）20ul20ul×3
10×LigationBuffer50ul50ul×3
2×LigationBuffer100ul100ul×3
无菌去离子水1ml1ml
对照插入片段（700bp,50ng/ul）10ul10ul
产品包装：
pCF-T载体酶切位点：
↓
KpnⅠ
BamHⅠ
SacⅠ
M13
HindⅢ
T7
EcoRⅤ
BstXⅠ
XhoⅠ
NsiⅠ
↑
XbaⅠ
NotⅠ
ApaⅠ
pCF-TVector
3980bp
ori
lacZ
TT
SpeⅠ
BstXⅠ
ampicillin
Kanamycin
CAGGAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCTTGGTACCGAGCTCGGATCCACTA
M13ReversePrimerHindⅢ
PCRProduct
GTCCTTTGTCGATACTGGTACTAATGCGGTTCGAACCATGGCTCGAGCCTAGGTGAT
GATGCCAAGCTT
CTACGGTTCGAA
ATGAGT
TACTCA
GGATATCCATCACACTGGCGGCCGCTCGAGCATGCATCTAGAGGGCCCAATTCGCCCTAT
CCTATAGGTAGTGTGACCGCCGGCGAGCTCGTACGAAGATCTCCCGGGTTAAGCGGGATA
AGTGAGTCGTATTACAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAAC
TCACTCAGCATAATGTTAAGTGACCGGCAGCAAAATGTTGCAGCACTGACCCTTTTG
KpnⅠSacⅠBamHⅠSpeⅠ
EcoRⅤBstXⅠNotⅠXhoⅠNsiⅠXoaⅠApaⅠ
T7Promoter
多克隆位点处加T，适合3’端带A的PCR产物的克隆。
多克隆位
点区位于β-半乳糖苷酶的α肽编码区内，α肽插入失活使得菌
落在指示培养基中呈现不同的颜色，可根据颜色直接筛选重组克
隆，白色克隆为阳性重组克隆，蓝色克隆为载体自连的克隆（具体
筛选原理见分子克隆第三版）。
pCF-T载体连接试剂盒适用于PCR产物的克隆，可将PCR产物连
接到pCF-T载体上，便于进行下一步试验。
DNA片段连接是很
容易出问题的步骤，为提高连接效率，本试剂盒提供了两种连接
Buffer供不同情况选择：
10×LigationBuffer适合于16℃连接过
夜，可获得最佳的连接效果；2×LigationBuffer是一种快速连接
Buffer，25℃连接10分钟即可转化，快捷方便。
pCF-T载体克隆位点图：
M13ForwardPrimer
pCF-T载体连接试剂盒
目录号包装价格
T2300-2020T380.00
T2300-6060T960.00
产品简介：
pCF-T载体是一种快速、高效克隆PCR产物的专用载
体，结合Solarbio公司开发的快速连接试剂盒，能在5分钟内快速
完成连接反应。
pCF-T载体包含氨苄青霉素和卡那霉素两种筛选
标记，含T7RNA聚合酶启动子，其侧端和多克隆位点区相接，在
166
pET-32a（+）
目录号包装价格保存
P310010ug680.00-20℃
产品简介：
pET-32a（+）是一种常用的融合蛋白类型原核高效表达载
体，含有抗氨苄青霉素基因。
表达由宿主细胞提供的T7RNA聚合酶
诱导。
宿主菌：
建议克隆用E.coliDH5α或TOP10做受体菌；
表达用E.coliBL21（DE3）或BL21（DE3）pLysS做受体菌。
pcDNA3.1（+/-）
目录号包装价格保存
P3200（+）10ug880.00-20℃
P3210（-）10ug880.00-20℃
产品简介：
pcDNA3.1是一种常用非融合蛋白类型真核高效表达载
体，含有抗氨苄青霉素基因及Zeocin的基因，启动子来源于巨噬
细胞病毒CMV。
宿主菌：
建议用COS7、CHO、293等细胞系。
pET-32a（＋）
（5900bp）
ApaBⅠ（1205）
EcoNⅠ（1056）
SphⅠ（996）
SgrAⅠ（840）
XbaⅠ（729）
RsrⅡ（589）
MscⅠ（351）
NspⅤ（268）
KpnⅠ（238）
BglⅡ（241）
NcoⅠ（212）
EcoRⅤ（206）
BamHⅠ（198）
EcoRⅠ（192）
SacⅠ（190）
SalⅠ（179）
NotⅠ（166）
EagⅠ（166）
XhoⅠ（158）
AvaⅠ（158）
HindⅢ（173）
MluⅠ（1521）
BclⅠ（1535）
BstEⅡ（1702）
BmgⅠ（1730）
ApaⅠ（1732）
BssHⅡ（1932）
HpaⅠ（2027）
PshAⅠ（2366）
PsP5Ⅱ（2628）
BspGⅠ（3148）
Tth111Ⅰ（3367）
Bst1107Ⅰ（3393）
SapⅠ（3506）
BspLU11Ⅰ（3622）
AlwNⅠ（4038）
Eam1105Ⅰ（4357）
BsaⅠ（4576）
PstⅠ（4780）
PvuⅠ（4885）
ScaⅠ（4995）
DraⅢ（5658）
Bpu1102Ⅰ（80）
Ap（4445-5302）
florigin（5434-5889）trxA（366-692）
lacl（1171-2250）
ori（3684）
第三节表达载体及相关试剂盒
NheⅠ
T7
AflⅡ
5428/5427bp
pcDNA3.1（+/-）
（+）
（-）T7
PmeⅠ
HindⅢ
Asp718Ⅰ
KpnⅠ
BamHⅠ
BstXⅠ
EcoRⅠ
BstⅠ
NotⅠ
XhoⅠ
XbaⅠ
ApaⅠ
PmeⅠ
EcoRⅤ
NheⅠ
AflⅡ
PmeⅠ
HindⅢ
Asp718Ⅰ
KpnⅠ
BamHⅠ
BstXⅠ
EcoRⅤ
BstXⅠ
NotⅠ
XhoⅠ
XbaⅠ
ApaⅠ
PmeⅠ
EcoRⅠ
BGHpAf1ori
SV40oriNeomycinSV40pA
pUCori
Ampicillin
Pcmv
167
第四章克隆相关产品
pET32-TEV原核蛋白表达试剂盒
产品简介：
本试剂盒所包含的原核表达载体（pET32-TEV）是在
pET32载体基础上改造而成，该载体增加了TEV蛋白酶（31KDa）切
位点，便于高效率、高特异性的去除融合Trx.tag，该表达载体保留
了pET32载体启动所需的所有元件。
本试剂盒配备了rTEV蛋白酶。
rTEV蛋白酶与EK、Thrombin、FactorXa、SUMO等蛋白酶相比，
组分名称数量保存
pET32-TEVvector（500μg/μl）10μl-20℃
rTEVProteas
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