高效液相色谱仪验证方案.docx
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高效液相色谱仪验证方案
标题
Subject
Waterse2695高效液相色谱仪验收报告
文件编码
Documentcode
07-G-09001
版本号
Editionnumber
00
起草
Writtenby
日期
Date
审核
Examinedby
日期
Date
日期
Date
日期
Date
批准
Approvedby
日期
Date
1．目的
2．范围
3．责任
4．验证
4．1．公用系统检查
4．2运行确认
4．2．1目的
4．2．2方式
4．2．3内容
4．2．3．1设备使用原理
4．2．3．2确认标准操作规程的可行性
4．2．3．3确认设备正常运行的项目
4．3性能确认
4．3．1输液系统
4．3．1．1泵流量设定值误差与流量稳定性误差
4．3．1．2定性、定量测量重复性误差
4．3．1．3系统适用性试验
4．3．2紫外检测器性能
4．3．2．1基线漂移与基线噪声
5．拟订验证周期
6．验证结果评价与结论
7．附件
1目的：
为确认Alliance2695型高效液相色谱仪测试数据准确可靠，性能稳定，特制订本验证方案，对高效液相色谱仪进行验证。
验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案变更申请及批准书，报验证委员会批准。
2范围：
适用于美国Waters公司Alliance2695型高效液相色谱仪系统的再验证。
3责任：
3．1验证委员会
3．1．1负责验证方案的批准。
3．1．2负责验证的协调工作，以保证本验证方案规定项目的顺利实施。
3．1．3负责验证数据及结果的审核。
3．1．4负责验证报告的审批。
3．1．5负责发放验证证书。
3．1．6负责验证周期的确认。
3．2设备部。
3．2．1负责建立设备档案。
3．2．2负责仪器、仪表的校正。
3．3质量保证部
3．3．1负责制定验证方案。
3．3．2负责验证的实施。
3．3．3负责拟定验证周期。
3．3．4负责收集各项验证、试验记录，起草验证报告，报验证委员会。
4验证：
4．1公用系统检查
名称
设计要求
实际
结论
确认人
日期
备注
电压（V）
220伏、单相
功率
500W
频率
50HZ
接地保护
有
检查项目
标准
结果
检查人
日期
备注
生产厂商
美国Waters公司
设备名称
Alliance2695型HPLC系统
安装地点
液相色谱室220
公司内部设备编号
ZJ-LH-201
主要性能参数
2695型溶剂与样品管理系统参数
电源
220V/50Hz，250W
流速范围
0.00～45ml/min
压力范围
0～6000Psi
流速精度
±0.01ml
工作温度
4～38℃
工作湿度
20～90%
重量
42.3Kg
PDA检测器参数
电源
220V/50Hz,250W
波长范围
190～800nm
波长精度
±1nm
基线噪音
5×10-5AU254nm
漂移值
1×10-3AU/hour254nm
线性范围
5%over-0.1～2.0AU
光谱分析
1.2nm/光电二极管
工作温度
4～40℃
工作湿度
20～80%
重量
15.4Kg
复核人：
日期：
4．2运行确认
4．2．1目的
试验并证明设备的各部分及整体，能在预期的及设计范围内准确的运行，并能完全达到规定的技术指标和使用要求。
4．2．2方式
通过对输液系统、紫外检测器性能的检测，确认本机器运行正常。
4．2．3内容
4．2．3．1设备概述
4．2．3．1．1本仪器为Waters公司Alliance2695型高效液相色谱仪，包括四元梯度泵，2996检测器和自动进样器、Millennium32色谱管理工作站及打印机组成。
4．2．3．1．2高压液相色谱法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，作为流动相，用泵将流动相注入分析色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果,然后分别进行收集。
4．2．3．2确认高效液相色谱系统标准操作规程的可行性测试过程:
A．前提：
安装确认结果使得设备安装稳固，电源连接完好，仪器自检完毕。
B．仪器操作运行：
仪器运行，整个操作过程完全按《10-G-08002Alliance2695型高效液相色谱仪标准操作规程》进行。
C．在整个系统运转的同时，运行确认以下项目，以证明设备符合要求。
4．2．3．3高效液相色谱仪运行确认
项目
要求
结论
确认人
日期
备注
泵流量设定值测定
误差SS＜±2%
泵流量稳定性测定
误差SR＜±2%
系统重复性测定
误差RSD≤1.5%
基线漂移与基线噪声测定
基线漂移≤5×10-3（AU/h）
基线噪声≤5×10-4（AU）
4．3性能确认
4．3．1输液系统
4．3．1．1泵流量设定值误差与流量稳定性误差
4．3．1．1．1要求：
泵流量设定值误差SS＜±2%；流量稳定性误差SR＜±2%。
4．3．1．1．2检定法：
将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好后开机，以甲醇为流动相，按表1设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗干燥称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确地收集10～25分钟，称重，按下式计算SS和SR。
SS＝
SR＝
式中：
SS为流量设定值误差（%）；
Fm＝
为流量实测值（ml/min）；
W2为容量瓶＋流动相的重量（g）；
W1为容量瓶的重量（g）；
FS为流量设定值（ml/min）；
Ρt为实验温度下流动相的密度（g/cm3）；
t为收集流动相的时间（min）
SR为流量稳定性误差（%）
Fmax为同一组测量中流量最大值（ml/min）；
Fmin为同一组测量中流量最小值（ml/min）
F为同一组测量值的算术平均值（ml/min）
流量设定值（ml/min）
0.5
1.0
1.5
测量次数
3
3
3
收集流动相时间（min）
25
15
10
允许误差
SS
3%
2%
2%
SR
3%
2%
2%
表1SS、SR的检定
4．3．1．2定性、定量测量重复性误差
4．3．1．2．1检定法：
将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好后开机，使之处于正常工作状态，注入注射用胸腺五肽样品溶液20μl，记录保留时间和峰面积，连续测量5次，计算相对标准偏差RSD。
4．3．1．2．2可接受标准：
RSD≤1.5%。
测定次数
1
2
3
4
5
保留时间
峰面积
实测RSD
保留时间（min）：
标准RSD
≤1.5%
峰面积：
按下式计算相对标准偏差RSD。
RSD＝
式中：
RSD为定性、定量测量重复性的相对标准偏差
为第i次测得的保留时间或峰面积
为n次测量结果的算术平均值
i为测量序号
n为测量次数
4．3．1．3系统适用性试验
选定注射用胸腺五肽含量测定的色谱条件作为系统适用性试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）-甲醇（90：
10）为流动相；检测波长为275nm。
精密量取20μl，注入液相色谱仪，连续测定3次，依据图谱，记录理论板数。
4．3．1．3．1可接受标准：
记录色谱图理论板数按胸腺五肽峰计算应不低于2000。
4．3．2紫外检测器性能
4．3．2．1基线漂移与基线噪声
4．3．2．1．1要求：
基线漂移≤5×10-3（AU/h）；基线噪声≤5×10-4（AU）。
4．3．1．1．2检定法：
将仪器各部分联接好，紫外检测器波长调到254nm，流动相为100%甲醇，流速为1.0ml/min,吸收度范围选择最灵敏档，开机，待基线稳定后，记录基线20-30分钟，计算基线漂移和噪声。
5．拟订再验证周期
设备验证周期拟订为：
一年一次。
6．验证结果评价与结论
由设备动力部负责收集各项验证试验结果记录，根据验证试验结果起草验证报告，报验证委员会，验证委员会对验证结果进行综合评审，做出验证结论，发放验证证书，确认验证周期。
对验证结果的评审应包括：
6．1验证实验是否有遗漏？
6．2验证实验过程中对验证方案有无修改？
修改方案的依据以及修改是否经过批准？
6．3验证记录是否完整？
6．4验证试验结果是否符合要求？
偏差及对偏差的说明是否合理？
是否需要进一步补充试验？
7．附件
附件1
高效液相色谱仪验证结果及记录
（1）
验证项目名称
设备性能确认
验证方案编码
07-G-09001
设备名称
Alliance2695高效液相色谱仪
规格型号
Alliance2695
设备位置
液相色谱室220
设备编号
制造厂家
美国Waters公司
出厂日期
2002
泵流量设定值误差与流量稳定性误差
流量设定值（ml/min）
0.5
1.0
1.5
操作人
日期
测量次数
3
3
3
收集流动相时间（min）
25
15
10
允许误差
SS
3%
2%
2%
SR
3%
2%
2%
实测误差
SS
SR
结果评价及建议：
设备动力部：
日期：
结果评价及建议
中心化验室：
日期：
结果评价及建议
质量保证部：
日期：
备注：
附件2
高效液相色谱仪验证结果及记录
（2）
验证项目名称
设备性能确认
验证方案编码
07-G-09001
设备名称
Alliance2695高效液相色谱仪
规格型号
Alliance2695
设备位置
液相色谱室220
设备编号
制造厂家
美国Waters公司
出厂日期
2002
定性、定量重复性检定
测定次数
操作人
日期
保留时间（min）
峰面积
实测RSD
保留时间（min）：
标准RSD
≤1.5%
峰面积：
结果评价及建议：
设备动力部：
日期：
结果评价及建议
中心化验室：
日期：
结果评价及建议
质量保证部：
日期：
备注：
附件3
高效液相色谱仪验证结果及记录（3）
验证项目名称
设备性能确认
验证方案编码
07-G-09001
设备名称
Alliance2695高效液相色谱仪
规格型号
Alliance2695
设备位置
液相色谱室220
设备编号
制造厂家
美国Waters公司
出厂日期
2002
系统适用性试验
测定次数
1
2
3
操作人
日期
色谱图理论塔板数（n）
可接受标准
n不低于2000
结果评价及建议：
设备动力部：
日期：
结果评价及建议
中心化验室：
日期：
结果评价及建议
质量保证部：
日期：
备注：
附件4
高效液相色谱仪验证结果及记录（4）
验证项目名称
设备性能确认
验证方案编码
07-G-09001
设备名称
Alliance2695高效液相色谱仪
规格型号
Alliance2695
设备位置
液相色谱室220
设备编号
制造厂家
美国Waters公司
出厂日期
2002
紫外检测器性能试验
测定
项目
标准要求
实测数据及结果计算
操作人
日期
备注
基线
漂移
与基
线噪
声
波长254nm，流动相为100%甲醇，流速为1.0ml/min，吸收度范围选择最灵敏档，开机，待基线稳定后，记录基线20～30分钟，计算基线漂移和噪声
判定标准:
基线漂移≤5×10-3（AU/h）
基线噪声≤5×10-4（AU）。
基线漂移:
基线噪声:
结果评价及建议：
设备动力部：
日期：
结果评价及建议
中心化验室：
日期：
结果评价及建议
质量保证部：
日期：
备注：
附件5
验证最终评价报告
验证方案名称
Alliance2695型高效液相色谱仪再验证方案
验证方案编码
07-G-09001
设备名称
Alliance2695高效液相色谱仪
规格型号
Alliance2695
设备位置
液相色谱室220
设备编号
制造厂家
美国Waters公司
出厂日期
2002
部门
最终评价
设备动力部
负责人：
日期：
负责人：
日期：
质量保证部
负责人：
日期：
批准
负责人：
日期：
备注：
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