复方乳酸乳清制剂对病原菌白色念珠菌和生长缓慢真菌作用的体外.docx
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复方乳酸乳清制剂对病原菌白色念珠菌和生长缓慢真菌作用的体外
复方乳酸乳清制剂对病原菌、白色念珠菌和
生长缓慢真菌作用的体外研究
作者：
A.SUNDRIES
发表：
"RevueInternationaledesServicesdeSantedesArmeesdeTerre,deMeretdel'Air"
1973年，第46卷，第3期，241-250页
这项研究的目的是用取自皮肤和皮肤邻近粘液的样品，确定复方乳酸对病原菌的菌丝培养物、微生物培养物是否有抑制效应。
病菌的试验
我们选择将吸收纸片沉积在琼脂糖上的方法。
a）纸片
直径5mm，面积19.62mm2，厚度3/10mm。
它的干重为3.56mg（用100个纸片得到的数字）。
用水浸渍纸片时，其重量为9.58mg。
b）载体：
马-欣二氏琼脂糖
-直径9cm的培养皿；
-接种表面：
63.60cm2；
-琼脂糖的体积：
20cm3；
-琼脂糖的厚度：
3mm；
-纸片下的体积：
58.875mm3；
-来源的浓度：
复方乳酸：
120mg/ml。
c）接种物：
-由24小时老琼脂糖培养物制备；
-样品是用校正的1.5mm2表面环取出的，通过柠檬色葡萄球菌的菌株进行标准化：
取半环置于10ml无菌生理盐水中；
-稀释到1/10,000；
-铺展1滴到0.05ml；
-计数的菌落：
55；
-接种物中的病菌数：
55×20×10,000＝11,000,000个病菌/ml；
-在直径9cm的表面皿中接种1滴0.05ml＝550,000葡萄球菌；
-每cm2的群落＝8,650个病菌。
为证实DAGUET和CHABBERT的工作（techniqueenBacteriologie，第161页及后面的内容），我们将把每个肠杆菌科稀释5倍；我们将用少量菌落把每个链球菌属或病菌浓缩5倍。
d）时间：
晚上将表面皿放在烘箱中，第二天早上读取（15-18小时）。
e）技术：
技术是巴斯德研究院巴黎分院1960年传授给大班的技术。
1.取0.05ml滴沉积在琼脂糖中央，通过擦拭运动同时转动表面皿，用由巴斯德吸管制成的耙子进行铺展。
2.置烘箱中干燥30分钟。
f）浸渍纸片：
通过毛细作用浸渍纸片。
-第1个纸片用含水Milian溶液浸渍。
它的组成如下：
-龙胆紫
0.50g
-甲基绿
0.50g
-水
200ml
预先研究了它的琼脂糖扩散能力，得到下列结果：
-纸片周围的彩色圈：
15mm
-柠檬色葡萄球菌培养物的抑制圈：
28mm
-在带血液环的琼脂糖上的化学溶血：
12mm
-第2个纸片用2p.100的曙红水溶液浸透。
它的扩散能力如下：
-纸片周围的彩色圈：
28mm
-培养物抑制圈：
12mm
-化学溶血圈：
0mm
-第3个纸片浸渍有复方乳酸：
但这出现问题：
复方乳酸粘稠。
相对于6.02mg水或5.80mgMilian溶液，其粘度使它不能流出粘度计102sec.4/10以上。
相对于6.02mg水或5.80mgMilian溶液，纸片上复方乳酸的重量为7.20mg。
但复方乳酸在琼脂糖中难以扩散抵偿了额外的重量，使得到的圈如下：
-加入1p.100品红至1/10体积后的彩色圈：
14mm；
-柠檬色葡萄球菌培养物：
抑制圈：
22mm；
-在带血液环的琼脂糖上的化学溶血：
14mm。
数字与由Milian溶液得到的结果相似，因此2种产品的扩散性是相当一致。
因此，我们可以比较皮肤科医生使用的2种溶液剂和在皮肤上广泛使用的产品复方乳酸的抑制能力。
复方乳酸对病菌作用的研究
在它们抵达实验室时，我们研究了复方乳酸对医院致病菌株的作用。
我们依照具有明确敏感性或耐药性的主要群落对它们进行分组。
I.对复方乳酸的作用敏感的菌株（抑制圈，mm）
链球菌（抑制圈，mm）
Β溶血链球菌
编号
Milian
曙红
乳清乳酸
乳清乳酸
2
1
22
0
14
11
2
18
0
13
10
3
17
0
12
12
4
12
0
13
13
5
18
0
18
18
6
12
0
14
12
Α溶血链球菌
编号
Milian
曙红
乳清乳酸
乳清乳酸
2
1
2
13
14
7
0
18
14
16
12
Γ溶血链球菌
编号
Milian
曙红
乳清乳酸
乳清乳酸
2
1
2
3
18
25
20
0
0
12
14
20
22
13
14
20
肠球菌属
编号
Milian
曙红
乳清乳酸
乳清乳酸
2
1
14
0
14
12
2
17
0
13
12
3
17
0
17
14
4
12
0
18
18
5
15
0
12
11
6
16
0
14
11
总计
280
19
260
229
平均值
16.47
1.11
15.29
13.47
葡萄球菌（抑制圈，mm）
金黄色葡萄球菌
编号
Milian
曙红
乳清乳酸
乳清乳酸
2
1
23
0
15
12
2
18
7
14
12
3
23
0
12
11
4
19
0
14
11.5
5
24
12
16
14
总计
107
19
71
60
平均值
21
3.8
14.2
12
柠檬色葡萄球菌
编号
Milian
曙红
乳清乳酸
乳清乳酸
2
1
27
0
18
14
2
20
0
22
20
3
18.5
0
12
12
4
19
7
16
15
5
22
0
15.5
13
6
18
9
13.5
11.5
7
25
7
14
11
8
22
7
18
12
9
27
0
24
20
10
12
8
16
14
总计
213
38
169
143
平均值
21.3
3.8
16.9
14.3
皮肤和粘液的棒杆菌（抑制圈，mm）
抗乳血清
乳清乳酸
2
编号
Milian
曙红
乳酸
1
24
0
16
13
2
23
13
17
15
3
25
11
20
18
4
22
11
13
13
总计
94
35
66
59
平均值
23.5
8.9
16.5
14.9
杆状菌（抑制圈，mm）
编号
Milian
曙红
乳清乳酸
乳清乳酸
2
1
21
0
14
11
II.对复方乳酸的作用具有耐药性的菌株（抑制圈，mm）
路氏或解糖精莫拉菌
编号
Milian
曙红
乳清乳酸
乳清乳酸
2
1
12
0
0
2
10
0
0
0
3
11
0
0
0
4
11
0
11
0
总计
44
0
11
11
平均值
11
0
2.75
2.75
绿脓杆菌
编号
Milian
曙红
乳清乳酸
乳清乳酸
2
1
0
0
0
0
2
0
0
0
0
3
0
0
0
0
4
0
0
0
0
5
0
0
0
0
总计
0
0
0
0
平均值
0
0
0
0
肠杆菌科（抑制圈，mm）
编号
Milian
曙红
乳清乳酸
乳清乳酸
2
大肠埃希氏菌
1
10
0
0
0
2
10
0
0
0
3
13
0
0
0
4
10
0
0
0
5
10
0
0
0
6
11
0
0
0
7
9
0
0
0
8
11
0
0
0
9
10
0
0
0
10
13
0
0
0
11
13
0
0
0
12
11
0
0
0
Paracolicoliform
1
10
0
0
0
2
11
0
0
0
3
11
0
0
0
4
11
0
0
0
产气杆菌
1
0
0
0
0
2
0
0
0
0
3
8
0
0
0
阴沟气杆菌
1
13
0
0
0
克雷伯氏菌
1
10
0
0
0
2
0
0
0
0
普罗菲登菌属
1
9
0
0
0
普通变形杆菌
1
8
0
0
0
2
11
0
0
0
奇异变形杆菌
1
9
0
0
0
雷氏变形菌
1
11
0
0
0
总计
253
0
0
0
平均值
9.37
0
0
0
注解：
大部分皮肤粘液的革兰氏阳性菌株对复方乳酸敏感。
肠杆菌科、绿脓杆菌和莫拉菌属具有耐药性。
复方乳酸对多形皮肤粘液菌群作用的研究
研究的所有产品都是病理学样本。
最常遇到的病菌（升序排列）：
-多种
9p.100
-棒杆菌属
10p.100
-奈瑟球菌属
21p.100
-四联葡萄球菌、八叠球菌
27p.100
-甲型、乙型、丙型链球菌
33p.100
-肠球菌属
来源于鼻咽分泌物的50p.100；来自皮肤或生殖道的30p.100；20p.100是用气道分泌物培养的。
下面的表格列出了得到的抑制区（mm）。
样品
Milian
曙红
乳清乳酸
乳清乳酸
2
no.1:
葡萄球菌，奈瑟球菌属，Α和β链球菌
14
8
16
14
no.2:
奈瑟球菌属和葡萄球菌属
23
12
18
16
no.3:
链球菌，葡萄球菌属和奈瑟球菌属
19
7
16
15
no.4:
奈瑟球菌属，棒杆菌属，链球菌，葡萄球菌属
17
0
16
16
no.5:
奈瑟球菌属，链球菌，棒杆菌属
15
9
18
14
no.6:
链球菌，肠球菌属，四联的
21
0
16
13
no.7:
葡萄球菌，链球菌
20
11
14
13.5
no.8:
链球菌，葡萄球菌，八叠球菌
30
14
19
19
no.9:
棒杆菌属,葡萄球菌，链球菌
22
11
13
15
no.10:
奈瑟球菌属
20
0
22
18
总计
201
62
168
153
平均值
20.1
6.2
16.8
15.3
注解：
1）复方乳酸在100p.100的病例种具有有效的抑制区。
2）2p.100曙红无效。
3）复方乳酸在Milian水溶液种有效性稍差，但它的粘度可能容许其琼脂糖扩散。
这有可能解释为何在1/2稀释时一致性较差，正如良好的抑制区所示。
复方乳酸有效性的定量研究
我们一半一半地将复方乳酸稀释到1/32。
观察到21个病菌。
下面的表格列出了抑制区（mm）。
细菌
L
L/2
L/4
L/8
L/16
L/32
1.链球菌
18
15
11
0
0
0
2.链球菌
20
17
15
11
0
0
3.金黄色葡萄球菌
13
12
11
9
0
0
4.柠檬色葡萄球菌
14
11.5
11.5
10
7
0
5.金黄色葡萄球菌
15
13
13
10
9
0
6.金黄色葡萄球菌
15
12
10
9
0
0
7.柠檬色葡萄球菌
17
14
11
9
0
0
8.β链球菌
13
11
10
7
0
0
9.α链球菌
18
16
14
12
9
0
10.α链球菌
16
15
14
13
12
0
11.β链球菌
13.5
12
10.5
0
0
0
12.γ链球菌
22
20
16
12
10
7
13.γ链球菌
16
13
12
9
7
0
14,肠球菌属
18
18
13
10
0
0
15.肠球菌属
14
12
11
8
0
0
16.肠球菌属
14
12
11
9
0
0
17.棒杆菌属
18
16
15
14
10
7
18.棒杆菌属
19
18
16
14
12
9
19.棒杆菌属
16
13
10
9
0
0
20.奈瑟球菌属
24
18
15
12
0
0
21.肠球菌属
13
11
9
0
0
0
总计
346
299
258
187
76
23
平均值
16.5
14.2
12.2
8.9
3.6
1
注解：
达到1/4稀释度时可确定复方乳酸的有效性。
达到1/8的稀释度它是有限的，但继续存在；在1/16的稀释度时消失。
复方乳酸对培养物抑制现象的解释
重要的是了解我们是否正在研究抑菌或杀菌现象。
在第1种情况下，当制备抑制区的传代培养物时，应得到传代培养物。
在第2种情况下，传代培养物应保持无菌。
对于病菌，传代培养物可在液体培养基或部分固体部分液体的培养基或仅在马-欣二氏琼脂糖中制备。
我们甚至将我们的培养物在37℃下保存3天。
我们希望了解几小时或几天后是否出现菌落。
我们的目的是消除细菌怠惰现象。
在其中1个情况下，复方乳酸将建立不可能使病菌恢复其分裂能力的那些条件。
在其它情况下，可能出现抑菌现象；重新引入有利培养基中的菌株趋向于发育并恢复其能量代谢。
复方乳酸对真菌作用的研究
这项研究可分成完全不同的2个部分。
-复方乳酸对生长缓慢的皮肤真菌作用的研究；
-复方乳酸对白色念珠菌和念珠菌属作用的研究。
A）生长缓慢的皮肤真菌
这类研究的最大困难是盒内出现真菌、生长并成为可以识别的菌落、将它们的不同特征具体化所涉及的时间。
培养物需要至少3周，并且所有风险通常来自接种分布、隔开菌落培养物。
必须保护盒子以防干燥、粉尘和气生悬浮物。
每天必须对它们进行检查，必须作记录、测量间隔，评价所形成大小逐渐发展的菌落。
这类检查具有不同的意义，判读是主要部分，全都没有严格精确的。
作为我们的基本培养基，我们选择具有下列构成的“海藻糖琼脂”：
-植物蛋白胨
10g
-葡萄糖
10g
-琼脂糖
15g
-放线菌酮
0.4g
-氯霉素
0.05g
（每升）
我们一直加入“Mycophil琼脂”，它具有相同的处方但不含放线菌酮或氯霉素。
皮肤病学损害为我们的试验提供必需的材料。
我们制备了下列传代培养物：
4个来自损害加倍的青霉素、2个黑曲霉菌、2个烟曲霉菌、1个絮状麦皮癣菌、2个红色毛癣菌、1个须发栉霉菌。
将12个菌株在直径9cm的培养皿上培养、富集并用胶带密封，储存在潮湿环境的22o药柜中。
用下列培养基浸渍已经沉积的纸片：
-Milian-水溶液：
M
-2p.100曙红：
E
-复方乳酸，纯、一半、四分之一、八分之一：
L、L/2、L/4、L/8
总共6个纸片。
根据我们的日常观察结果，我们了解到下列情况：
1）培养在培养皿中间的色料周围开始。
围绕L、L/2、L/4、L/8的马蹄形区域保持无菌。
未培养区宽25-30mm。
在L和L2周边更明显。
2）菌落生产并试图汇合。
在马蹄形区中依次出现小菌落。
侵入L/8、然后L/4周边。
小菌落标记2个圈L和L/2。
马蹄形被类似“眼镜”的区域替代。
小菌落在纸片周围标出1/10mm，在距纸片5mm处5/10，在距纸片1cm处2-5mm。
3）非培养区的侵入继续，首先侵入L/2周边，然后侵入L周围的区域。
因此，非酵母皮肤真菌发育的持续研究表明复方乳酸可对抗这些真菌的发育。
a）隔开结果：
我们观察到更缓慢的生长，尤其是由于复方乳酸量较大。
b）菌落的大小：
菌落保持更稀、更病态，尤其是更接近纸片L周围的扩散源时；菌落出现很困难。
另一方面，皮肤真菌的生长在彩色纸片周围比较容易。
B）白色念珠菌和其它酵母菌：
由于我们确信抗菌药的扩散质量，并且我们能够将所得结果与已经通过野生致病菌株检验的结果比较，因此这项研究是用马-欣二氏琼脂糖实施的。
试验方案与为病菌试验确定的试验方案相同。
只有接种稀释液的质量发生变化：
在2ml无菌生理盐水中，放入半校正定量环（1.5mm2）的念珠菌属培养物。
这种悬液在Bricq-Vernes-Constant-光度计上有65单位的不透明度偏差。
这相当于2000个酵母菌/mm3；相当于每个培养皿100,000个酵母菌，相当于1,572个酵母菌/cm2。
被研究的菌株是野生白色念珠菌菌株和取自病理学产物（皮肤损害、生殖器分泌物、尿、粪便、鼻咽、支气管）的酵母菌。
下列图表给出了这项研究的结果（抑制圈，mm）：
1）白色念珠菌（阳性拉丝试验）：
编号
Milian水溶液
2p.100曙红
乳清乳酸
1
32
0
14
2
29
0
12
3
28
0
12
4
28
0
14
5
30
0
13
6
25
0
13
7
30
0
12
8
30
0
12
9
28
0
12
10
30
0
12
11
30
0
13
12
27
0
12
13
26
0
13
14
28
0
12
15
26
0
15
16
28
0
10
17
30
0
14
2）酵母菌：
拉丝试验为阴性。
通过萨布罗放线菌酮和萨布罗四唑试验，将这些酵母菌分类为属于铁红假丝酵母、克鲁斯假丝酵母、季也蒙假丝酵母系列。
下列图表得到结果：
编号
Milian
曙红
乳清乳酸
1
23
0
14
2
20
0
16
3
11
0
11
（用26的环传代培养）
4
30
0
12
5
32
0
13
6
28
0
12
7
18
0
11
8
24
0
15
-白色念珠菌的平均培养物抑制：
Milian水溶液
2p.100曙红
乳清乳酸
28.52
0
12.64
-其它念珠菌属的平均培养物抑制：
Milian水溶液
2p.100曙红
乳清乳酸
23.25
0
13
注解：
1）复方乳酸抑制取自病理学渗出物的白色念珠菌和酵母菌的培养物。
2）其活性的重要性低于Milian水溶液的重要性，但明显优于2p.100曙红溶液（但它在擦烂中使用）的重要性。
3）对白色念珠菌的作用与对酵母菌的作用相同。
有效性的定量研究
我们尝试了达1/32的复方乳酸稀释液，以查看在多大稀释度下产品仍然有效。
同时，我们研究了取自病理学渗出物但在血清拉丝试验中为阴性的白色念珠菌和酵母菌。
下面的表格列出了抑制区（抑制圈，mm）：
编号
L
L/2
L/4
L/8
L/16
L/32
1
14
10
0
0
0
0
2
14
14
10
0
0
0
3
10
8
0
0
0
0
4
15
13
10
0
0
0
5
12
9
0
0
0
0
6
13
11
0
0
0
0
7
12
9
0
0
0
0
8
13
11
0
0
0
0
9
12
10
0
0
0
0
10
12
8
0
0
0
0
11
12
8
0
0
0
0
12
12
10
7
6
0
0
13
13
11
8
0
0
0
14
13
10
6
0
0
0
15
14
14
9
0
0
0
16
12
9
0
0
0
0
17
12
10
0
0
0
0
18
15
13
10
0
0
0
19
11
10
0
0
0
0
20
12
11
8
0
0
0
21
13
11
7
0
0
0
22
12
10
0
0
0
0
23
11
10
0
0
0
0
24
16
12
8
0
0
0
25
14
12
9
0
0
0
总计
319
264
92
6
0
0
平均值
12.76
10.56
3.68
0.24
0
0
注解：
1）在1/2的稀释度下复方乳酸仍然有效。
2）在1/4稀释度下下降明显。
培养现象抑制的判定
在读取后我们将培养皿保存30小时，以查看抑制区中是否出现后验培养现象。
在显阴性拉丝试验的酵母情况下，这两步培养物仅显阳性一次：
-Milian溶液周围的圆圈从26到11。
-复方乳酸周围的圆圈从16到11。
它是适应困难培养条件的生物学现象，不超过4％频率但可能是获取耐药现象的第一步。
我们用取自培养拒绝区中心的样品制备传代接种物。
在马-欣二氏琼脂糖平板上重新开始这些样品。
下面的图表给出了这些试验的结果：
重新开始的培养数
抗乳血清和乳酸区采集的传代培养物的结果
1
0
2
0
3
（++）
4
0
5
0
6
0
7
0
8
0
9
0
10
（+）
11
0
12
0
13
0
14
0
15
0
16
（+）
17
0
18
0
19
0
20
0
21
0
22
0
23
（++）
24
0
25
0
（+++）茂盛
（+）有凹痕的培养物
（++）正常培养物
（0）无传代培养物
注解：
在16％的情况下，在复方乳酸抑制区中可能存在传代培养物。
在84％的情况下，复方乳酸明显抑制白色念珠菌和酵母菌培养物。
它
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