分析性能评估资料符合性研究.docx

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分析性能评估资料符合性研究

分析性能评估资料（四）

4.HPV各亚型的符合性研究

4.1HPV各亚型的符合性研究

4.1.1实验的基本参数

文件号

BMT-TF-SFDA-01-R0

实验名称

HPV各亚型的符合性研究

实验目的

用于评价分析BMTHPV分型9G膜试剂盒的符合性试验

操作者

（签名）

确认人

（签名）

开始日期（年/月/日）

结束日期（年/月/日）

试验地点

BMT2-2-2温度湿度

使用的材料/样本

使用HPV16,18,31,33,45,26,35,39,51,52,53,56,58,59,66,68,69,70,73,6,10,的标准物质和10mMTris缓冲液（阴性）

产品编号

产品名称

质控号

BMTHPV1分型9G膜试纸条

BMTHPV2分型9G膜试纸条

杂交缓冲液

HCCy5-DNA

冲洗缓冲液

10mMTris缓冲液（pH8.0）

PCR预混合物

BMTHPV引物组

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\HPV各型的符合性研究

1②

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原始文件名

4.1.2实验方法

1）材料准备

在设定的有效期内使用已经过Nanodrop定量检测的确定浓度的DNA作为测试标本。

该测试样本是由韩国食品与药品管理局分配的国家标准品HPVL1DNA（人乳头瘤病毒L1DNA,代码08/023）。

使用的标本见下表。

使用的材料/样本

样本：

HPVL1DNA（人乳头瘤病毒L1DNA，代码08/023）

HPV亚型

管理编号

标准物质的浓度

HPV亚型

管理编号

标准物质的浓度

HPV16

HPV-16-KFDA

1.0x102拷贝

HPV56

HPV-56-KFDA

1.0x103拷贝

HPV18

HPV-18-KFDA

1.0x102拷贝

HPV58

HPV-58-KFDA

1.0x103拷贝

HPV31

HPV-31-KFDA

1.0x102拷贝

HPV59

HPV-59-KFDA

1.0x103拷贝

HPV33

HPV-33-KFDA

1.0x102拷贝

HPV66

HPV-66-KFDA

1.0x103拷贝

HPV45

HPV-45-KFDA

1.0x103拷贝

HPV68

HPV-68-KFDA

1.0x103拷贝

HPV26

HPV-26-KFDA

1.0x103拷贝

HPV69

HPV-69-KFDA

1.0x103拷贝

HPV35

HPV-35-KFDA

1.0x103拷贝

HPV70

HPV-70-KFDA

1.0x103拷贝

HPV39

HPV-39-KFDA

1.0x103拷贝

HPV73

HPV-73-KFDA

1.0x103拷贝

HPV51

HPV-51-KFDA

1.0x103拷贝

HPV06

HPV-06-KFDA

1.0x103拷贝

HPV52

HPV-52-KFDA

1.0x103拷贝

HPV10

HPV-11-KFDA

1.0x103拷贝

HPV53

HPV-53-KFDA

1.0x103拷贝

阴性对照

10mMtrisbuffer

2）实验过程

BMTHPV9G膜试剂盒对HPV各亚型符合性实验操作步骤如下。

a）准备好HPV16,18,31,33,45,26,35,39,51,52,53,56,58,59,66,68，69,70,73，6，10的标准物质和10mMtris缓冲液（阴性）；

b）按照用户手册中PCR法（2-2）操作，以上述DNA为模板进行PCR扩增；

c）然后，按照用户手册中杂交法（2-3）步骤在试纸条上进行杂交，再按照用户手册中的冲洗方法（2-4）进行冲洗；

d）使用BMT1D扫描仪TM扫描试纸条并分析结果；

e）若HPV检测显示“HPVPositive”，同时HPV16,18,45,31,33低于300时，将剩下的第一次杂交溶液（110ul）加至HPV2试纸条（可选）的“样本端口”，以取得进一步的基因分型结果。

4.1.3结论

HPV亚型

实验次数

第一次

第二次

第三次

HPV16

HPV18

HPV31

HPV33

HPV45

HPV26

HPVtypeE

HPV35

HPVtypeC

HPV39

HPVtypeD

HPV51

HPVtypeC

HPV52

HPVtypeA

HPV53

HPVtypeE

HPV56

HPVtypeB

HPV58

HPVtypeC

HPV59

HPVtypeB

HPV66

HPVtypeA

HPV68

HPVtypeC

HPV69

HPVtypeC

HPV70

HPVtypeD

HPV73

HPVtypeE

HPV06

+（PCRline）

HPV10

+（PCRline）

Tris缓冲液

注释：

“+”代表阳性，“-”代表阴性

4.1.4实验结果

4.1.4.1HPV16的测试结果

这个结果是通过以下的步骤获得的：

将浓度为1.0x102拷贝的HPV16DNA样本作为DNA模板并进行PCR扩增，接着在取得的扩增片段与BMTHPV1分型9G膜试纸条反应完之后进行冲洗，最后再使用1D扫描仪TM进行扫描。

这个测试重复做三次。

将通过分析HPV16符合的结果而得出的数值归纳到上述三次试验结果的表格中。

根据分析结果，由于浓度为1.0x102拷贝的HPV16的所有扫描结果在HPV16位置上的荧光灵敏度达到3,404或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到2,510或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x102拷贝的结果。

除HPV16外其他亚型HPV位置上的荧光强度数值低于59，所以它们不会在其它位置被检测出来。

HC的荧光强度检出值为1,941或更高，PC的荧光强度检出值为846或更高。

4.1.4.2HPV18测试结果

这个结果是通过以下的步骤获得的：

将浓度为1.0x102拷贝的HPV18DNA样本作为DNA模板并进行PCR扩增，接着在取得的扩增片段与BMTHPV1分型9G膜试纸条反应完之后进行冲洗，最后再使用1D扫描仪TM进行扫描。

这个测试重复做三次。

将通过分析HPV18符合的结果而得出的数值归纳到上述三次试验结果的表格中。

根据分析结果，由于浓度为1.0x102拷贝的HPV18的所有扫描结果在HPV18位置上的荧光灵敏度达到2,959或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,211或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x102拷贝的结果。

除HPV18外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于139，所以它们不会在其它位置被检测出来。

HC的荧光强度检出值为1,404或以上，PC的荧光强度检出值为512或以上。

4.1.4.3HPV45的测试结果

这个结果是通过以下的步骤获得的：

将浓度为1.0x103拷贝的HPV45DNA样本作为DNA模板并进行PCR扩增，接着在取得的扩增片段与BMTHPV1分型9G膜试纸条反应完之后进行冲洗，最后再使用1D扫描仪TM进行扫描。

这个测试重复做三次。

分析HPV45的符合性测试结果得到的数值可归纳到以上的三次试验结果表格中。

根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV45的所有扫描结果在HPV45位置上的荧光灵敏度达到3,068或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,256或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。

除HPV45外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于145，所以它们不会在其它位置被检测出来。

HC的荧光强度检出值为1,379或以上，PC的荧光强度检出值为796或以上。

4.1.4.4HPV31的测试结果

这个结果是通过以下的步骤获得的：

将浓度为1.0x102拷贝的HPV31DNA样本作为DNA模板并进行PCR扩增，接着在取得的扩增片段与BMTHPV1分型9G膜试纸条反应完之后进行冲洗，最后再使用1D扫描仪TM进行扫描。

这个测试重复做三次。

分析HPV31的符合性测试结果得到的数值可归纳到以上的三次试验结果表格中。

根据分析结果，由于浓度为1.0x102拷贝的HPV31的所有扫描结果在HPV31位置上的荧光灵敏度达到3,327或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,479或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x102拷贝的结果。

除HPV31外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于182，所以它们不会在其它位置被检测出来。

HC的荧光强度检出值为1,881或以上，PC的荧光强度检出值为671或以上。

4.1.4.5HPV33的测试结果

这个结果是通过以下的步骤获得的：

将浓度为1.0x102拷贝的HPV33DNA样本作为DNA模板并进行PCR扩增，接着在取得的扩增片段与BMTHPV1分型9G膜试纸条反应完之后进行冲洗，最后再使用1D扫描仪TM进行扫描。

这个测试重复做三次。

分析HPV33的符合性测试结果得到的数值可归纳到以上的三次试验结果表格中。

根据分析结果，由于浓度为1.0x102拷贝的HPV33的所有扫描结果在HPV33位置上的荧光灵敏度达到2,878或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,214或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x102拷贝的结果。

除HPV33外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于84，所以它们不会在其它位置被检测出来。

HC的荧光强度检出值为1,896或以上，PC的荧光强度检出值为610或以上。

4.1.4.6HPV26的测试结果

这个结果是通过以下的步骤获得的：

将浓度为1.0x103拷贝的HPV26DNA样本作为DNA模板并进行PCR扩增，接着在取得的扩增片段与BMTHPV2分型9G膜试纸条反应完之后进行冲洗，最后再使用1D扫描仪TM进行扫描。

这个测试重复做三次。

分析HPV26的符合性测试结果得到的数值可归纳到以上的三次试验结果表格中。

根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV26的所有扫描结果在HPV26位置上的荧光灵敏度达到3,328或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到2,494或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。

除HPV26外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于72，所以它们不会在其它位置被检测出来。

HC的荧光强度检出值为1,504或以上，PC的荧光强度检出值为463或以上。

4.1.4.7HPV35的测试结果

这个结果是通过以下的步骤获得的：

将浓度为1.0x103拷贝的HPV35DNA样本作为DNA模板并进行PCR扩增，接着在取得的扩增片段与BMTHPV2分型9G膜试纸条反应完之后进行冲洗，最后再使用1D扫描仪TM进行扫描。

这个测试重复做三次。

分析HPV35的符合性测试结果得到的数值可归纳到以上的三次试验结果表格中。

根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV35的所有扫描结果在HPV35位置上的荧光灵敏度达到1,862或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到2,804或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。

除HPV35外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于244，所以它们不会在其它位置被检测出来。

HC的荧光强度检出值为1,770或以上，PC的荧光强度检出值为890或以上。

4.1.4.8HPV39的测试验结果

这个结果是通过以下的步骤获得的：

将浓度为1.0x103拷贝的HPV39DNA样本作为DNA模板并进行PCR扩增，接着在取得的扩增片段与BMTHPV2分型9G膜试纸条反应完之后进行冲洗，最后再使用1D扫描仪TM进行扫描。

这个测试重复做三次。

分析HPV39的符合性测试结果得到的数值可归纳到以上的三次试验结果表格中。

根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV39的所有扫描结果在HPV39位置上的荧光灵敏度达到2,228或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,162或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。

除HPV39外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于165，所以它们不会在其它位置被检测出来。

HC的荧光强度检出值为1,380或以上，PC的荧光强度检出值为591或以上。

4.1.4.9HPV51的测试结果

这个结果是通过以下的步骤获得的：

将浓度为1.0x103拷贝的HPV51DNA样本作为DNA模板并进行PCR扩增，接着在取得的扩增片段与BMTHPV2分型9G膜试纸条反应完之后进行冲洗，最后再使用1D扫描仪TM进行扫描。

这个测试重复做三次。

分析HPV51的符合性测试结果得到的数值可归纳到以上的三次试验结果表格中。

根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV51的所有扫描结果在HPV51位置上的荧光灵敏度达到1,661或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到2,500或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。

除HPV51外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于143，所以它们不会在其它位置被检测出来。

HC的荧光强度检出值为1,607或以上，PC的荧光强度检出值为949或以上。

4.1.4.10HPV52的测试结果

这个结果是通过以下的步骤获得的：

将浓度为1.0x103拷贝的HPV52DNA样本作为DNA模板并进行PCR扩增，接着在取得的扩增片段与BMTHPV2分型9G膜试纸条反应完之后进行冲洗，最后再使用1D扫描仪TM进行扫描。

这个测试重复做三次。

分析HPV52的符合性测试结果得到的数值可归纳到以上的三次试验结果表格中。

根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV52的所有扫描结果在HPV52位置上的荧光灵敏度达到2,947或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,215或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。

除HPV52外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于169，所以它们不会在其它位置被检测出来。

HC的荧光强度检出值为2,183或以上，PC的荧光强度检出值为535或以上。

4.1.4.11HPV53的测试结果

这个结果是通过以下的步骤获得的：

将浓度为1.0x103拷贝的HPV53DNA样本作为DNA模板并进行PCR扩增，接着在取得的扩增片段与BMTHPV2分型9G膜试纸条反应完之后进行冲洗，最后再使用1D扫描仪TM进行扫描。

这个测试重复做三次。

分析HPV53的符合性测试结果得到的数值可归纳到以上的三次试验结果表格中。

根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV53的所有扫描结果在HPV53位置上的荧光灵敏度达到2,943或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到2,769或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。

除HPV53外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于153，所以它们不会在其它位置被检测出来。

HC的荧光强度检出值为1,022或以上，PC的荧光强度检出值为504或以上。

4.1.4.12HPV56的测试结果

这个结果是通过以下的步骤获得的：

将浓度为1.0x103拷贝的HPV56DNA样本作为DNA模板并进行PCR扩增，接着在取得的扩增片段与BMTHPV2分型9G膜试纸条反应完之后进行冲洗，最后再使用1D扫描仪TM进行扫描。

这个测试重复做三次。

分析HPV56的符合性测试结果得到的数值可归纳到以上的三次试验结果表格中。

根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV56的所有扫描结果在HPV56位置上的荧光灵敏度达到3,440或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,172或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。

除HPV56外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于232，所以它们不会在其它位置被检测出来。

HC的荧光强度检出值为1,940或以上，PC的荧光强度检出值为758或以上。

4.1.4.13HPV58的测试结果

这个结果是通过以下的步骤获得的：

将浓度为1.0x103拷贝的HPV58DNA样本作为DNA模板并进行PCR扩增，接着在取得的扩增片段与BMTHPV2分型9G膜试纸条反应完之后进行冲洗，最后再使用1D扫描仪TM进行扫描。

这个测试重复做三次。

分析HPV58的符合性测试结果得到的数值可归纳到以上的三次试验结果表格中。

根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV58的所有扫描结果在HPV58位置上的荧光灵敏度达到2,043或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,144或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。

除HPV58外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于81，所以它们不会在其它位置被检测出来。

HC的荧光强度检出值为2,712或以上，PC的荧光强度检出值为638或以上。

4.1.4.14HPV59的测试结果

这个结果是通过以下的步骤获得的：

将浓度为1.0x103拷贝的HPV59DNA样本作为DNA模板并进行PCR扩增，接着在取得的扩增片段与BMTHPV2分型9G膜试纸条反应完之后进行冲洗，最后再使用1D扫描仪TM进行扫描。

这个测试重复做三次。

分析HPV59的符合性测试结果得到的数值可归纳到以上的三次试验结果表格中。

根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV59的所有扫描结果在HPV59位置上的荧光灵敏度达到3,084或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,210或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。

除HPV59外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于170，所以它们不会在其它位置被检测出来。

HC的荧光强度检出值为1,316或以上，PC的荧光强度检出值为485或以上。

4.1.4.15HPV66的测试结果

这个结果是通过以下的步骤获得的：

将浓度为1.0x103拷贝的HPV66DNA样本作为DNA模板并进行PCR扩增，接着在取得的扩增片段与BMTHPV2分型9G膜试纸条反应完之后进行冲洗，最后再使用1D扫描仪TM进行扫描。

这个测试重复做三次。

分析HPV66的符合性测试结果得到的数值可归纳到以上的三次试验结果表格中。

根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV66的所有扫描结果在HPV66位置上的荧光灵敏度达到3,005或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,206或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。

除HPV66外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于84，所以它们不会在其它位置被检测出来。

HC的荧光强度检出值为1,478或以上，PC的荧光强度检出值为610或以上。

4.1.4.16HPV68的测试结果

这个结果是通过以下的步骤获得的：

将浓度为1.0x103拷贝的HPV68DNA样本作为DNA模板并进行PCR扩增，接着在取得的扩增片段与BMTHPV2分型9G膜试纸条反应完之后进行冲洗，最后再使用1D扫描仪TM进行扫描。

这个测试重复做三次。

分析HPV68的符合性测试结果得到的数值可归纳到以上的三次试验结果表格中。

根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV68的所有扫描结果在HPV68位置上的荧光灵敏度达到1,858或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,218或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。

除HPV68外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于214，所以它们不会在其它位置被检测出来。

HC的荧光强度检出值为1,961或以上，PC的荧光强度检出值为789或以上。

4.1.4.17HPV69的测试结果

这个结果是通过以下的步骤获得的：

将浓度为1.0x103拷贝的HPV69DNA样本作为DNA模板并进行PCR扩增，接着在取得的扩增片段与BMTHPV2分型9G膜试纸条反应完之后进行冲洗，最后再使用1D扫描仪TM进行扫描。

这个测试重复做三次。

分析HPV69的符合性测试结果得到的数值可归纳到以上的三次试验结果表格中。

根据分析结果，由于浓度为1.0x103拷贝的HPV69的所有扫描结果在HPV69位置上的荧光灵敏度达到1,436或以上，同时PCR位置的荧光灵敏度达到3,165或以上，因此可得到能检出模板DNA浓度达到1.0x103拷贝的结果。

除HPV69外其他类型HPV位置上的荧光强度数值低于130，所以它们不会在其它位置

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