周立春--仿制药杂质研究探讨.ppt

周立春--仿制药杂质研究探讨.ppt

《周立春--仿制药杂质研究探讨.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《周立春--仿制药杂质研究探讨.ppt（92页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。

仿制药杂质研究探讨,周立春,主要内容,一、仿制药杂质研究管理基本思路二、仿制药杂质检查方法建立研究方案三、仿制药方法学验证的评估,一、仿制药杂质研究管理基本思路,一、对原研药品的解读二、文献的梳理（各种质量标准）三、杂质谱分析四、有效利用强制破坏的方法五、杂质的识别、定性和控制,对原研制剂的解读,一、药物主要成分（API）的特点二、药物作用与药代动力学特点三、专利的解读四、药物制剂的特点（有效性）五、药物有关物质的特点六、药物稳定性研究提供的信息七、药物包装的特点,头孢地嗪钠,酒石酸美托洛尔,阿奇霉素,药物作用与药代动力学特点,影响药物代谢的因素疾病原因：

因疾病引起肝功能障碍，使药酶活性和数量降低，药物代谢能力下降；食物因素：

蛋白质影响药酶的活性；饮食中缺乏维生素、脂肪等也会降低药酶的活性；药物因素：

包括：

给药途径、给药方法、给药剂量、制剂剂型、合并用药等因素。

给药途径：

口服药物的首过效应是导致药物差异的主要原因。

药物作用与药代动力学特点,阿司匹林：

水杨酸对胃的刺激作用。

硝苯地平：

缓释的意义阿奇霉素：

在酸性条件下的降解,专利的解读,枸橼酸莫沙必利专利保护是围绕膜衣处方进行的原因：

是枸橼酸与含有过氧化物的PEG发生氧化反应，盐结构破坏后，莫沙必利溶解性下降。

有效性与原研产品产生差异。

药物有关物质的特点,一、药物主要成分（API）与杂质的相关性二、工艺过程引入的杂质三、处方中其他组分或辅料对API的相容性四、降解途径,与原研药物的比较,溶出曲线的比较（大概率事件）杂质谱的比较（注意比较的有效性）稳定性的比较（趋势）其他（包装等）,文献的梳理,各国药典的收载情况美国药典论坛的测定方法原研药物的进口注册标准中国药典及国家注册标准相关的学术文章,杂质谱分析的意义,产品中可能存在的杂质杂质的来源工艺中和储存中如何控制实际样品中的杂质情况新产品的情况加速试验的结果长期稳定性试验的结果,有关物质的来源,起始原料中间体、副产物降解产物聚合物异构体多晶型杂质,杂质谱的比较,方法的有效性所选样品的时效性工艺的有效性处方的有效性比较的意义杂质的有效控制,强制破坏的研究,内容：

专属性试验中的强制破坏影响因素试验加速试验,强制破坏的研究,解决问题：

杂质的降解途径分离条件的确定检测手段合理性,杂质的识别、定性和控制,杂质的识别、定性和控制,理论上讲，应该根据杂质的毒性、用药量等多种因素综合考虑，但由于缺乏对杂质的基础性研究，故一般国内产品质量能达到欧美标准要求的，基本上与仿制药保持一致。

根据文献检索和质量研究确定的已知杂质和未知杂质现状另结合样品稳定性考察情况综合制定。

二、仿制药杂质检查方法建立研究方案,文献分析API性质分析方法优化方法学验证样品测定情况（即时产品，稳定性产品）杂质谱的对比,结构与性质（举例：

奥利司他）,USP要求开环物质（相对保留时间0.45）不得过1.5%，单个杂质不得过0.1%，杂质总量不得过2.0%。

仿制药的标准单个杂质不得过0.1%杂质总量不得过0.5%相对保留时间0.4以前的峰不计。

仿制药有关物质方法优化,比较色谱柱的差异比较流动相的组成、比例、缓冲液的离子浓度、pH值、梯度、等度等等比较检测手段关注系统适用性试验杂质的定量方式,有关物质控制,有关物质关于分离及检测方法色谱柱原则：

方法验证时进行粗放度试验（三根以上色谱柱），特殊填料应在各论中予以注明，强调“或效能相当”。

大多为反相高效液相法，采用C18、C8、苯基等键合硅胶填料，以C18为最常用；目前C18色谱柱类型也很多，不同基质、不同载碳量、不同封端处理方式、不同纯度、不同粒径、孔径、柱长等，影响因素较多，方法研究时应注意粗放度考察；,色谱柱的差异,低金属不纯物的含量,色谱柱的差异,Inersil（ODS-2，5m，4.6mm250mm）柱色谱图,.迪马公司（钻石，5m，4.6mm250mm）柱色谱图,色谱柱的差异,资生堂MG5m，4.6mm150mm色谱柱图谱,Waters（XBridgeTMShieldRP185m，4.6mm250mm）柱色谱图,有关物质控制,有关物质关于分离及检测方法色谱柱也有采用分子排阻色谱法，有的采用亲水改性硅胶；例：

头孢地嗪钠有关物质，以球状蛋白色谱用亲水硅胶（分子量适用范围为100010000）为填充剂还有的采用离子色谱法，采用离子色谱填料。

例：

氯膦酸二钠及注射剂，采用阴离子交换色谱柱（推荐使用IonPacAS11-HC，或效能相当）,例：

离子色谱（氯膦酸二钠）,照离子色谱法试验用阴离子交换色谱柱（推荐使用IonPacAS11-HC，或效能相当），柱温30以水为流动相A，以0.1mol/L氢氧化钾溶液为流动相B，梯度洗脱，流速为1.2ml/min。

检测器为电导检测器，检测方式为抑制电导检测。

氯膦酸二钠原料药的有关物质与制剂的含量测定,有关物质控制,有关物质关于分离及检测方法流动相在保证灵敏度的前提下，一般采用等度洗脱；必要时可采用梯度洗脱方式（如：

多杂质组分的分离，等度洗脱分离效果不佳；或杂质性质相差较大，等度洗脱时间过长，损失灵敏度）例：

法莫替丁氯化钠注射液流动相以挥发性流动相为好，一般情况下尽量不加离子对试剂。

法莫替丁氯化钠注射液（有关物质）,原国家标准方法等度洗脱结果：

23.6%,2010年版方法梯度洗脱结果：

28.3%,液相色谱常用检测器,光学检测器：

紫外、荧光、示差折光、蒸发光散射（通用型检测器）电化学检测器：

极谱、库仑、安培电学检测器：

电导、介电常数质谱检测器选择性检测器：

灵敏度较高,2010版药典二部采用检测器情况,有关物质控制,有关物质关于分离及检测方法检测器一般采用紫外检测器：

波长的选择更加关注杂质的最大吸收或最佳检测参数，以提高杂质的检测灵敏度。

难以兼顾各杂质可选择多波长检测部分品种采用蒸发光检测器：

谨慎选用蒸发光检测器，必要时对主要实验参数进行描述。

有关物质检测波长的确定,头孢地嗪通过采用DAD检测器在不同检测波长检测各种破坏试验的杂质变化情况，发现有的杂质在215nm和262nm的紫外吸收不同。

在215nm的吸收与主峰的吸收接近，因此检测波长定在215nm。

破坏试验不同波长的杂质变化,头孢地嗪的紫外吸收图,杂质之一的紫外吸收图,有关物质控制,有关物质关于系统适用性试验要求：

分离度*通过分离度的限制来保证分离的重现性。

要求杂质和主成分、杂质之间的分离度均要得到良好保证。

（1）采用杂质对照品溴丙胺太林：

呫吨酸、呫吨酮、9羟基溴丙胺太林与溴丙胺太林峰之间的分离度均应符合要求；尼莫地平：

杂质I与主峰分离度应大于3.0；枸橼酸氯米芬有关物质中要求其顺反异构体的分离度不得低于1.3。

例：

有关物质（溴丙胺太林）,有关物质控制,有关物质关于系统适用性试验要求：

分离度

（2）采用混合对照品采用纯度稍差但杂质组分组成与比例相对稳定的原料药，可以较好地保证分离的重现性。

关键在于对照品的提供。

例：

氯碘羟喹,有关物质控制,氯碘羟喹系统适用性试验色谱图,有关物质（关于系统适用性试验要求：

分离度）,有关物质控制,有关物质关于系统适用性试验要求：

分离度（3）通过化学处理或其它降解方式产生杂质（注意：

反应条件的优化与重现）例1：

盐酸甲氯芬酯通过水浴加热，产生水解产物峰，该峰（相对保留时间0.6）与主峰分离度应大于6.0；例2：

戊酸雌二醇称取戊酸雌二醇对照品10mg，在160烘箱中加热2小时后，用乙腈溶解并稀释至25ml，摇匀，量取10l注入液相色谱仪，戊酸雌二醇与降解产物（相对保留时间约为0.92）的分离度应符合规定。

有关物质控制,戊酸雌二醇系统适用性试验色谱图（戊酸雌二醇tR=9.466，降解物tR=8.723，分离度Rs=1.5）,有关物质（关于系统适用性试验要求：

分离度）,有关物质控制,有关物质关于系统适用性试验要求：

分离度（4）采用其它方法制备系统适用性试验用样品（如：

采用结构性质相近的指标性物质）例：

茶碱，采用茶碱和可可碱配成溶液作为系统适用性试验溶液，要求两者的分离度大于2.0。

有关物质控制,有关物质关于系统适用性试验要求：

分离度（5）采用相对保留时间定位（如果无法长期获得该杂质对照品时）应特别注意色谱条件的耐用性考察如能在标准中列出主成分的保留时间、色谱柱尺寸，可增强此法的可操作性。

在梯度洗脱的色谱系统中为保证方法的重现性，应对主峰的出峰时间进行规定。

例：

己酮可可碱通过梯度洗脱，在系统适用性试验中不仅规定相关杂质的分离度，同时规定己酮可可碱的出峰时间为12分钟。

有关物质控制,有关物质关于系统适用性试验要求：

拖尾因子对于在色谱系统中峰形非对称的色谱峰规定该色谱峰的拖尾因子是很有意义的，以保证色谱峰不会因拖尾严重，而导致杂质峰包裹在主峰中未被检出。

例：

马来酸依那普利的色谱条件中，除规定相关杂质的分离度外，同时规定依那普利峰的拖尾因子不得过2.0。

有关物质控制,有关物质关于系统适用性试验要求：

灵敏度试验通过配制灵敏度试验溶液（主成分浓度一般与报告限一致），并规定灵敏度试验溶液中主成分的信噪比，可以更好地保证方法的重现性、灵敏度和测定结果的准确性。

例：

紫杉醇对照溶液

（2）（相当于0.1%）主成份峰的信噪比应不小于10。

有关物质控制,有关物质关于系统适用性试验要求：

报告限通过规定小于对照溶液主峰面积的一定量的色谱峰可忽略不计，可保证积分参数设置的合理性和一致性。

例：

甘露醇供试品溶液的色谱图中，任何小于对照溶液主峰面积的0.05倍的峰可忽略不计。

例：

十一酸睾酮供试品溶液色谱图中，任何小于对照溶液主峰面积0.02倍的色谱峰可忽略不计。

有关物质控制,有关物质关于定量方法

（1）杂质对照品外标法：

采用杂质对照品，按外标法计算，应注意该杂质线性范围的考察。

（注意：

如引入了定量杂质对照品，则该杂质对照品的质量应满足定量要求。

）例：

荧光素钠间苯二酚（杂质）、邻苯二甲酸（杂质）例：

对氨基水杨酸钠间氨基酚例：

地塞米松倍他米松,有关物质控制,有关物质关于定量方法

（2）加校正因子的自身对照法：

若仅在实验过程中可提供相应质量和数量的杂质对照品，而长期提供符合要求的杂质对照品难度较大，则考察该杂质相对于主成分的校正因子。

（用于测定校正因子的杂质对照品应按定量对照品的要求进行标化），采用加校正因子（超出0.9-1.1）的主成分自身对照法进行检查。

相关术语的定义,响应因子（K）：

当检测器输出的信号与被测物质的浓度呈线性响应时，检测器输出的信号（A）与被测物质的浓度（C）的比值即为响应因子。

K=A/C校正因子（F）:

响应因子的比值F=K1/K2,有关物质控制,有关物质关于定量方法（3）不加校正因子的主成分自身对照法：

大多数品种采用了这种方法对杂质进行控制。

（4）峰面积归一化法：

2010版化学药品中很少使用，在保证0.1%或0.05%、甚至更低含量的杂质能被检出的情况下，主成分浓度就会很高，如采用该法应考虑最小组分和最大组分的检测响应是否在主成分的线性范围内。

谨慎使用。

例1：

大豆油（供注射用）脂肪酸组成例2：

甘油二甘醇、乙二醇与其他杂质,有关物质控制,有关物质气相色谱法填充柱改毛细管柱，等温洗脱改程序升温，增加了系统适用性要求例1：

壬苯醇醚（游离环氧乙烷）分离度例2：

甘油（二甘醇、乙二醇与其他杂质）分离度、重复进样精密度,有关物质控制,有关物质薄层色谱法优化方法，分离度试验和灵敏度试验例1：

司坦唑醇与美雄诺龙分离度例2：

苏氨酸（其他氨基酸）供试品溶液（10mg/ml）对照溶液（0.05mg/ml）灵敏度测试溶液（0.02mg/ml）混合对照品溶液（苏氨酸和脯氨酸）分离度规定：

灵敏度测试溶液应显一个明显斑点，混合对照品溶液中应显两个清晰分离的斑点，供试品溶液除主斑点外所显杂质斑点的个数不得超过1个，其颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更深（0.5%）。

原料药有关物质的分析方法,建立方法应采用几种不同的分离方法或不同测试条件，以便对比结果，选择较佳的方法。

应考虑方法普遍适用性，所使用的仪器和试剂易于获得特殊试剂应在质量标准中说明。

异构体的检测,异构体的定义：

异构体是指化学式相同而结构不同的化合物。

异构体的化学组成虽然相同，由于其化学机构（即原子在空间排列的方式）不同，使它们的物理、化学性质或毒性有可能存在很大差异。

异构体的分类-构造异构体（结构异构体）如：

（碳）链异构、位置异构和官能团异构-立体异构体（构型异构体）如：

顺反异构和旋光异构,异构体的检测,立体异构体在药用性能上存在的几种情况药物的药作用完全或主要由其中的一个对映体产生。

如S-萘普生的镇痛作用比其R异构体强35倍。

两个对映体具有完全相反的药理作用。

如新型苯哌啶类镇痛药哌西那朵的右旋异构体为阿片受体的激动剂，而其左旋体则为阿片受体的拮抗剂。

一个对映体有严重的毒副不良反应。

如驱虫药四咪唑的呕吐不良反应即由其右族体产生，镇咳药美沙芬的成瘾性主要由其左旋体产。

两个对映体的药理作用不同，但合并用药有利。

如降压药萘必洛尔的右旋体为-受体阻滞剂，而左旋体能降低外周血管的阻力，并对心脏有保护作用。

异构体的检测,异构体研究中出现的问题：

比旋度的控制：

比旋度和旋光度的区别及各自的限度。

光学异构体的控制：

液相方法中应注意的问题，包括：

色谱柱，系统适用性试验要求，方法学验证。

制剂中异构体的控制：

要考察是制剂中是否有转换的可能。

制剂有关物质控制的关注点,降解产物原料药杂质谱与制剂杂质谱差异原研产品与仿制产品的杂质谱差异活性成分与辅料、其他有效成分（复方制剂）的相互作用活性成分与包材的相互作用（如浸出物）影响因素、加速及长期稳定性数据,不同原料药之间的杂质谱比较,原料药杂质谱与制剂杂质谱差异,三、分析方法学的验证与评估,分析方法验证的目的分析方法验证的内容分析方法验证的评估,药品质量标准分析方法验证指导原则收载于中国药典2010版二部附录-A（参考ICH的相关规定）药品质量标准分析方法验证的目的是证明采用的方法适合于相应检测要求。

方法验证在分析方法建立过程中具有重要的作用，并成为质量研究和质量控制的组成部分。

只有经过验证的分析方法才能用于控制药品质量。

方法验证是制订质量标准的基础。

方法验证是药物研究过程中的重要内容。

前言,机械与严谨局部与整体八股格式与融会贯通应试教育与素质教育,根据检测项目的要求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法能否符合检测项目设立的要求。

判断所采用的分析方法是否科学、合理，是否能有效控制药品的内在质量。

对分析方法进行总体的评价,分析方法验证的目的,提供分析方法科学的、综合的能力情况供试品、对照品和试剂的配制和制备；仪器的使用参数；测定过程标准曲线的绘制；计算公式的使用等信息，方法的准确度和精密度、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性等。

分析方法验证的内容,1、准确度；2、精密度重复性中间精密度重现性3、专属性；4、检测限；5、定量限；6、线性；7、范围；8、耐用性。

分析方法验证的内容,1、检测的类型2、采用的技术3、检测方法,视具体方法拟订验证的内容,检验项目和验证内容,已有重现性验证，不需验证中间精密度。

如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充。

视具体情况予以验证。

准确度：

指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，药物已知杂质的准确性一般以回收率（%）表示。

回收率试验：

原料：

要考察主成分和其他杂质的影响程度。

制剂：

在考察主成分和其他杂质的影响程度的同时，还要考察辅料的影响。

难溶性药物应注意提取率的考核。

分析方法验证的内容及评估,回收率的做法和评估,做法：

将一定量杂质加到原料或制剂中，制成高、中、低三个浓度（在线性覆盖的范围内），每个剂量取三份样品，按拟定方法测定回收率（注意扣除本底）。

评估：

根据精密度的考核情况和回收率的数据综合评价主成分，辅料、其他有关物质以及方法本身对测定结果影响情况。

根据回收率数据和9份数据的RSD值进行评估,分析方法验证的内容及评估,精密度：

指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。

精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。

重复性：

在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度。

中间精密度：

在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度重现性：

在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度,精密度的做法和评估,按正式质量标准操作，以文字稿为准。

评估：

计算测定的相对标准偏差进行评估。

误差来源：

供试品溶液的配制方法（称样和提取）测定方法的误差杂质峰的响应大小杂质峰的形态杂质峰的限度,分析方法验证的内容及评估,线性：

指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。

应在规定的范围内测定线性关系。

制备一系列供试样品，至少5份。

以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。

必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算。

范围：

指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。

范围应根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度结果和要求确定。

分析方法验证的内容及评估,检测限：

指试样中被测物能被检测出的最低量。

杂质检查方法应通过测试确定方法的检测限。

常用的方法如下。

非仪器分析目视法：

用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。

信噪比法：

用于能显示基线噪音的分析方法，即把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。

一般以信噪比为3:

1或2:

1时相应浓度或注入仪器的量确定检测限。

CompanyLogo,供试品溶液的配制,标准溶液的最佳显色量,限度的确定,无机杂质的控制,1,3,2,无机杂质限度试验计算方法,主要参数：

限度、取样量（W）、对照溶液浓度（C）和对照溶液用量（V）。

公式C（g/ml）V（ml）限度=100%W（g）,信噪比法,计算方式：

空白基线的确定，应在杂质峰出峰位置附近，通过测量峰谷间的距离进行测量。

样品应逐步稀释，与空白进行比较，计算即得。

分析方法验证的内容及评估,定量限：

指试样中被测物能被定量测定的最低量，其测定结果应具一定准确度和精密度。

杂质和降解产物用定量测定方法研究时，应确定定量限。

常用信噪比法确定定量限。

一般以信噪比为10:

1时相应的浓度或注入仪器的量确定定量限。

检测限和定量限所给出的信息,灵敏度供试品溶液浓度的设计是否合理是否要增加灵敏度试验是否要忽略某些杂质峰,分析方法验证的内容及评估,专属性：

指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的方法能正确测定出被测物的特性。

如方法不够专属，应采用多个方法予以补充，以获得对待测物质所需的分离能力。

在与原料的方法学的基础上，重点考察并且排除辅料的干扰。

专属性试验应该考虑的因素,工艺杂质：

起始原料、中间体、粗品参考标准中提到的已知杂质降解杂质：

降解方式：

酸、碱、氧化、高温、高湿、光降解等降解程度：

主峰减少10%（应做预实验确认）,专属性试验的评估,一、考察主成分与杂质的分离。

二、杂质间的分离情况，特别是已知杂质的分离情况。

三、考察杂质的检测能力，是否能真实的检出杂质。

关于物料平衡的概念,百度中的名词解释：

系指在药品生产过程中,同批产品的产量和数量所应保持的平衡程度。

如有显著误差,必须查明原因,确认无潜在质量事故后,方可按正常事故处理,物料平衡是产品质量的检验性指标。

在液相检测有关物质时的物料平衡：

应该是指经过各种破坏试验后，主成分峰面积的减少与杂质峰面积的增加之间的平衡，以确定检测方法的准确性。

某制剂的加速试验数据,分析方法验证的内容及评估,耐用性：

指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为把方法用于常规检验提供依据。

开始研究分析方法时就应考虑其耐用性。

如果测试条件要求苛刻，则应在方法中写明。

内容包括：

供试液稳定性、样品处理方式；色谱法中流动相比例、流动相离子浓度、pH值、不同品牌或批号的同类色谱柱、柱温、流速等。

供试品溶液配制的耐用性评估,供试品溶液的稳定性评估杂质的成长程度供试品配制过程的稳定性各种提取、加热、超声方式对杂质的检测的影响评估杂质的成长程度,色谱法的耐用性,流动相比例流动相离子浓度pH值不同品牌或批号的同类色谱柱柱温流速,耐用性的评估,一、杂质与主成分的分离度二、已知杂质与相邻杂质的分离度三、杂质的变化杂质个数的变化单个杂质量的变化杂质总量的变化,谢谢大家！

联系方式：

邮箱：

电话：

010-83226198,