新冠核酸检测技术PCR实验室质量体系文件.doc

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****医院

临床检验中心

临床基因扩增实验室

管理程序

标准操作程序（SOP）

起草人：

批准人：

生效日期：

年月日

目录

临床基因扩增实验室的设置 3

临床基因扩增实验室内部管理规章 11

临床基因扩增实验室人员管理、配置及培训 15

临床基因扩增实验室的设施和环境 18

临床基因扩增实验室清洁制度规章 19

临床基因扩增实验室仪器设备管理规章 21

Roche480II实时荧光定量PCR仪操作规程、维护方法、校准（SOP-1）未修改 26

Finnpipette可调式移液器的使用与维护标准操作（SOP-2） 35

Finnpipette可调式移液器校准标准管理程序（SOP-3） 39

温度计及湿温度计的校正标准管理程序（SOP-4） 40

离心机使用与维护标准操作程序（SOP-5） 41

超净工作台使用与维护标准操作程序（SOP-6） 45

恒温水浴箱使用、维护与校正（SOP-7） 46

旋涡振荡器使用与维护标准操作程序（SOP-8） 49

冰箱的使用与维护标准操作程序（SOP-9） 50

可移动紫外灯标准操作程序（SOP-10） 52

仪器故障时标记、放置标准操作程序（SOP-11） 53

仪器设备发生故障时的应急处理程序（SOP-12） 54

临床标本的收集管理标准操作程序（SOP-13） 57

检验标本的验收和保存标准操作程序（SOP-14） 58

样本编号的标准操作程序（SOP-15） 63

PCR标本管理标准操作程序（SOP-16） 65

标本前处理标准操作程序（SOP-17） 67

核酸扩增及产物分析检测标准操作程序（SOP-18） 68

乙型肝炎病毒基因扩增检测标准操作程序（SOP-19） 70

基因扩增检测实验结果分析标准操作程序（SOP-20） 75

实验结果有效性判断标准操作程序（SOP-21） 78

室内质量控制标准操作程序（SOP-22） 79

实验室试剂耗材购买、验收和贮存的标准操作程序（SOP-23） 85

试剂质检标准操作程序（SOP-24） 91

实验室耗材质检标准操作程序（SOP-25） 94

手套使用及左右手分开的原则（SOP-26） 97

实验室化学试剂贮存使用、废弃物处理及生物防护（SOP-27） 98

抱怨的处理程序（SOP-28） 101

实验室记录管理规章标准操作程序（SOP-29） 105

检验报告单管理标准操作程序（SOP-30） 108

实验室台面摆放顺序程序（SOP-31） 112

实验室常用溶液配置标准操作程序（SOP-32） 113

****医院临床检验中心SOP文件

实验室操作规程文件编号：

版本：

2013第三版生效日期：

2013/01/01

临床基因扩增实验室设置标准操作程序第11页共114页

临床基因扩增实验室的设置

1目的：

依照实验室设置规范实现核酸扩增荧光检测实验室配置合理，以保证实验工作健康有序及实验结果的可靠性

2范围：

临床基因扩增实验室及相关工作人员，并明确各项规章制度

3操作人：

****

4实验室设置规章：

4.1依据：

本实验室按《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发[2002]10号）中临床基因扩增检验实验室基本设置标准结合本实验室的条件进行设置，并严格按照《临床基因扩增检验实验室工作规范》（卫检字2002第8号）的要求开展临床基因扩增工作（拟开展基因扩增检验项目见附表1）

4.2实验室设置:

4.2.1实验室主要由试剂储存和准备区（PCR-Ⅰ）、标本制备区（PCR-Ⅱ）、PCR扩增及产物分析区（PCR-Ⅲ）三个工作室组成。

这三区各自独立，每个区设有缓冲间。

其布局见实验室平面图（见附图1）。

4.2.2设立各区的门牌，分别是：

“试剂储存和准备区（PCR-Ⅰ）”、“标本制备区（PCR-Ⅱ）”、“PCR扩增及产物分析区（PCR-Ⅲ）”，并在各区门上贴有“非本室工作人员不得进入”标记。

4.2.3建立实验室内务管理，并放在进入实验室的明显位置（如置于缓冲区的墙上；内务管理应有进入实验的工作流程、进入实验室的要求、实验前的准备及清洁等）。

4.2.4三个工作区各配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服，并有明显的区分标识：

试剂准备区—蓝色，标本制备区—紫色，PCR扩增及产物分析区—黑色。

各区的实验物品不得混用（实验室主要设备一览表见表3）。

4.2.5进入各区的工作流程为：

试剂储存和准备区→标本制备区→PCR扩增及产物分析区。

4.2.6进入实验室必须更换有本室标识的工作服及清洁鞋套，工作人员离开某一工作区时，该区物品不得带出本区（包括工作服等）。

4.3各区实验设备及用品配置：

4.3.1试剂储存和准备区：

冰箱（2～8℃和-15℃）、可调式移液器（覆盖0.5～1000ul）、紫外消毒车、固定紫外线灯，混匀器，专用工作服，一次性用品（手套、带滤心的吸头、鞋套、吸水纸、耐高压处理的离心管），专用实验记录本及记号笔等。

4.3.2标本制备区：

冰箱（2～8℃和-15℃）、台式高速离心机、水浴锅、净化工作台、混匀器、可调式移液器（覆盖1～1000ul）、紫外消毒车、固定紫外线灯，专用工作服，一次性用品（手套、带滤心的吸头、鞋套、吸水纸、耐高压处理的离心管），专用实验记录本及记号笔等。

4.3.3PCR扩增及产物分析区：

Line-Gene全自动荧光定量PCR核酸扩增仪、紫外消毒车、固定紫外线灯，专用工作服，一次性用品（手套、鞋套、吸水纸等），专用实验记录本及记号笔等。

4.4实验室人员设置：

实验室人员配置：

我院PCR实验室配备有3名工作人员，其中1人具检验师职称，2人具主管检验师职称。

已全部经过安徽省临床检验中心培训，并取得培训合格证（实验室工作人员一览表见表2）。

起草人

批准人

生效日期

年月日

附表1拟开展临床基因扩增检验项目一览表

项目

方法

备注

HBVDNA

PCR荧光实时扩增

Line-Gene扩增仪

表2临床基因扩增检验实验室工作人员一览表

序号

姓名

性别

年龄

学历

职务

职称

所学专业

毕业时间

从事本

专业时间

培训合

格证号

备注

1

×××

√

∥

中专

∝

主管

检验

82．7

42

2002000**

2

×××

√

∥

中专

∞

主管

检验

81．7

44

2003000**

3

×××

√

∥

中专

∫

检验师

检验

95．7

31

2003000**

表3临床基因扩增检验实验室仪器设备一览表

序号

仪器设备名称

生产厂家

仪器型号

仪器序号

接收日期

接收状态

启用日期

放置地点

接受人签字

备注

1

紫外线消毒车

江阴市光电仪器有限公司

ZXC

Ⅰ类B型

2003-4-18

全新

2002-5-9

试剂准备区

2

美菱电冰箱

××美菱股份有限公司

BCD-109

62417

2003-4-19

全新

2003-4-19

试剂准备区

3

可调式移液器

上海雷勃分析仪器有限公司

4500120

Y55777

2003-4-19

全新

2003-5-9

试剂准备区

4

可调式移液器

上海雷勃分析仪器有限公司

4500020

Y50041

2003-4-19

全新

2003-5-9

试剂准备区

5

可调式移液器

上海雷勃分析仪器有限公司

4500100

Y45849

2003-4-19

全新

2003-5-9

试剂准备区

6

可调式移液器

上海雷勃分析仪器有限公司

4500090

Y56734

2003-4-19

全新

2003-5-9

试剂准备区

7

光学读数分析天平

湘仪天平仪器厂

TG328

2003-5-8

调

拨

2003-5-8

试剂准备区

8

无菌净化工作台

浙江大学净化设备厂

GEM-SH

GEM-SH-01

2003-4-16

全新

2003-5-9

样本准

备区

9

紫外线消毒车

江阴市光电仪器有限公司械厂

ZXC

Ⅰ类B型

2003-4-18

全新

2003-5-9

样本准备区

10

高速离心机

上海安亭科学仪器厂

TGL-16B

17

2003-3-1

全新

2003-3-19

样本准备区

11

美菱电冰箱

××美菱股份有限公司

BCD-109

62422

2003-4-19

全新

2003-4-19

样本准备区

12

三用电热恒温水浴箱

上海跃进医疗器械厂

S.HH.W21.420

01006

2003-2-15

全新

2003-3-30

样本准备区

13

微型混匀器

上海医科大学仪器厂

XW-80A

Q/DAALC2-2000

2003-2-15

全新

2003-3-30

样本准备区

14

可调式移液器

上海雷勃分析仪器有限公司

4500020

Y50040

2003-4-19

全新

2003-5-9

样本准备区

15

可调式移液器

上海雷勃分析仪器有限公司

4500100

Y45850

2003-4-19

全新

2003-5-9

样本准备区

16

可调式移液器

上海雷勃分析仪器有限公司

4500090

Y56733

2003-4-19

全新

2003-5-9

样本准备区

17

可调式移液器

上海雷勃分析仪器有限公司

4500050

F59968

2003-4-19

全新

2003-5-9

样本准备区

18

Line-

Gene扩增仪

杭州Dahe

Thermo-

Magnetic

有限公司

FGD-33A

BYQ6079-244

2003-4-16

全新

2003-5-9

PCR扩增区

19

紫外线消毒车

江阴市光电仪器有限公司械厂

ZXC

Ⅰ类B型

2003-4-19

全新

2003-5-9

PCR扩增区

图1基因扩增实验室平面图

****医院临床基因扩增实验室

****医院临床基因扩增实验室-114-

****医院临床检验中心SOP文件

实验室操作规程文件编号：

版本：

2013第三版生效日期：

2013/01/01

临床基因扩增实验室内部管理规章标准操作程序第15页共114页

临床基因扩增实验室内部管理规章

1目的：

依照实验室管理规范实现全面质量管理，实现核酸扩增荧光检测实验室有专人负责，以保证实验工作健康有序及实验结果的可靠性

2范围：

临床基因扩增实验室及相关工作人员，并明确了各项规章制度

3操作人：

**

4规章：

4.1实验室内务管理规章：

4.1.1标本的接收设在三个区以外的区域（与生化专用标本接收区合用），在标本接收时同时进行以下记录：

在标本与化验单上同时进行标本的唯一性编号，在标本接收登记本上记录患者的姓名、年龄，标本接收日期，标本的特性、状态，接收者签名。

经验收合格后接收的标本直接运送至标本制备区。

4.1.2实验过程中须严格遵守实验的工作流程：

试剂准备区→标本制备区→扩增及产物分析区的唯一流向制度。

4.1.3开启实验区前逐一打开设在缓冲区外墙上的紫外线灯开关（控制实验区的固定紫外灯），照射30分钟。

4.1.4工作开始前，在缓冲区换好本实验区工作衣，戴上一次性口罩、帽子，套上一次鞋套，关闭紫外灯。

打开缓冲的排风装置，开启实验区门锁，工作时反锁隔离门。

4.1.5进行测定前的准备和工作记录（实验前的准备和工作记录见表4）：

a）记录冰箱温度、紫外线消毒时间；

b）消毒液、清洁液、75%酒精配制；

c）查看加样器、扩增仪、离心机、灭菌的吸头等是否在有效期限内；

d）校正水浴锅温度；

e）试剂准备：

试剂是否在有效期范围内，根据标本量确定准备模板的数量及阴阳性对照数量；

4.1.6实验过程的记录（见SOP文件）。

4.1.7检测结果的记录（见SOP文件）。

4.1.8实验完成后实验室清洁消毒处理及记录：

实验台面、加样器、离心机、超净工作台、振荡器、扩增仪、实验室空间、实验室地面等（详见实验室清洁制度）。

4.1.9工作结束，内务整理完毕，关闭排风装置及实验区，加锁。

4.1.10唯一流向制度同样运用于实验室物流管理及内务管理。

4.2质量控制规章：

4.2.1制定各种SOP文件并严格执行。

4.2.2参加室间质评。

4.2.3开展室内质控工作。

4.3人员行为规章：

4.3.1要有强烈的时间观念，按时上下班，不迟到、早退。

4.3.2实验室人员须保持仪表整洁。

4.3.3严格遵守实验操作规范，不得随意更改操作步骤。

4.3.4实验室技术人员必须严格按照PCR实验室操作程序进行，包括实验室擦洗、台面消毒，离心管、吸头的无菌灭活准备，仪器使用和废弃物的处理等。

4.3.5进入实验室工作人员必须遵守实验室唯一流向制度，无必要尽量减少进入实验室的次数。

4.3.6实验室内严禁饮食、吸烟。

4.3.7非本室工作人员未经允许不得进入实验室。

4.3.8语言有礼貌、举止讲文明，对待来访病人或电话应和蔼礼貌，解释明确耐心，不得推脱或生硬回绝。

4.3.9晚上下班要关门、窗，检查空调和仪器的电源是否关闭。

4.4仪器管理规章：

4.4.1实验人员必须熟悉仪器性能方允许操作，严格遵守操作规程。

4.4.2所有仪器（如PCR扩增仪）须有专人负责，有使用维修记录。

4.4.3仪器使用前必须检查是否完好，一旦发现问题，及时向负责人反映，不得擅自拆装。

4.4.4注意保持仪器卫生整洁，严禁在室内抽烟，吃零食，非仪器操作员应尽量少入。

4.4.5每天了解仪器运转情况，负责仪器的整洁，安全，检查电源，水龙头。

4.4.6定期校正和维护PCR仪、离心机、水浴箱、冰箱等仪器、设备，并建立仪器质量认证档案。

4.5试剂管理规章：

4.5.1实验室根据需要，定期提交试剂申购单，并做到及时盘存清点，入库做到心中有数。

4.5.2所购试剂一律按试剂和耗材的SOP进行，并做到来源渠道正规，质量保证。

4.5.3实验室对试剂库存定期检查，不使用过期变质的试剂。

4.5.4自配试剂须经严格校正后方可使用。

4.5.5试剂的保存应严格按照规定存放，确保有效期内能有效使用，杜绝浪费现象。

4.5.6易燃易爆试剂应分开存放，远离火源和电源。

4.5.7试剂外借一律须经负责人同意方可。

5．本制度的变动程序：

本制度的变动，可由任一使用该文件的工作人员向主管负责人提出，主管负责人则召集与本制度相关的所有人员进行讨论，根据讨论结果是否通过，如通过则公布实施。

起草人

批准人

生效日期

年月日

表4实验前的准备及工作记录 日期：

年月日

条目

工作记录

责任人（签名）

缓冲区处在排风状态

冰箱温度记录

实验室紫外线照射30分钟

更换新配制的消毒液

清洁液配制

实验台面的消毒

10%84液擦洗

75%乙醇清洁

加样器

在有效期内

扩增仪

在有效期内

离心机

在有效期内

灭菌的吸头

在有效期内

水浴锅温度校正

在有效期内

试剂：

在有效期内

所用模板数量

所用阳性对照

所用阴性对照

表4实验前的准备及工作记录 日期：

年月日

条目

工作记录

责任人（签名）

缓冲区处在排风状态

冰箱温度记录

实验室紫外线照射30分钟

更换新配制的消毒液

清洁液配制

实验台面的消毒

10%84液擦洗

75%乙醇清洁

加样器

在有效期内

扩增仪

在有效期内

离心机

在有效期内

灭菌的吸头

在有效期内

水浴锅温度校正

在有效期内

试剂：

在有效期内

所用模板数量

所用阳性对照

所用阴性对照

****医院临床检验中心SOP文件

实验室操作规程文件编号：

版本：

2013第三版生效日期：

2013/01/01

临床基因扩增实验室人员管理、配置及培训标准操作程序第18页共114页

临床基因扩增实验室人员管理、配置及培训

1．目的：

保证实验室具备开展该项实验的能力。

2．适用范围：

临床核酸扩增荧光检测实验人员。

3．负责人：

**

4．内容：

4.1人员要求：

4.1.1由于PCR检测干扰因素较多，结果分析复杂。

因此，PCR实验室工作人员应具备掌握相关学科知识及应用能力（实验技能、分析能力、沟通能力等）；应具备较广泛的分子生物知识。

4.1.2PCR实验室工作人员应取得上岗培训合格证书，临床PCR检验过程须在具培训合格证书的技术人员监督指导下完成，检验报告须由具培训合格证书的技术人员审核签。

4.1.3工作人员上岗前必须学习掌握PCR实验管理文件及要求，并由实验室主任核查。

4.2人员配置：

4.2.1根据卫生部临检中心对实验室人员的在求选择人员；

4.2.2我科PCR实验室配备3名工作人员（PCR实验室工作人员一览见表2）；

4.2.3实验室主任负责实验室全面管理、解决技术疑难及与临床沟通、组织人员参加培训，室主任不在岗时，应指定代理人负责。

4.2.3资深检验技师及青年技师负责实验室技术管理及临床标本的检验。

4.3人员管理：

a）严格遵守实验室内务规章制度；

b）严格执行年度考核制度：

1）日常工作质量的评价；2）室内质控的评测；3）室间质控的评测；4）年度考试；5）在日常抱怨工作中的应变能力。

c）科年度奖励制度：

1）参加室间质评优秀；2）年度在CN级刊物上在论文发表；

3）在本地刊物有多篇论文发表；4）考试成绩优秀；5）受到有关部门或群众特别嘉奖。

d）科主任建立实验室工作人员业绩档案。

4.4人员培训计划：

4.4.1本室现有人员已参加安徽省临床检验中心基因扩增实验室人员培训班，并取得上岗证。

见附件1

4.4.2自学及考核：

室主任督促指导实验室人员通过继续教育或自学提高业务素质。

工作人员根据自身情况，每年完成一篇学术论文、综述或经验总结提交室主任，室主任以此作为年度考核技术人员的一项依据。

4.4.3室主任每年必须参加临床检验中心的PCR质控总结会议。

4.4.4室成员每年至少有一个月脱产的理论和技能的学习。

4.4.5经常同其它PCR室的同道进行理论和技术交流。

4.4.6订阅与分子生物学及PCR技术有关的文献、杂志。

4.4.7每年底对下一年的人员培训做出具体安排。

4.4.8实验室主任对技术人员的技术档案每两年修正补充一次。

5.该程序的变动程序：

本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：

检验科主任、室技术负责人

注:

所引用表格:

1.实验室工作人员一览表见表2

2.实验室工作人员档案记录见表5

起草人

批准人

生效日期

年月日

表5临床基因扩增检验实验室工作人员档案记录表

姓名

性别

年龄

学历

职务

职称

毕业学校及所学专业

毕业

时间

从事本专

业时间

培训合

格证号

工作业绩（技能、经历、发表论文及科研成果）：

****医院临床检验中心SOP文件

实验室操作规程文件编号：

版本：

2013第三版生效日期：

2013/01/01

临床基因扩增实验室设施和环境标准操作程序第19页共114页

临床基因扩增实验室的设施和环境

1目的保证环境良好，工作有序，结果可靠

2范围PCR实验室及相关工作人员

3操作人****

4规章：

4.1实验室分三个区：

试剂储存和准备区（PCR-Ⅰ）、标本制备区（PCR-Ⅱ）、PCR扩增及产物分析区（PCR-Ⅲ）。

进入各区按照单一方向进行，即试剂储存和准备区（PCR-Ⅰ）——标本制备区（PCR-Ⅱ）——PCR扩增及产物分析区（PCR-Ⅲ）。

各区及设备、物品有明确标识，严禁混用。

4.2每个实验区的门上有本区的标识及非本室人员不得进入字样。

4.3每个实验区配有温度调控设备、温湿度计，可移动及固定紫外灯。

4.4PCR扩增仪配有UPS多功能稳压电源。

4.5工作人员在操作过程中严格遵守实验室内务管理，严格执行操作程序。

4.6实验室人员进入本工作区时须穿该区具有标识专用工作服，同时配备其它保护性装备如手套、口罩、帽子、鞋套并遵守实验室的唯一流向制度。

4.7严禁将本区的物品和工作服带离本区，以防扩增产物污染扩增前区。

4.8在实验过程中使用过的废弃枪头等材料应立即浸泡于装有84消毒液的容器中，过夜后再作为有污染的物品由专人统一处理。

。

4.9标本盖子的开闭及移取应在超净台内进行，操作时应，关闭抽风机，操作时小心谨慎，防止液体外溅。

4.10每天实验开始前，打开紫外灯及紫外消毒车照射30分钟。

4.11工作结束后，对该区的工作台用84消毒液消毒30分钟后，再用该区专