长春中医药大学13734.docx
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长春中医药大学13734
长春中医药大学
本科生毕业论文
汪博
年级：
03级
专业：
中药学
班级：
二班
学号：
23号
二OO七年六月
韭菜籽的脂溶性成分研究
汪博
指导教师：
姜大成
实习单位：
长春中医药大学研发中心
论文提交日期：
2007年6月7日
论文答辩日期：
2007年6月18日
答辩组组长：
答辩组成员：
本科生毕业论文诚信承诺书
毕业生论文题目
韭菜籽的脂溶性成分研究
学生姓名
汪博
学号
23号
专业
中药学
班级
二班
学生承诺:
我承诺在毕业设计（论文）活动中遵守学校有关规定，恪守学术规范，在本人的毕业设计（论文）中未剽窃、抄袭他人的学术观点、思想和成果，未篡改实验数据，如有违规行为发生，我愿承担一切责任，接受学校的处理。
学生：
2007年月日
目录
摘要1
1.引言3
2.实验部分3
2.1.实验仪器、试药与材料3
2.1.1实验仪器与试药3
2.1.2实验材料4
2.2．实验内容4
2.2.1韭菜籽化学成分系统预试4
2.2.2韭菜籽化学成分的提取5
2.2.3韭菜籽中脂肪酸的分析6
2.2.4韭菜籽石油醚提取物的分离8
3.实验结果11
4.小结与讨论12
4.1小结12
4.2讨论12
参考文献13
致谢14
摘要
目的：
主要是对韭菜籽的化学成分进行研究，尤其是脂溶性成分的研究。
本研究旨在揭示韭菜籽中脂溶性化学成分，为进一步研究韭菜籽的化学成分奠定基础，亦为韭菜籽的深入开发及临床应用，提供一定的科学依据。
方法：
对韭菜籽的化学成分进行系统预试，初步确定其所含的大类化学成分。
根据系统预试结果,采取系统溶剂法，以石油醚，乙醚，乙醇，水为溶剂，对韭菜籽的化学成分进行提取。
对石油醚提取部分进行研究，采取柱色谱、薄层色谱、GC/MS等方法，对该部分进行分离测定。
结果：
将韭菜籽石油醚提取物甲酯化后进行GC/MS分析，共检测出9种脂肪酸和3种酯类化合物，其中有3种脂肪酸未见报道；对韭菜籽石油醚提取物皂化后的乙醚萃取物进行分离，得到3种白色粉末。
结论：
系统预试结果表明，韭菜籽中可能含有氨基酸、蛋白质、皂苷、黄酮、生物碱、油脂等化学成分；通过GC/MS分析确定韭菜籽中含有至少9种脂肪酸和多种酯类。
关键词：
韭菜籽脂溶性成分研究脂肪酸棕榈酸9-十八碳烯酸
Abstract
Objective:
Mainlyisresearchestotheleekseedchemicalcomposition,inparticularfatsolubleingredient.Itresearchpurposethatisrevealtheleekseedfatsolublecomposition.Furthermore,laidthegroundworkforfuturestudiesthatleekseedchemicalcomposition.Method:
Leekseedchemicalcompositionwaspretestedbysystemway,determineditscontainsthegeneralingredient.Accordingtothepretestresult,adoptedthegradientsolventextraction.Thesolventincludedpetroleumehter,aether,ethylalcohol,andwater.ThepetroleumetherextractionswasstudiedbyLLC,TLC,GC/MSintheExperiment.Result:
CarriesontheGC/MSanalysisafterthefragrant-floweredleekseedbenzenewithdrawingmethylester,altogetherexamines9kindoffattyacidsand3kindofesterscompound,including3kindoffattyacidsnottoseethereport;Carriesontheseparationafterthefragrant-floweredleekseedbenzenewithdrawingsaponificationetherextract,obtains3kindofwhitepowder.Conclusion:
leekseedoilmethyletherextractconductedafterGC/MSanalysis.Atotalofninespeciesofthreekindsoffattyacidsandesters;rightleekseedoilextractsaponificationofetherextractswereseparated,Threespeciesofwhitepowder,itmaymonomercompounds.
Keywords：
leekseedfat-solubleconstituentsfattyacidspalmiticacid,9-octadecenoicacid,
1.引言
韭菜籽收载于2005年版《中国药典》，其来源为百合科植物韭菜AlliumtuberosumRottl.的干燥成熟种子[1]。
该药材始载于《名医别录》，列为中品，苏颂谓：
“案许宋说文，韭字象叶出地上形，一种而久生，故谓之韭，一岁三、四割，其根不伤，至冬壅培之，先春复生”。
李时珍谓：
“韭从生丰本，长叶青翠，可以根分，可以子种。
……八月开花成丛，……九月收子，其子黑色耳扁，须风处阴干”。
根据描述和附图，现今所用韭菜与历代本草所载相同[2]。
韭菜籽原产亚洲东南部，我国各地均有栽培或野生[3]，以河北、山西、吉林、江苏、山东、安徽、河南等地产量较大。
其性温，味微甘，具有补肾阳、暖腰膝、壮阳固精之功效，临床上主治阳痿遗精、腰膝酸软、冷痛、遗尿、尿频、白浊带下等症[4]。
另有报道,韭菜籽还有抗衰老、抗突变、杀虫、抗菌等作用，用于治疗持续性呃逆[5，6]。
由于其疗效显著，在临床上被广泛应用。
因此，市场上对韭菜籽的需求量也在日益增加，且韭菜籽的资源广泛，吉林省产量较大，如能对其进行系统深入的研究，必将会产生广阔的经济前景。
为了更好地开发利用这一药材资源，我们对现有的文献报道进行了分析、整理如下：
目前，关于韭菜籽的研究多集中在药理作用方面[5，6]，而关于其化学成分研究则较少，仅在脂肪酸、氨基酸和微量元素方面有所研究[7,8]，尤其是对其药效物质基础（有效成分）的研究尚未见报道，国家药典也没有相关的质量评价标准。
故本课题将对韭菜籽的化学成分进行深入研究，全面地揭示韭菜籽的化学成分，并结合其药理活性，寻找药效物质基础（有效成分）。
本研究只是对该课题中韭菜籽的脂溶性成分进行系统研究，为寻找韭菜籽的有效成分奠定了基础。
2.实验部分
2.1实验仪器、试药与材料
2.1.1实验仪器与试药
分析天平TG328A（s）型（上海精密科学仪器有限公司）；旋转蒸发器RE—52AA（上海亚荣生化仪器厂）；SHB—ⅢS循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；pHS-25数显酸度计；TRACEMS气相色谱-质谱联用仪。
碘化铋钾、镁粉、三氯化铝、三氯化铁、溴甲酚氯等药品，石油醚（沸程：
60-90℃）、乙醚、乙醇、甲醇、硫酸等所用试剂均为分析纯。
2.1.2实验材料
实验用韭菜籽购于吉林省宏检医药药材有限公司，经姜大成教授鉴定为正品。
硅胶为薄层层析用（G60型化学纯，青岛海洋化工厂，批号：
050608）、柱层析用（100-200目试剂纯，青岛海洋化工厂，批号：
0061541）
2.2实验内容
2.2.1韭菜籽化学成分系统预试
参照有关文献，对韭菜籽化学成分进行系统预试，结果见表1。
表1 韭菜籽化学成分系统预试的内容及结果
检查项
试验名称或试剂
结果
氨基酸
茚三酮试剂
显蓝紫色
蛋白质
双缩脲反应（Biuret反应）
阳性
加热沉淀试验
阳性
皂苷
泡沫试验
产生持久性蜂窝状泡沫
溶血试验
阳性
糖类
α-萘酚试验
阴性
酚醛缩合反应
阴性
菲林氏实验
阴性
有机酸
溴甲酚绿试剂
兰色背景上呈黄色斑点
鞣质
1%三氯化铁试剂
阴性
明胶试剂
阴性
黄酮
1%三氯化铝试剂
阳性
盐酸-镁粉反应
阳性
荧光反应：
阳性
三氯化铁反应
阳性
酚类
1%三氯化铁试剂
阳性
蒽醌
10%KOH液
阴性
0.5%醋酸镁试剂
阴性
氨熏
阴性
生物碱
碘化铋钾试剂
橙黄色沉淀
硅钨酸试剂
产生白色的沉淀
苦味酸试剂
黄色沉淀
香豆素及萜类内酯
开环与闭环反应
液体比没有加热前清亮，加酸酸化后又复浑浊
氨基安替比林-铁氰化钾反应
阴性
羟胺反应
阴性
异羟肟酸铁反应：
阴性
强心苷
Kedde试剂
阴性
三氯乙酸试剂
阴性
苦味酸试剂
阴性
baljet反应：
阴性
legal试剂：
阴性
克尔克林氏反应
阴性
甾萜类
醋酐-浓硫酸试验（L-B）反应
阴性
25%磷钼酸试剂
阴性
salkouski反应：
阴性
tschugaeff反应：
阴性
油脂
提取液滴于滤纸上，加热
不挥发
根据系统预试的结果，初步判断韭菜籽中可能含有氨基酸、蛋白质、皂苷、黄酮、生物碱、油脂等化学成分。
2.2.2韭菜籽化学成分的提取
根据化学成分预试结果，并参考关于韭菜籽化学成分的相关资料[7,8]，确定了以石油醚、乙醚、乙醇、水为提取溶剂。
将韭菜籽药材粉碎，过40目筛，取其药材粉末2㎏，依次用石油醚（沸程60-90℃）、乙醚、乙醇、水提取，每次加入4倍量的溶剂，置水浴上回流提取，使溶液保持微沸，提取3次，每次3h。
冷却，过滤，滤液置旋转蒸发仪上回收溶剂，合并各溶剂的提取物，药渣弃去。
具体过程见下述工艺流程图。
韭菜籽粉末（2kg）
加石油醚提取三次（3、2、2h）
每次加入石油醚8000ml
石油醚提取物药渣
回收石油醚挥散溶剂，再加入乙醚提取三次（3、2、2h）每次加入乙醚8000ml
石油醚浸出物
（347.51g） 乙醚提取物药渣
回收乙醚挥尽溶剂，再加入乙醇提取三次（3、2、2h）每次加入乙醇8000ml
乙醚浸出物
（134.07g）乙醇提取物药渣
回收乙醇挥尽溶剂，再加入水提取三次（3、2、2h）每次加水8000ml
乙醇浸出物蒸干溶剂
（207.92g）水提物（87.31g）药渣（弃去）
2.2.3韭菜籽中脂肪酸的分析
采用气相色谱与质谱联用法，对韭菜籽的石油醚提取物，进行脂肪酸种类及其含量分析。
2.2.3.1样品处理
取韭菜籽的石油醚提取物2.50g，将样品，氢氧化钾，95%乙醇（w:
w:
v=5:
3:
9）混合，于沸水浴上回流皂化2h，蒸去乙醇，用20ml乙醚溶解，并加适量水（30ml），用乙醚萃取3次，每次30ml；水层用盐酸调pH=2.00，再用乙醚萃取3次，每次30ml,合并醚提掖，以水洗至中性，用2g无水硫酸钠干燥过夜，回收乙醚得总脂肪酸。
准确称量，将总脂肪酸（w）-甲醇-浓硫酸（7:
20:
0.7）混合，于水浴回流3h（86℃），挥散甲醇至少量，加乙醚萃取3次，每次30ml，将萃取液水洗至中性，加无水硫酸钠干燥2g，过夜，回收乙醚，制得脂肪酸甲酯。
准确称量，配成适当浓度作为供试品溶液。
2.2.3.2测定条件
色谱条件：
色谱柱HP-25MOV-101石英毛细管柱；柱前压68.95kPa；柱温80℃到160℃按20℃/min、160℃到230℃按10℃/min程序升温；气化室温度230℃
质谱条件：
质量分析器为四极滤质器；EI源；质谱检测器温度210℃；接口温度230℃
2.2.3.3检测结果
共分析出十余种成分，与标准图谱库对照，鉴定出9种脂肪酸及3种酯类，具体名称及含量见表2，（见附图1-9）
表2韭菜籽石油醚提取物的GC/MS分析结果
种类
分子量
分子式
含量（%）
棕榈酸
286
C17H34O3
1.50
亚油酸
280
C18H32O2
38.03
油酸
282
C18H34O2
21.27
硬脂酸
270
C17H34O2
3.61
花生酸
312
C20H40O2
2.61
花生烯酸
304
C20H32O2
0.52
10-甲基-十七碳酸
283
C18H35O2
1.31
7，10-十八酸
279
C18H31O2
7.55
9-十八碳烯酸
281
C18H33O2
2.94
1，2-苯二甲酸二（2-甲基-丙基）酯
278
C16H22O4
3.44
2-噻吩乙酸，3-三癸酯
324
C19H32O2S
0.92
1，2-苯二甲酸丁酯，8-甲基壬酯
362
C22H34O4
2.77
2.2.4韭菜籽石油醚提取物的分离
在韭菜籽的石油醚提取物甲酯化过程中发现，皂化后的乙醚萃取液挥干溶剂后有白色粉末出现，对其进行薄层色谱检查，发现有三个明显的的斑点，具有一定的分离价值。
故采用柱色谱、薄层层析等方法，对该部分进行分离。
2.2.4.1样品的处理
将韭菜籽的石油醚提取物100g，氢氧化钾，95%乙醇（w:
w:
v=5:
3:
9）混合，于沸水浴上回流皂化2h，蒸去乙醇，用少量乙醚溶解，加适量水，用乙醚萃取数次，合并醚提液，回收乙醚得2.4g白色粉末，备用。
2.2.4.2柱层析条件的选择
取上述白色粉末少量，加乙醚溶解，利用薄层色谱方法，采用不同的展开剂寻找理想的洗脱剂，以5%磷钼酸乙醇溶液为显色剂，比较理想的洗脱条件是：
石油醚-乙酸乙酯＝28:
3，薄层色谱图见图1。
故选用上述溶剂系统为洗脱剂。
2
1
图1 薄层色谱图
1.皂化后乙醚萃取物；2.韭菜籽的石油醚提取物
展开剂：
石油醚-乙酸乙酯=28:
3
显色剂：
5%磷钼酸乙醇液
2.2.4.3装柱及柱处理
选用适宜的玻璃层析柱（60×1000mm），以硅胶（400.30g）为吸附剂，湿法装柱，用石油醚-乙酸乙酯=28:
3冲洗空柱。
2.2.4.4上样
取样品2.40g湿法上样，上盖少量硅胶及脱脂棉
2.2.4.5洗脱
用石油醚-乙酸乙酯=28:
3开始洗脱，每200ml为一个流分，第一个流分约200ml，编号为0号，以后顺延。
收集后回收溶剂至少量，然后做薄层色谱检查，根据薄层板上的斑点的Rf值及颜色,把相同的合并在一起。
2.2.4.6分离结果
经过一段时间的洗脱，共收集了96个流分，将各洗脱流分进行薄层色谱检查，根据检查结果，对其中斑点比较清晰，并且成分含量相对较高的流分进行了合并。
合并后的结果见表3。
表3 韭菜籽石油醚提取物柱层析色谱分离后主要合并流份号及组号
合并后流分编号
合并前流分
编号
形状
展开剂
薄层主要斑点
1
5-11
黄色液体
石油醚-乙酸乙酯（28:
3）
三个斑点
2
12-27
无色液体
石油醚-乙酸乙酯（28:
3）
两个斑点
3
28-34
白色粉末
石油醚-乙酸乙酯（28:
3）
一个清晰斑点
4
35-45
白色粉末
石油醚-乙酸乙酯（28:
3）
一个清晰斑点
5
49-55
黄棕色液体
石油醚-乙酸乙酯（28:
3）
五个斑点
6
61-70
白色粉末
石油醚-乙酸乙酯（28:
3）
一个斑点
7
77-96
无色液体
石油醚-乙酸乙酯（28:
3）
两个斑点
其中，3号流分回收溶剂后出现白色粉末，溶于乙醚。
4号、6号流分也分别出现白色粉末。
对3号、4号、6号流分进行薄层色谱检查结果如下：
ABC
A：
3号组分；B：
4号组分C：
6号组分
展开剂：
石油醚:
乙酸乙酯=6:
1
显色剂：
5%磷钼酸乙醇液
将3号、4号、6号流分与韭菜籽未皂化前的石油醚提取物，进行薄层色谱对照如下：
D
C
B
A
A：
原样品；B：
3号组分；C：
4号组分；D：
6号组分
展开剂：
石油醚:
乙酸乙酯＝3:
1
显色剂：
5%磷钼酸乙醇液
D
C
B
A
A:
原样品；B:
3号组分；C:
4号组分；D:
6号组分
展开剂：
石油醚:
乙酸乙酯=5:
1
显色剂：
5%磷钼酸乙醇液
A
B
C
D
A:
原样品；B:
3号流分；C:
4号流分；D:
6号流分
展开剂：
乙醚:
乙酸乙酯＝1:
1
显色剂：
5%磷钼酸乙醇液
根据对照结果，这三个斑点与原样品基本符合，可初步判断该三个白色粉末为韭菜籽中原有的化学成分。
3.实验结果
3.1GC/MS法分析结果
GC/MS法分析出9种脂肪酸和3种酯类，见表2。
其中有3种脂肪酸及3种酯类未见报道。
3.2柱层析结果
根据薄层色谱分析，合并后的3、4、6号组分可能为单体化合物，但由于实习时间有限，未能对这三种成分进行更深入的结构鉴定研究
4.小结与讨论
4.1小结
4.1.1本文经过系统预试初步确定了韭菜籽中可能含有的大类化学成分，主要有氨基酸、蛋白质、皂苷、黄酮、生物碱、油脂等化学成分。
以此为依据采用系统溶剂法，以石油醚、乙醚、乙醇、水为溶剂，对韭菜籽的化学成分进行提取。
4.1.2对韭菜籽石油醚提取物皂化后的样品乙醚萃取部分进行GC/MS分析，共检测出9种脂肪酸和3种酯类化合物，如棕榈酸、油酸、亚油酸等，其中有3种脂肪酸未见报道。
4.1.3柱层析分离共得到96个流分，对其斑点一致、有分离价值的流分进行了合并后三个结晶化合物，经薄层色谱对照，这三种结晶化合物为石油醚提取物中的原成分。
但由于时间关系，未能对这三种化合物进行结构鉴定。
4.2讨论
韭菜籽是我国比较普遍的经济作物，在我们吉林省产量较大，其药用价值已被更多的人认识到，关于其化学成分及药理作用方面现虽已有些报道，但都没有全面的进行化学成分及药效物质基础的研究，本课题将对韭菜籽进行系统的研究，为更好的开发韭菜籽资源提供一定的科学依据。
经过系统检索和查阅文献，国内外有过韭菜籽的报道主要是脂肪酸、氨基酸、微量元素等成分的初步分析，及其临床应用等方面的情况，另有韭菜籽熏烟治疗牙疼的报道，对韭菜籽化学成分的系统研究还很少。
本实验通过GC/MS、薄层色谱、柱色谱等方法对韭菜籽酯溶性成分进行了初步研究，共检测出9种脂肪酸及3种酯类化合物，并分离出3种白色粉末，为本课题的进一步研究奠定了基础。
但在进行柱色谱分离过程中，流分量稍大，使分离效果受到一些影响，如能在此改进，一定会有更好的效果。
希望本实验的研究结果，能为韭菜籽资源的开发利用，以及进一步建立其科学合理的质量评价标准，提供一定的科学依据。
参考文献
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21
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19
致谢
本课题是在姜大成教授的悉心指导下完成的，在实验过程中得到了肖井雷老师的大力帮助。
此外，还得到了曹阳师兄、田春雨师兄、杨东师姐、于洋师姐以及实验室所有成员的友情支持，在此一并表示忠心的感谢。
附录
附图1
附图2
附图3
附图4
附图5
附图6
附图7
附图8
附图9
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