甘油的检验方法汇总 (1)Word下载.docx

甘油的检验方法汇总 (1)Word下载.docx

《甘油的检验方法汇总 (1)Word下载.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《甘油的检验方法汇总 (1)Word下载.docx（5页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。

高碘酸氧化法是现在常见用于甘油含量检测方法，利用高碘酸和甘油发生氧化还原反应，剩下高碘酸及反应生成碘酸和碘化钾反应生成碘，再用硫代硫酸钠进行滴定，依据消耗硫代硫酸钠量来计算甘油含量。

2.操作步骤

正确发酵液10ml于100mL小烧杯中，加少许水溶解，然后转移至100mL容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀，静置。

用移液管正确移取10mL上述溶液于碘量瓶中，加入20mL高碘酸钠溶液，混合均匀后，于黑暗中避光静置40min，然后加入碘化钾溶液和20%盐酸溶液各15mL，调整pH值在0.8～1.0之间，然后用硫代硫酸钠标准溶液滴定，近终点时，加入2mL淀粉指示剂溶液，继续滴定至溶液蓝色消失。

同时做试样空白。

3.计算：

式中：

w——样品中甘油含量，％；

V1——空白试样消耗硫代硫酸钠标准溶液体积，mL；

V2——试样消耗硫代硫酸钠标准溶液体积，mL；

C——硫代硫酸钠标准溶液浓度，mol／L；

M——甘油相对分子质量；

二、酶比色法

它是利用酶特异性催化反应建立测定甘油一个酶学方法，是指甘油在甘油激酶作用下转化为3-磷酸甘油，后者由磷酸甘油氧化酶催化生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢，然后过氧化氢和4-氨基安普比林、4-氯酚在过氧化物酶催化下反应生成紫兰色、能在500nm左右有特征吸收峰醌亚胺，经过颜色深浅即吸光度改变测定所生成H2O2，甘油含量和生成H2O2成正比，这么用比色法就能够测定甘油含量。

波长：

500nm 

（480~520nm） 

反应温度：

37℃ 

比色杯光径：

1cm 

取一定量R1（参看R2瓶签）加入1瓶R2中，溶解后即为工作液，工作液预先保温至测试温度。

空白管

校准管

样品管

工作液

1ml

蒸馏水

0.01

标准品

样品

分别混合均匀，在反应温度保温10分钟，以试剂空白管校零，统计校准及样品OD值。

甘油浓度=A样品/A校准×

校准浓度（mmol/L或mg/dl） 

三、高效液相色谱法

1.原理：

高效液相色谱法（HPLC）原理是以液体为流动相，采取高压输液系统，将含有不一样极性单一溶剂或不一样百分比混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相色谱柱，利用色谱柱对待测混合物优异行分离，然后再进行检测，从而实现对试样分析，所以其测量正确性和正确度较高，现在已成为检测生化分子较常见一个方法。

2.操作步骤

（1）首先用水将发酵液稀释2.5倍,然后加H3PO4调pH至5.5,在转速8000r/min、温度4℃下离心10min,经微孔滤膜过滤用于HPLC分析；

（2）将甘油标准系列溶液在最好色谱条件下进行HPLC分析,以峰面积外标法定量得到甘油标准曲线；

（3）根据样品预处理方法处理后进样5微升,统计峰面积,代入线性方程中,计算其测定值。

将计算值乘以稀释倍数后,即得发酵液中甘油含量。

四、气相色谱法

气相色谱分析法是用于分离分析复杂样品中化合物一个方法，其原理是一定量气体或液体分析物被注入到柱一端进样口中，在载气带动下经过色谱柱，分析物分子会受到柱壁或柱中填料吸附。

因为不一样样品含有不一样物理和化学性质，和特定固定相有着不一样相互作用，使得每一个类型分子全部有自己经过速率，所以，分析物中多种不一样组分就会在不一样时间抵达柱末端，从而得到分离。

当化合物从柱末端流出时，它们被检测器检测到，产生对应信号，并被转化为电信号输出，从而确定每一个组分抵达色谱柱末端时间次序和每一个组分含量。

（1）标准溶液配制在7个25mL容量瓶中分别正确称入0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5g甘油（正确至0.1mg），再分别移入2mL内标贮备液，用混合溶剂定容并摇匀，作为标准工作溶液。

其中甘油质量浓度分别为0、2、4、8、12、20g/L，内标质量浓度均为8g/L。

（2）样品制备在25mL容量瓶中加入5ml发酵液样品，移入2mL内标贮备液，用混合溶剂定容至刻度并摇匀。

（3）GC条件

色谱柱：

HP-5石英毛细管柱，30m（柱长）×

0.32mm（内径）×

0.25μm（膜厚）。

柱温：

初始温度120℃，保留5min，以20℃/min升至290℃，保留10min。

进样口温度：

280℃，进样量：

0.2μL，分流比：

100∶1。

检测器（FID）温度：

300℃，氢气流速：

40mL/min，空气流速：

300mL/min。

载气：

氮气，流速：

1mL/min，恒流模式

（4）进样，计算

五、酶电极法

1、检测原理

利用生物酶只能催化一个或一类底物性质，将甘油氧化酶进行固定化处理，样本中甘油在甘油酶膜作用下被催化生成过氧化氢，依据电化学原理，过氧化氢浓度和电压值正相关，依据标准液、缓冲液电压值响应值来确定样本中甘油浓度。

甘油浓度和电压值相关性分析

2.操作步骤

按相关操作说明进行。

整个检测过程不超出45秒

应用范围：

发酵过程甘油浓度检测，食品中甘油检测，西尔曼科技中国唯一一家有能力生产能够不用预稀释样本就能够检测高达1甘油浓度分析制造商。

六、总结

甘油测定方法很多,最常见是化学法。

化学法测定甘油含量费用较低,但操作繁琐,试剂用量大,耗时长,且有时误差极大。

酶法测定甘油专一性强,只和溶液中甘油特异性地反应,但所需试剂昂贵,不利于工业应用和大量样品检测。

测定游离甘油最灵敏方法是气相色谱法、液相色谱法，正确度较高，但需对甘油进行硅烷化，操作麻烦，成本也较高。

因为高碘量法受发酵液中杂质（糖类、多元醇）影响大，尤其是发酵中甘油含量低时，单用此方法检测基础不正确；

高效液相色谱法检测正确，但发酵样品前处理工作量大，不适合产生大量样品。

所以使用酶电极法测定发酵液中甘油含量，含有速度快、专一性强，因为固定化酶能够反复利用，单次检测相对于酶比色法含有更低成本。