山竹果皮中抗氧化活性物质的提取分离1.docx
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山竹果皮中抗氧化活性物质的提取分离1
科学研究
食品研究与开发
20019年6月第30卷第6期
ll==-
山竹果皮中抗氧化活性物质的提取分离
张泽生。
赵璐。
牟浩,索茂荣
(天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津300457)
摘要:
将山竹果皮95%乙醇提取物用溶剂萃取法分成4个不同的组分;采用体外抗氧化模型测定4个组分的抗氧化能力;并对该4个组分分别测定总黄酮、总酚的含量;用大孔吸附树脂D101纯化分离正丁醇相;并测定正丁醇相纯化前后抗氧化活性、总黄酮和总酚含量的变化。
结果表明:
正丁醇相表现出较强的抗氧化活性;而且该相中总黄酮和总酚
的含量也较其他几相高;用D101大孔吸附树脂纯化正丁醇相后抗氧化活性及总黄酮、总酚含量都有显著的提升。
关键词:
山竹果皮;抗氧化性;总黄酮;总酚;分离;纯化
STUDYONEXTRACTIONANDPURIFICATIONOFTHEf’LAV0—0IDS
FROM6诅R
c.,^ⅡH肘rAⅣGDS烈ⅣA
LPERICARP
ZHANGZe-sheng,ZHAOLu,MUHao,SUOMao-rong
(CollegeofFoodEngineeringandBiological
Technology,TianjinUniversity
of
Science&Technology,Tianjin300457,China)
Abstract:
TheGarciniamangostanaLperiearpwaJsextractedby95%ethan01.Andtheextractsweredividedintofourpartsaccordingtheirpolarity.Thentheirantioxidantactivitiesweredeterminedbyexternalantioxidantmode.Besides.the
content
offlavonoidsandpolyphenolsofthemweredetermined.Then—butanolextractswere
purifiedwithadsorbresinD101.Andthenthecontent
offlavonoids
and
polyphenolsofthemwere
determined.
Theresultshowedthat
The
n..butanolextractshavestrongantioxidantactivitiesandthe
content
offlavonoids
and
polyphenolsofitwerehigherthantheotherparts.Afterpurifiedthen-butanolextracts,itshowedthatthe
antioxidantactivitiesandthe
content
offlavonoids
andpolyphenols
were
remarkablyenhanced.
Keywords:
GarciniamangostansLpericarp;antioxidant;flavonoids;polyphenols;extraction;purification
山竹(Garcinia
mangostana
L.)3L称山竹子、莽吉
关于山竹果皮中抗肿瘤的研究报道较多,对其抗氧化
柿、凤果。
为藤黄科藤黄属一种间杂交的异源多倍体成分的研究较少。
本文旨在研究采用不同溶剂分级山
果树111.原产于印度尼西亚和马来西亚,是一种典型的竹果皮95%乙醇提取物.并比较不同组分的抗氧化热带水果,主要分布于泰国、越南、马来西亚、印度尼西性和总黄酮、总多酚的含量。
以及D101大孔吸附树亚、菲律宾等东南亚国家。
我国台湾、福建、广东和云脂纯化正丁醇萃取物前后的抗氧化性,总黄酮、总酚南也有引种回。
山竹果实主要作为水果鲜食,其果肉占的含量。
整个果重的l/4左右,柔软多汁,甜而略带酸味,被誉为“果中皇后”131。
许多研究发现,山竹具有抗炎、抗肿1材料与方法瘤、抗氧化活性,并对金黄色葡萄球菌、志贺痢疾杆菌、1.1材料
弗氏去贺菌、大肠杆菌、霍乱弧菌和哟门螺杆菌等细菌乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、TPTZ(2,4,6一三具有抗菌活性闱。
所以,近年来,山竹特别是山竹果皮(2一吡啶基)1,3’5一三一嗪)、DPPH(二苯代苦昧酰肼)、没化学成分及其生物学活性成为人们的研究热点。
国内
食子酸、芦丁、L-抗坏血酸等均为国产分析纯;山竹:
购基金项目:
国家科技支撑计划项目(2006BAD27806)
于天津市场。
1.2主要仪器设备
能食品及配料的研究与开发;天然产物的生物活性及机理的研究。
RE一52AA旋转蒸发仪:
上海亚荣生化仪器厂;
万方数据
作者简介:
张泽生(1956~),男(汉),教授,博士研究生导师,研究方向:
功
箬0030篙6氛
第
卷第期
食品研究与开发民aa岍乃叼丌蹑
科学研究
一==J2
SHB—III循环水式多用真空泵:
郑州长城科工贸有限公司;JA2003全自动光电分析天平:
上海天平仪器厂;UVmin一1240紫外,可见分光光度计:
日本岛津公司:
TDL-5一A型低速离心机:
上海安亭科学仪器厂:
MK3型酶标仪:
美国Thermo公司。
1.3方法1.3.1样品的制备
山竹果皮粉碎洗净,95%乙醇提取,提取液抽滤3次,真空浓缩至干,用去离子水溶解,分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取,萃取液真空浓缩,干燥,得石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水相萃取物。
1.3.2各萃取组分对DPPH自由基清除能力的测定[5-03
将各萃取物配制成50、100、150、200mg/L的溶液。
取不同浓度的试样2mL。
分别加入2mL
1.Sxl04mol/L
DPPH溶液,摇匀后室温放置。
30min后于517nm测定吸光度。
L一抗坏血酸做阳性对照。
样品对DPPH的清除率K可用下式计算:
K/%:
丛Q二f叁亡丝£2一×100
AO
式中:
A;为2mL
DPPH溶液+2mL待测溶液吸
光度;A,为2mL待测溶液十2mL溶剂的吸光度;A。
为
2mL
DPPH溶液+2mL溶剂的吸光度。
1.3.3各萃取组分还原力的测定
将各萃取物配制成50、100、150、200mg/L的溶液。
取1mL上述溶液.加入2.5mL磷酸盐缓冲液(O.2
mol/L,pH
6.6)和2.5
mL1%K3
re(CN),溶液,于
50℃水浴反应20min后迅速冷却。
加入2.5mL10%
的三氯乙酸溶液,以5
000
r/rain的转速离心10min,取
上清液2.5mL。
加入2.5mL双蒸水和1
mL
0.1%的
FeCl3,充分混匀,静置10min后于700nln处测定吸光度。
L-抗坏血酸做阳性对照。
以A彻。
代表还原力强度,A越大,还原力越大。
1.3.4各萃取组分FRAP模型抗氧化性的测定1741
将各萃取物配制成50、100、150、200mg/L的溶液。
加入3.6mL耶,IZ工作液(由0.3mol/L醋酸盐缓冲液
25mL,10
mmol/LⅡ忱溶液2.5
mL,20mmol/LFeCl3溶
液2_5mL组成),充分混匀后,37℃水浴反应10rain,于
593
nln处测定吸光度,同时以I,抗坏血酸作阳性对照。
以1.0mmol/L
FeSO,为标准样,样品抗氧化活性
(VRAPvalue)以达到同样吸光度所需的FeSO。
的毫摩尔数表示。
1.3.5各萃取组分总黄酮、总多酚含量的测定
1.3.5.1总黄酮含量的测定
准确称取芦丁标准品10nag,定容于100mL。
吸
万方数据
取上述溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL样液用水稀释到5
mL.静置5min,加入O.3mL5%亚硝酸钠,反应6rain
后加入0.3mL硝酸铝。
反应6rain再加入4mL
1mol/L
氢氧化钠和2.5mL水,反应10min后于51011111处测定吸光度。
以吸光度值为纵坐标。
芦丁浓度为横坐标绘制标准曲线。
得回归方程为:
y=1.004x-0.001
8,R2=
0.999
5。
将各萃取物配制成100mCL溶液,按上述方
法测定其总黄酮含量。
1.3.5.2总酚含量的测定
准确称取没食子酸标准品45.3mg。
用水溶解并定容至100mL。
以此溶液配成浓度为9.06、18.12、36.24、
54.36、72.48、90.60
ms/L的溶液。
分别取上述不同浓度
溶液1mL加到10mL比色管中。
然后依次加入1mL去离子水,0.5mL已稀释2倍的福林一酚试液,1.5
mL
26.7%Na:
CO,溶液,最后用水定容至10mL,在50℃水浴下保持10rain,冷却,在760nm下测定其吸光度。
由所取标准液的浓度和吸光度数据经数据分析,回归方程为:
y=98.653x一3.1132,R2=O.993
6。
将各萃
取物配制成100mg/L溶液。
按上述方法测定其总酚
含量。
1.3.6
D101大孑L吸附树脂纯化分离正丁醇萃取物准确称取正丁醇萃取物干燥粉末10g,用水定容
于100mL。
将上述溶液上样于1000
gDl01树脂柱中,
用60%乙醇溶液洗脱,流速为2mL/min。
流出液真空浓缩,冷冻干燥。
1.3.7正丁醇萃取物大孔吸附树脂纯化前后抗氧化活性的比较
1)按照1.3.2方法测定正丁醇萃取物大孔吸附树脂纯化前后清除DPPH自由基能力的变化。
2)按照1.3.3方法测定正丁醇萃取物大孔吸附树脂纯化前后还原力的变化。
3)按照1.3.4方法测定正丁醇萃取物大孔吸附树脂纯化前后FRAP抗氧化模型中的变化。
1.3.8正丁醇萃取物大孔吸附树脂纯化前后总黄酮、总酚含量的比较
1)按照1.3.5.1方法测定正丁醇萃取物大孔吸附树脂纯化前后总黄酮含量的变化。
2)按照1.3.5.2方法测定正丁醇萃取物大孔吸附树脂纯化前后总酚含量的变化。
2结果与分析
2.1各萃取组分对DPPH自由基的清除作用
各萃取物清除DPPH自由基能力的比较见图1。
科学研究
食品研究与开发
2009年6月第30卷第6期
堡
豁
口
餐
样品浓度“mg∞
Sample
t。
onrentration/(m班)
图1各萃取组分对DPPH自由基的清除作用
Fig.1
Differentextractsscavengingactivity
agai砸tDPPHfreeradical
由图1可知.各萃取物对DPPH自由基均有一定的清除作用,且随浓度的增加清除能力增强。
清除DPPH自由基能力的大小依次为正丁醇相、乙酸乙酯相、水相、石油醚相清除能力最差。
2.2各萃取组分还原力的测定
各萃取物还原能力的比较见图2。
葵弋
餐
样品浓度/(rag/L)
Sampleconcentration/(mg/L)
圈2各萃取组分还原力的测定
Fig.2
Reducingpowerofdifferent
extracts
由图2可知。
各萃取物的还原能力与样品的浓度呈正相关.样品浓度越高.还原能力越强。
正丁醇相和乙酸乙酯相均表现出较强的还原能力。
水相和石油醚相的还原能力较差。
2.3各萃取组分FRAP模型抗氧化性的测定
各萃取物FILAP模型抗氧化性的比较见图3。
瑟
器室
样品浓度/(rag/l_.,)
Sampleconcentration/(mg/L)
圈3各萃取组分FRAP模型抗氧化性的比较
Fig.3
CompareofdifferentextractsinFRAP
test
万方数据
l3=r
由图3可以看出.正丁醇相、乙酸乙酯相和水相
在F.RAP抗氧化模型中表现出了较强的能力,而石油
醚相抗氧化能力最差。
L胃五I||||||||0●孕7||||||||
2.495%乙醇提取物与各萃取组分总黄酮、总多酚含
量的测定
2.4.1
95%乙醇提取物与各萃取组分总黄酮的测定95%乙醇提取物与各萃取物总黄酮含量比较
见图4。
霾
面蛊
■1._-_
.■.
圈4
95%乙醇提取物与各萃取组分总黄酮的比较
Fig.4
Comparethecontentofflavonesindifferentextracts
由图4可知.95%乙醇提取物经过不同极性溶剂逐步萃取后,其总黄酮含量主要富集于正丁醇相和乙酸乙酯相中,水相和石油醚相中基本不含黄酮。
2.4.2
95%乙醇提取物与各萃取组分总酚的测定95%乙醇提取物与各萃取组分总酚含量的比较
见图5。
堡誉
咖g
萋|踊蛊
■I.__
.■
由图5可知,山竹果皮95%乙醇提取物经过不同
极性的溶剂依次萃取后,酚类化合物主要富集在正丁醇相和乙酸乙酯相中。
正丁醇相中总酚的含量最高,达到了13.82%。
2.5正丁醇萃取物大孔吸附树脂纯化前后抗氧化活2.5.1正丁醇萃取物大孔吸附树脂纯化前后清除DPPH自由基能力的测定
正丁醇萃取物大孔吸附树脂纯化前后清除DPPH自由基能力的比较见图6。
性的比较
菪0030鬻晶
第
卷第6期
食品研究与开发民叩Wl乃叫丌蹑
科学研究
・==
J4
堡
豁
口
靛
样品浓度/(mg/L)
Sample
concentration/(m.g/L)
,
圈6正丁醇萃取物大孔吸附树脂纯化前后清除DPPH
自由基能力的比较
Fig.6
Compareofn-butanol
extracts
before
or
afterpurified
byadsorbresinscavengingactivityagainstDPPHfreeradical
由图6可知,正丁醇相在经过大孔吸附树脂纯化后对DPPH自由基的清除能力有了明显地提高,在
150
mg/L浓度水平时,纯化后的正丁醇相对DPPH自
由基的清除能力达到了90%以上,基本与Vc的清除能力持平。
2.5.2正丁醇萃取物大孔吸附树脂纯化前后还原力的测定
正丁醇萃取物大孔吸附树脂纯化前后还原力的比较见图7。
16l412
髓
10
呆弋O8督O6
O4O2OO
样品浓度/(mg/L)
Sample
eoncentration“rag/L)
图7正丁醇萃取物大孔吸附树脂纯化前后还原力的比较Fig.7
Compareofreducing
power
ofn-butanolextractsbeforeor
afterpurified
by
adsorbresin
由图7可以看出,正丁醇相在经过大孔吸附树脂纯化后还原能力有了很大地提升。
在200mg/L浓度水平时,纯化后的正丁醇相的还原能力是纯化前的近4倍。
2.5.3正丁醇萃取物大孔吸附树脂纯化前后FRAP抗氧化模型中的测定
正丁醇萃取物大孑L吸附树脂纯化前后FRAP抗氧
化模型中的比较见图8。
由图8可知,正丁醇相经大孔吸附树脂纯化后总抗氧化活性提升了近1倍。
综上所述。
正丁醇相在经过D101大孔吸附树脂纯化后。
其抗氧化活性有了显著地提升,说明D101大孔吸附树脂对纯化分离正丁醇相中的抗氧化活性物质有较好的效果。
万方数据
翦
饕塞
样品浓度/(rag/L)
Sample
eoneentration/(mg/L)
图8正丁醇萃取物大孔吸附树脂纯化前后在FRAP模型中抗氧化
性比较
Hg.8
Compareofn-butanol
extracts
before
orafter
purifiedby
adsorbresininFRAP
test
2.6正丁醇萃取物大孔吸附树脂纯化前后总黄酮、总酚含量的比较
正丁醇萃取物大孑L吸附树脂纯化前后总黄酮、总酚含量的比较见图9。
广||||||||||||||||||
零誉
谪至
麟纯化前■纯化后
如g
U
。
蕊
黧
总酚
Polyphenols
图9正丁醇萃取物大孔吸附树脂纯化前后总黄酮、总酚含量的比较
Fig.9
Comparethecontentofflavonesandpolyphenolsin
n-
butanolextractsbefore
or
afterpurifiedbyadsorbn瞎in
由图9可知。
正丁醇相在经过了D101大孔吸附树脂纯化后。
其总黄酮、总酚含量明显提高。
由此可推
断出D101大孔吸附树脂是纯化分离正丁醇相中黄酮和酚类化合物的有效树脂。
3结论
不同溶剂分级提取产物的抗氧化性评价结果表明:
山竹果皮各萃取物除石油醚相外均表现出一定的抗氧化活性。
其中正丁醇相和乙酸乙酯相的抗氧化活性较其他几相强。
正丁醇相和乙酸乙酯相中总黄酮和总酚的含量也明显高于其他几相。
用DIOI大孔吸附树脂纯化后的提取物抗氧化活性明显增强,总黄酮和总酚的含量也显著提升。
说明DIOI大孔吸附树脂是纯化分离山竹果皮中抗氧化活性物质的有效树脂。
因此.山竹果皮提取物具有良好的体外抗氧化作用,这为进一步研究山竹果皮体内抗氧化活性以及山
科学研究
食品研究与开发
20a旧年6月第30卷第6期
l5==-
有机溶剂浸提番茄红素的工艺优化
吴疆。
李聪
(天津农学院农学系,天津300384)
摘要:
采用有机溶剂浸提法从番茄中提取番茄红素。
先确定研究的因素,再采用单因素试验确定试验因素的最好条件,最后采用埘34)正交试验,确定提取的最佳溶剂及最佳工艺条件。
在单因素试验中得到皂化温度、乙醇处理时
的料液比和二氯甲烷振荡提取时问的各因素的最佳条件,而在正交试验中得到提取番茄在皂化温度、乙醇处理时的料液比和二氯甲烷振荡提取时间的最佳工艺条件:
皂化温度为50oC;乙醇处理时料液比为l:
3;二氯甲烷振荡提取时间为35min。
关键词:
番茄红素;有机溶荆;提取
OPTIMIZED’IECHNOLOGYFORTHEEXTRACTIONOFLYCOPE—EBY0RGANICSOLVE一。
IS
WUJiang,LICong
(DepartmentofAgronomy,Tianjin
factors,thesinglefactortestwasused
Agricultural
University,Tianjin300384,China)
Abstract:
Inthisexperiment,lycopenewagextractedfromtomatobyorganicsolvents.Afterdeterminationof
to
determinethebestconditionsforextraction,andthentheorthogonal
extrac
b(34)Wag
used
to
determinetheoptimum
tionsolvent
and
the
bestconditions.ne
specification
temperature,ratioofethanol,feedratiofactorexperiment,whichwere
thebest
and
dichloride
methaneextractiontimewereobtainedbythesinsle
temperature,ethanolfeedratioand
conditions.仙e
specification
dichloridemethaneextractiontimewereobtainedbyorthogonalexperiments,whichwerethe
best
technology
conditions:
saponificationtemperatureWag50℃,solid-liquidratiowas1:
3,oscillationtimeofmethylenedichloridewas35rain.
Keywords:
Lycopene;organicsolvent;extraction
番茄红素是类胡萝卜素的一种,近年来的研究表明番茄红素具有多种生理功能。
番茄红素通过对单线
作者简介:
吴疆(1976一),男(汉),讲师,硕士,主要从事生物技术方面的研究工作。
态氧的淬灭和自由基的消除、阻断亚硝胺形成、抑制细胞等多种作用.起到预防癌症和心血管疾病的作用,其特有的功能与性质颇令人瞩目,因此引发了世界性的对番茄红素生产技术及应用开发的研究热潮fl】。
本文
●_H●●●叫H●啼◆_●HH■m●H*●_-●●_●_H■_●_H’●H■_“-●—H-●_H●●“●_◆和●呻●H-●HH●呻_H●●H●一・-●叫H●_-●一H●●H■_H●_.■■●●—-●..H●一-●一H●—H●●H●-HH.◆_。
◆_。
◆l●。
帅—H-
竹果皮的综合利用提供了科学依据,但山竹果皮中黄酮与酚类化合物的组成成分还需要进一步研究。
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161—166
cell
line
IJ].J
BioresourseTeehnofigy,2005,96:
873-877
收稿日期:
2008—12-0l
万方数据