IgM捕捉ELISA法MacELISA检测出血热IgM抗体.doc

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附件1IgM捕捉ELISA法（MacELISA）检测出血热IgM抗体

本试剂盒系采用抗人μ链捕获人血清IgM抗体，加辣根过氧化物酶－病毒抗原标记物，用以检测出血热特异性IgM抗体。

具有较高的敏感性、特异性和重复性。

特别适用于出血热的早期特异性诊断及其它实验性研究。

本试剂盒为96人份/包装。

试验材料：

（1）抗人IgM抗体（μ链）：

用pH9.5的包被液包被酶标板

（2）冻干阳性血清/冻干阴性血清1支，0.2ml/支，工作浓度为1：

10；

（3）冻干辣根过氧化物酶－病毒抗原标记物1支，0.5ml/支，工作浓度为1：

20；

（4）冻干小牛血清1支，1ml/支；

（5）浓缩洗液（10倍浓缩）1瓶，50ml；（标本稀释液为含5%小牛血清原倍洗液）；

（6）A/B显色液和终止液各1瓶。

（冻干试剂先用相应量的去离子水溶解，然后临用前根据所需按工作浓度稀释使用，余下的放-20℃保存）

（7）终止液：

4NH2SO4

（8）酶标仪。

检测步骤：

（1）将待检血清用稀释液100倍稀释，加入已包被抗人μ链抗体的酶标板一孔中，100μl/孔，同时加入已1：

10稀释的阳性血清/阴性血清对照各一孔，100μl/孔，置37℃水浴孵育1小时。

（2）弃去血清，用PBS－T漂洗5遍，甩干。

（3）将冻干辣根过氧化物酶－病毒抗原标记物1：

10稀释后，加入反应板相应孔内，100μl/孔，37℃水浴孵育1小时。

（4）弃去酶标抗体，用洗涤液洗涤6次，甩干。

（5）加显色液:

于各反应孔内加A/B液各一滴，37℃，避光3～5分钟。

（6）加终止液（4NH2SO4）于每反应孔，一滴/孔。

结果判断：

（1）目测方法：

阳性对照孔呈明显蓝色，阴性对照孔呈无色，对照成立；若待检血清孔呈明显淡蓝色或深蓝色（TMB），则标本为出血热IgM抗体阳性，反之阴性。

（2）酶联免疫检测仪检测：

于450nm（TMB）阳性对照孔OD值/阴性对照孔OD值,即P/N≥2.1，对照成立；若待检血清孔OD值与阴性对照孔OD比值≥2.1，则标本为流行性出血热IgM抗体阳性，反之阴性。

（阴性对照孔OD值小于0.05按0.05记，若大于0.05按实际数值计算）

意义：

阳性结果，表明患者新近汉坦病毒感染，用于出血热早期诊断。