唾液淀粉酶最适pH值的测定实验设计.docx
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生物化学实验考核设计方案
唾液淀粉酶最适pH值的测定实验
小组成员:
刘倍材何标才揭春晓李芮
实验目的：
1.掌握设计性实验的基本思路，并完成设计报告。
2.掌握唾液淀粉酶最适PH的测定原理和方法。
3.熟悉影响酶促反应速度的因素。
实验原理：
1．酶促反应速度受到许多因素的影响，如温度、PH、激动剂和抑制剂等。
上述诸因素对唾液淀粉酶催化淀粉水解反应速度的影响，可用定性或定量的反应来观察。
利用碘与淀粉机器不同程度纾解产物反应的颜色，来衡量酶促反应的速度的快慢。
蓝色—紫红色—黄色，颜色由蓝变黄，表示酶促反应速度由慢到快。
此为定性观察。
2.进一步利用郎伯—比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液的浓度符合一定的比例关系。
由于在被水解的程度也不一样。
当唾液淀粉酶不能将完全水解时，淀粉遇碘呈蓝色，吸收波长位于660nm处。
不同PH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同，吸光度值也不同。
因此，通过测量660nm处的吸光度值，可以了解PH对酶促反应的影响，吸光度最小的溶液其PH即为唾液淀粉酶的最适PH。
实验步骤：
1.缓冲溶液的配制。
取12支试管进行编号1-12，分别按下表加入试剂。
编号
1
2
3
4
5
6
PH
5.8
6.0
6.2
6.4
6.6
6.8
0.2mol/L
Na2HPO4（ml）
0.40
0.62
0.93
1.33
1.88
2.45
0.2mol/L
NaH2PO4（ml）
4.60
4.38
4.07
3.67
3.12
2.55
蒸馏水
5.00
5.00
5.00
5.00
5.00
5.00
编号
7
8
9
10
11
12
PH
7.0
7.2
7.4
7.6
7.8
8.0
0.2mol/L
Na2HPO4（ml）
3.05
3.60
4.05
4.35
4.58
4.74
0.2mol/L
NaH2PO4（ml）
1.95
1.40
0.95
0.65
0.42
0.26
蒸馏水
5.00
5.00
5.00
5.00
5.00
5.00
2.唾液的采集。
先给备取者一杯纯净水让其漱口，将漱口液吐掉,让备取者下嘴唇抵住干净的杯子口，在备取者眼前放上一些话梅，这时，备取者的唾液会不停地流出来。
3.唾液的稀释。
取10支试管，进行编号1＇-10＇,进行稀释。
编号
1＇
2＇
3＇
4＇
5＇
6＇
7＇
8＇
9＇
10＇
唾液（ml）
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
0.1
蒸馏水
（ml）
2.0
4.0
6.0
8.0
10.0
12.0
14.0
16.0
18.0
20.0
4.唾液稀释倍数的选取。
另取10支试管，分别编上A-K号，各取上述稀释的唾液各1ml，分别加入相应编号的试管里，向10支试管内同时加入1ml的0.02％的淀粉溶液，振荡混匀后放入37C恒温水浴5分钟后取出，滴加2～3碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变化适中的一支，记录稀释倍数。
5.最适PH的测定。
另取12支试管,进行编号,按下表加入试剂。
进行测定。
编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
0.02％淀粉溶液（ml）
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
3ml缓冲溶液pH
5.8
6.0
6.2
6.4
6.6
6.8
7.0
7.2
7.4
7.6
7.8
8.0
37摄氏度水浴10分钟
稀释唾液
（ml）
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
37摄氏度水浴2分钟,取出,分别加入2-3滴碘液,以蒸馏水作为对照管,用660nm波长测定吸光度
A660
6.结果分析
当在最适PH下反应时,淀粉被水解最完全,剩余最少,颜色最浅,吸光度最小,所以吸光度最小对应的PH为最适PH。
思考讨论:
1.
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