不同浓度杀菌剂对平菇菌丝体生长的影响.doc
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教学单位孝感学院生命科学技术学院
学生学号071414103
本科毕业论文（设计）
题目不同杀菌剂对平菇菌丝生长的影响
学生姓名 范高韬
专业名称 生物科学
指导教师 李国元
2010年5月11日
不同杀菌剂对平菇菌丝生长的影响
摘要：
主要选用多菌灵，咪鲜胺，甲基硫菌灵三种常用的杀菌剂，在PDA培养基的基础上加入三种杀菌剂，通过实验观察平菇菌种在三种杀菌剂的生长情况；在稀释浓度相同情况下，杀菌效果好的被筛选出来进行精确稀释浓度的测试。
之后在PDA培养基上对筛选出的杀菌剂以呈梯度上升的形式进行测试，旨在筛选出其中既能有效地控制霉菌污染，又不影响平菇菌丝生长的杀菌剂及其具体适用浓度范围和最佳浓度，供生产使用，为生产实践提供合理建议。
关键词：
杀菌剂；多菌灵；平菇菌丝
Differentmicrobicideshyphagrowthinfluencetomushroom
Abstract：
Maintestcarbendazim，prochloraz,andthiophanatemethyl3fungicidesonmushroombacteriamycelialgrowthinhibitioneffect,tofilterouttheappropriatefungicide.PDAmediumfirstpreliminaryscreeningofthreefungicidesinthedilutionofthesamecircumstances,Throughtheexperimentalobservationmushroomspawninthegrowthofthreefungicides，agoodbactericidaleffectwasscreenedforaccuratedilutionofthetest.PDAmediumafterthescreeningoffungicidesonthegradientwasincreasedtotesttheform,designedtofilteroutthepollutioncaneffectivelycontrolthemold,withoutaffectingthegrowthofmushroommyceliumconcentrationoffungicideanditsspecificapplicationandtheoptimalconcentrationrangefortheproductionanduse,toprovidereasonablerecommendationsfortheproductionofpractice.
Keywords：
fungicides;carbendazim;pleurotusostreatus
目录
文献综述………………………………………………………………………5
1.1平菇的基本特征及其相关研究……………………………………………5
1.1.1平菇的基本特征…………………………………………………………5
1.1.2平菇的营养价值…………………………………………………………5
1.1.3国内外对平菇栽培的研究现状…………………………………………6
1.2平菇生产中杀菌剂的选取………………………………………7
1前言………………………………………………………………………7
2材料与方法…………………………………………………………………………8
2.1实验材料……………………………………………………………………8
2.2实验药品及仪器……………………………………………………………8
2.2.1多菌灵……………………………………………………………………8
2.2.2咪鲜胺……………………………………………………………………9
2.2.3甲基硫菌灵………………………………………………………………10
2.2.4三种药品的使用信息……………………………………………………11
2.2.5实验器材……………………………………………………………11
2.3实验方法…………………………………………………………12
3结果与分析………………………………………………………………………12
3.1三种杀菌剂对平菇菌丝的影响分析………………………………………12
3.1.1多菌灵对平菇菌丝生长的效果……………………………………13
3.1.2咪酰胺对平菇菌丝生长的效果……………………………………13
3.1.3甲基硫菌灵对平菇菌丝生长的效果……………………………………14
3.1.4关于三种杀菌剂的使用效果分析…………………………………………14
3.2使用三种杀菌剂后菌落的直径及数据分析…………………………14
3.3不同浓度杀菌剂对平菇菌丝生长的影响…………………………………15
3.3.15种浓度的咪鲜胺培养基中菌落的观察结果…………………………15
3.3.25种浓度咪鲜胺培养基中菌落的直径数据………………………18
3.4实验总结…………………………………………………………………19
4参考文献…………………………………………………………………………21
5谢辞……………………………………………………………………………23
文献综述
1.1平菇的基本特征及相关研究现状
1.1.1平菇的基本特征
平菇（Pleurotusostreatus）在真菌分类上属于担子菌纲，伞目，侧耳科，侧耳属，是我国目前栽培最多的4种主要的食用菌（蘑菇、香菇、草菇、平菇）之一【1】。
平菇的菌丝体在人工栽培的各个种菌丝体均白色，在琼脂培养基上洁白、浓密、气生菌丝多寡不等。
平菇的子实体由菌盖、菌褶和菌柄3部分组成。
（1）菌盖
平菇系大型菇类，菌盖宽为2～23cm。
初为圆形、扁平，成熟后则因种类不同发育成耳状（贝耳）、漏斗状、贝壳状、舌状等形态。
（2）菌褶
菌褶是平菇的有性繁殖器官，生于菌盖下方，呈扇形排列，形似刀片，裸露形。
（3）菌柄
偏生或侧生于菌盖的下方与菌肉紧密相连，柄表下延的菌褶，无菌环，白色中实，肉质或稍具有纤维质。
1.1.2平菇的营养价值
据统计，2009年全世界平菇总产量达36000吨。
平菇食味虽不如蘑菇鲜美，也不如香菇具有浓郁香味，但营养成分却很丰富。
平菇蛋白质含量为21.175%，是鸡蛋的2.6倍，猪肉的4倍，菠菜、油菜的15倍，比香菇高3.128%。
蛋白质中含有18种氨基酸，其中8种必须氨基酸8.38%，占氨基酸总量20.7%的35%以上，在所含18种氨基酸中，甲硫氨酸1.27%，比蘑菇（0.063%）、香菇（0.17%）都高得多。
此外平菇还有含有十分丰富的维生素B族，如VB20.135%微克，VC9.3%微克，VD0.12%微克（麦角固醇）；以及含有钾、钠、钙、镁、锰、铜、锌、硫等14种微量元素【2】。
平菇性味甘、温。
具有追风散寒、舒筋活络的功效。
用于治腰腿疼痛、手足麻木、筋络不通等病症。
平菇中的蛋白多糖体对癌细胞有很强的抑制作用，能增强机体免疫功能。
常食平菇不仅能起到改善人体的新陈代谢，调节植物神经的作用，而且对减少人体血清胆固醇、降低血压和防治肝炎、胃溃疡。
十二指肠溃疡、高血压等有明显的效果。
另外，对调节妇女更年期综合征、改善人体新陈代谢、增强体质都有一定的好处。
据日本学者研究【3】，平菇还含有平菇素（蛋白糖）和酸性多糖体等生理活性物质，对健康、长寿、防治肝炎病等作用甚大（用平菇能制肝宁片），对防治癌症也有一定的效果；还有抑制癌细胞增生的功能，能诱导干扰素的合成。
尤其近年经研究已知平菇等食用菌中，普遍含有能刺激机体产生干扰素的诱导物质（能抑制病毒的抗体），这种物质总称叫“蘑菇核糖酸”（MUSHROOm—vrna），它能强烈地抑制病毒增生。
所以常吃平菇等菌类食品，能减少“流感”、肝炎等病毒性感染的疾病，尤其能抵御现代流行“非典”等病毒入侵的作用。
1.1.3国内外对平菇栽培的研究现状
食用菌栽培过程中常会遭受各种病菌侵害，其中木霉菌（Trichodermaviride）是最常见、最重要的病菌之一【4】。
它不仅污染菌种和培养料，造成菌种或菌筒（袋）报废，同时还可寄生在食用菌菌丝和子实体上引起寄生性病害。
木霉菌丝生长速度极快，感染后会迅速生长占据食用菌生长空间和争夺养分，同时还分泌有毒物质，毒害食用菌菌丝体，使其死亡崩溃造成烂筒，危害性极大。
对木霉菌的防治，目前尚无十分有效的措施，生产上常用多菌灵来防治杂菌污染，但效果普遍不理想【5】。
国内许多研究者也曾进行过多种其他药物防霉试验，但至今未能筛选出一种效取代多菌灵的药物。
在平菇的栽培过程中，防治杂菌及虫害侵染是一个重要问题。
以抑制杂菌和虫害的作用强，而对平菇菌丝生长影响小，平菇能获高产、稳产为原则，人们对众多高效、低毒、低残留的农药进行了筛选。
王振河【6】先后研究了多菌灵、菇耳康和克霉灵对绿色木霉（Trichodermaviride）和平菇菌丝体生长的影响，综合考虑得出，稀释4000倍的50％多菌灵可湿性粉剂（青岛益农化lT有限公司生产）效果较佳。
朱将伟【3】研究百菌清、甲基硫菌灵、多菌灵、代森锰锌和咪鲜胺（施保功）对多种霉菌（绿色木霉、产黄青霉（Penicilliumchrysogenum）和匐枝根霉（Rhizopusnigicas））和平菇菌丝体生长的影响，研究表明，50％咪鲜胺可湿性粉剂（施保功）对霉菌具有很好的抑制效果，而且对平菇菌丝的影响很小。
氨基寡糖素是一种安全无毒、可有效防治一些真菌病害，提高经济作物的抗病性的农药。
王谦、王璞等【7】研究结果表明，4％氨基寡糖素原液2000倍液、1000倍液分别对平菇特抗96、西德99的菌丝生长有显著促进作用。
1.2平菇生产中杀菌剂的选取
在食用菌栽培生产过程中，很容易受到各种病菌的伤害。
在杀菌消毒环节如果操作不当，很容易导致食用菌污染甚至死亡【14】。
使用杀菌剂可以有效的防治污染杀灭杂菌，但是在杀菌的同时也会不同程度的影响菌体生长，因此在食用菌栽培过程中，选取灭菌效果佳，对菌体伤害小的杀菌剂是很重要的。
本文通过选用三种常用杀菌剂进行试验研究，观察对比多菌灵，咪鲜胺，甲基硫菌灵三种杀菌剂对平菇菌丝生长的影响，再选出效果最佳的杀菌剂，研究不同浓度的同一杀菌剂比平菇菌丝的影响。
从而得出对平菇菌丝影响最小的杀菌剂。
1前言
平菇在生物分类学中隶属于真菌门担子菌纲伞菌目白蘑科侧耳属，学名：
[Pleurotusostreatus（Fr.）Kummer]，中文商品名：
平菇，地方名：
北风菌、蚝菌等。
其是栽培广泛的食用菌。
平菇具有很高的营养价值和研究价值，平菇有含丰富的营养物质，每百克于品含蛋白质20—23克，而且氨基酸成分种类齐全，矿物质含量十分丰富，对人的健康、长寿、防治肝炎病等作用甚大（用平菇能制肝宁片），具有追风散寒、舒筋活络的功效。
用于治腰腿疼痛、手足麻木、筋络不通等病症。
对防治癌症也有一定的效果；还有抑制癌细胞增生的功能，能诱导干扰素的合成。
在平菇的栽培生产中，杀灭杂菌是很重要的环节。
目前在食用菌生产中应用的杀菌剂很少。
因此筛选出既能有效地控制霉菌污染，又不影响食用菌正常生长发育的杀菌剂是十分必要的【8】。
本文选取3种常用的杀菌剂（多菌灵，咪鲜胺，甲基硫菌灵）进行对比研究，通过实验选出效果最佳的杀菌剂，再进行浓度分析对比。
旨在选出最适合实际生产应用的杀菌剂及其浓度范围，从而用于平菇的栽培养殖。
2材料与方法
2.1实验材料
本实验以华中农业大学菌种实验中心生产的早丰平菇为材料，先将菌种活化，在PDA培养基上活化培养后，在无菌条件下接种到PDA平板中央，在恒温箱26°C下恒温培养。
杂菌对实验的观测结果影响很大，所以菌种活化、培养、接种过程中都要保证无菌操作【15】。
2.2实验药品与仪器
2.2.1多菌灵
多菌灵（carbendazim）是一种高效、广谱、内吸性杀真菌剂，又名苯胼咪唑44号，由于具有高效低毒，残效期短的特点，在国内外广泛应用于食用菌的病害防治，是食用菌真菌病害防治最主要的杀菌剂【9】。
一、基本介绍
英文通用名称carbendazim
1.化学名：
N－（2－苯骈咪唑基）－氨基甲酸甲酯
2.分子式：
C9H9N3O2
3.结构式：
见图
4.分子量：
191.2
二、特性
多菌灵为无味的粉末，在215－217℃时开始升华，大于290℃时熔融，306℃时分解，不溶于水，微溶于丙酮、氯仿和其他有机溶剂。
可溶于无机酸及醋酸，并形成相应的盐，化学性质稳定。
三、作用特点及机理
多菌灵为高效低毒内吸性杀菌剂，有内吸治疗和保护作用。
干扰病原菌有丝分裂中纺锤体的形成，影响细胞分裂，起到杀菌作用。
四、药剂特性
纯品为白色结晶固体，原药为棕色粉末。
化学性质稳定，原药在阴凉、干燥处贮存2-3年，有效成份不变。
对人畜低毒，对鱼类毒性也低。
2.2.2咪鲜胺
咪鲜胺是一种广谱杀菌剂【10】，对多种作物由子囊菌和半知菌引起的病害具有明显的防效，也可以与大多数杀菌剂、杀菌剂、杀虫剂、除草剂混用，均有较好的防治效果。
对大田作物、水果蔬菜、草皮及观赏植物上的多种病害具有治疗和铲除作用【11】。
一、基本介绍
中英文通用名：
PROCHLORAZ（咪鲜胺）
化学名称：
N-丙基-N-[2-（2,4,6-三氯苯氧基）乙基]-咪唑-1-甲酰胺
分子式：
C15H16Cl3N3O2
分子量：
376.7
结构式：
如图所示
生物活性：
杀菌剂
理化性质：
熔点：
46.5-49.3℃蒸汽压：
（20℃）0.48mpa
溶解度（25℃）：
水55g/L,二氯甲烷、甲苯中>600g/L。
稳定性：
在日光下降解，在正常贮存条件下稳定，在强酸、强碱条件下稳定。
动物毒性：
大白鼠急性经口LD50>1600mg/kg。
属低毒级。
二、性能特点
咪鲜胺为高效、广谱、低毒型杀菌剂，具有内吸传导、预防保护治疗等多重作用，内含咪鲜胺为咪唑类广谱杀菌剂。
通过抑制甾醇的生物合成而起作用，在植物体内具有内吸传导作用，对于子囊菌和半知菌引起的多种病害防效极佳。
采用基因诱导技术，激活植物抗病基因表达，内吸性强，速效性好，持效期长。
三、理化性质和制剂
原药为浅棕色固体，有芳香味，难溶于水，易溶于丙酮、乙醇、二甲苯等溶剂。
常见制剂有25%施保克乳油，绿怡乳油，25%咪鲜胺乳油等。
2.2.3甲基硫菌灵
甲基硫菌灵是一种广谱性内吸低毒杀菌剂，具有内吸、预防和治疗作用。
它最初是由日本曹达株式会社研制开发出来的。
能够有效防治多种作物的病害【10】。
一、基本信息
英文通用名：
Thiophanate-Methyl
其他名称：
甲基托布津日友甲托（PD20081302）
化学名称：
1,2-二（3-甲氧碳基-2-硫脲基）苯
理化性质：
纯品为无色结晶，原粉（含量约93%）为微黄色结晶。
比重1.5（20℃），熔点172℃（分解），蒸气压949．1×10-8Pa（25℃）。
几乎不溶于水，可溶于丙酮、甲醇、乙醇、氯仿等有机溶剂。
对酸、碱稳定。
二、性能特点
属低毒性杀菌剂。
原药大鼠急性经口LD50为7500毫克/公斤，大鼠急性经皮LD50＞10000毫克/公斤。
对兔皮肤和眼睛无刺激作用。
在试验条件下无慢性毒性。
对鲤鱼LC50为11毫克/升（48h），蹲鱼LC50为8.8毫克/升（48h）。
对鸟类、蜜蜂低毒【12】。
剂型：
50%、70%可湿性粉剂，40%、50%胶悬剂，36%悬浮剂。
特点：
广谱杀菌剂，具有向顶性传导功能，对多种病害有预防和治疗作用。
对叶螨和病原线虫有抑制作用。
适用范围：
对禾谷类、蔬菜类、果树上的多种病害有较好的防治作用【13】。
2.2.4三种药品的使用信息
①多菌灵（有效成分50%）
剂型：
可湿型粉剂
净含量：
80g
企业名称：
江西英苏尔生物科技有限公司
②甲基硫菌灵（有效成分70%）
剂型：
可湿性粉剂
净含量：
40g
企业名称：
北京威远正红生物科技有限公司
③咪酰胺（有效成分：
25%）
剂型：
乳油
净含量：
10g
企业名称：
惠州市中迅化工有限公司
2.2.5实验器材
水浴锅，电子天平，纱布，烧杯，量筒，玻璃棒，称量纸，移液管，玻璃培养皿，恒温箱，高压灭菌锅，酒精灯，接种环，试管，棉塞等。
2.3实验方法
①配制供试培养基：
马铃薯一葡萄糖一琼脂培养基（简称PDA培养基），称取马铃薯（去皮）200g，葡萄糖2Og，琼脂2Og，水1000mL。
配制培养基时先将马铃薯在水浴锅中充分煮熟，再用纱布将水浴锅中的液体过滤入大烧杯中，再将滤液及葡萄糖，琼脂加入水浴锅中加热煮沸【16-18】。
待完全溶解之后定容至1000ml。
将1000ml培养液分别定量倒入4个1000ml锥形瓶中，密封好之后与玻璃培养基一起在121℃高压灭菌30分钟后冷却放置。
在超净工作台无菌条件下将培养液倒入各个培养基中，冷却放置【19】。
②菌种活化与同步：
将保存的平菇菌种在PDA培养基上活化培养后，在无菌条件下分别接种到PDA平板中央，每皿接1块直径约为1cm的菌种，于26℃恒温下培养2～6d后备用【20】。
③含不同杀菌剂的培养基的配制及接种：
以PDA为培养基，定量分装于4个三角烧瓶内灭菌，待培养基冷却至50℃左右时前3个分别加入多菌灵，咪鲜胺，甲基硫菌灵3种生物杀菌剂，最后1个不加杀菌剂。
将药剂摇匀后倒入培养皿，待凝固后分别接直径为5mm的供试菌种菌块，以不加杀菌剂的培养基作空白对照。
每一处理重复4次，共16个培养基，每个做好标记后置于25℃恒温箱下恒温培养。
观察1周后，筛选对菌丝影响最小的杀菌剂进行精确浓度的测试。
④含不同浓度杀菌剂培养基的配制及接种：
将筛选出的杀菌剂配制成600倍、800倍、1200倍、1400倍、1600倍5个浓度的含药培养基，倒平板，并进行标记，当培养基冷却凝固后接种。
以不加杀菌剂的培养基为对照。
用直径为6mm的打孔器沿活化后的菌种的菌落边缘取菌龄一致且大小相同的菌块，接种于不同浓度的含药培养基平板中央，每个含药培养基平板中央接一块菌种，菌丝面朝上。
共设5个处理，每处理3次重复。
接种后置25℃恒温箱中恒温培养。
平菇菌丝培养8天。
共设5个处理，每处理3次重复。
培养结束后测量菌丝生长速度，观察比较菌丝的生长势，对平均生长速度进行统计分析。
其中，菌丝生长速度（mm／d）=菌落直径÷培养天数。
3结果与分析
3.1三种杀菌剂对平菇菌丝的影响分析
3.1.1多菌灵对平菇菌丝生长的效果
采用多菌灵时平菇菌丝的生长情况，如图1所示
图一平菇在多菌灵培养基中培养1周时的生长情况
3.1.2咪鲜胺对平菇菌丝生长的效果
采用咪鲜胺时平菇菌丝的生长情况，如图2所示：
图二平菇在咪鲜胺培养基中培养一周时的生长情况
3.1.3甲基硫菌灵对平菇菌丝生长的效果
甲基硫菌灵对平菇菌丝的影响，如图3所示:
图三平菇菌丝在甲基硫菌灵培养基中培养一周时的生长情况
3.1.4关于三种杀菌剂的使用效果分析
通过图1～图3的观察发现，图2中使用咪鲜胺的培养基上的平菇菌丝生长比图1和图2好，菌种直径和大小上都超过另外2个，此外，虽然不是很明显，但是还能观察到，图2的菌丝成色及质量优于图1和图2。
可见，添加了咪鲜胺的培养基对平菇菌丝的生长效果比较好。
3.2使用三种杀菌剂后菌丝的长度及数据分析
菌种分别接种到加入多菌灵，咪鲜胺，甲基硫菌灵及不加杀菌剂的培养基中，恒温培养一周后测量其直径，所得的数据如表1.1所示：
表1.1不同杀菌剂条件下菌落的直径
杀菌剂名称
A组直径（cm）
B组直径（cm）
C组直径（cm）
平均值（cm）
多菌灵
1.40
1.60
1.40
1.47
咪鲜胺
2.10
2.60
1.60
2.10
甲基硫菌灵
1.70
1.50
1.50
1.57
空白对照
4.00
3.00
3.80
3.60
注①：
三种杀菌剂均是稀释1000倍后加入培养基；
②：
空白对照没有加入杀菌剂，只加入了等量的蒸馏水。
通过表1.1可以得知，不加杀菌剂时，平菇在恒温箱内生长最好；在3种杀菌剂中，在含咪鲜胺的培养基中菌落的直径明显大于多菌灵和甲基硫菌灵；另外，甲基硫菌灵的效果则比多菌灵要好。
之后选取效果最好的咪鲜胺进行浓度梯度对比，通过实验观察，得出最佳浓度。
3.3不同浓度杀菌剂对平菇菌丝生长的影响
3.3.15种浓度的咪鲜胺培养基中菌丝的观察结果
将咪鲜胺分别稀释为800倍浓度、1000倍浓度、1200倍浓度、1400倍浓度、1600倍浓度，然后加入到PDA培养基中。
每种浓度4次重复，共20组，标记各组。
将菌种分别接种到含不同浓度杀菌剂的培养基中，恒温箱内26°C恒温放置1周后观察菌丝生长情况。
各组菌丝生长情况如图4～8所示：
图四800倍咪鲜胺培养基中菌丝的生长情况
图五1000倍咪鲜胺培养基中菌丝的生长情况
图六1200倍咪鲜胺培养基中菌丝的生长情况
图七1400倍咪鲜胺培养基中菌丝的生长情况
图八1600倍咪鲜胺培养基中菌丝的生长情况
通过图四～图八的观察发现，菌丝生长情况最好的是1600倍浓度的咪鲜胺培养基；800倍浓度的咪鲜胺效果次之，1200倍浓度的咪鲜胺培养基中的菌丝生长情况最差；1000与1600倍浓度的咪鲜胺效果一般。
3.3.25种浓度咪鲜胺培养基中菌落的直径数据
将经过不同浓度处理的培养基放置恒温箱26°C恒温培养一个星期，测量5种浓度的咪鲜胺培养基中菌落的直径，每组处理有4次重复，共20个。
结果如表1.2所示：
表1.2在5种浓度的咪鲜胺培养基中培养1周后菌落的直径
咪鲜胺的浓度
1组直径（cm）
2组直径（cm）
3组直径（cm）
4组直径（cm）
平均值（cm）
800倍
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