不同浓度杀菌剂对平菇菌丝体生长的影响文档格式.doc

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2材料与方法…………………………………………………………………………8

2.1实验材料……………………………………………………………………8

2.2实验药品及仪器……………………………………………………………8

2.2.1多菌灵……………………………………………………………………8

2.2.2咪鲜胺……………………………………………………………………9

2.2.3甲基硫菌灵………………………………………………………………10

2.2.4三种药品的使用信息……………………………………………………11

2.2.5实验器材……………………………………………………………11

2.3实验方法…………………………………………………………12

3结果与分析………………………………………………………………………12

3.1三种杀菌剂对平菇菌丝的影响分析………………………………………12

3.1.1多菌灵对平菇菌丝生长的效果……………………………………13

3.1.2咪酰胺对平菇菌丝生长的效果……………………………………13

3.1.3甲基硫菌灵对平菇菌丝生长的效果……………………………………14

3.1.4关于三种杀菌剂的使用效果分析…………………………………………14

3.2使用三种杀菌剂后菌落的直径及数据分析…………………………14

3.3不同浓度杀菌剂对平菇菌丝生长的影响…………………………………15

3.3.15种浓度的咪鲜胺培养基中菌落的观察结果…………………………15

3.3.25种浓度咪鲜胺培养基中菌落的直径数据………………………18

3.4实验总结…………………………………………………………………19

4参考文献…………………………………………………………………………21

5谢辞……………………………………………………………………………23

文献综述

1.1平菇的基本特征及相关研究现状

1.1.1平菇的基本特征

平菇（Pleurotusostreatus）在真菌分类上属于担子菌纲，伞目，侧耳科，侧耳属，是我国目前栽培最多的4种主要的食用菌（蘑菇、香菇、草菇、平菇）之一【1】。

平菇的菌丝体在人工栽培的各个种菌丝体均白色，在琼脂培养基上洁白、浓密、气生菌丝多寡不等。

平菇的子实体由菌盖、菌褶和菌柄3部分组成。

（1）菌盖

平菇系大型菇类，菌盖宽为2～23cm。

初为圆形、扁平，成熟后则因种类不同发育成耳状（贝耳）、漏斗状、贝壳状、舌状等形态。

（2）菌褶

菌褶是平菇的有性繁殖器官，生于菌盖下方，呈扇形排列，形似刀片，裸露形。

（3）菌柄

偏生或侧生于菌盖的下方与菌肉紧密相连，柄表下延的菌褶，无菌环，白色中实，肉质或稍具有纤维质。

1.1.2平菇的营养价值

据统计，2009年全世界平菇总产量达36000吨。

平菇食味虽不如蘑菇鲜美，也不如香菇具有浓郁香味，但营养成分却很丰富。

平菇蛋白质含量为21.175%，是鸡蛋的2.6倍，猪肉的4倍，菠菜、油菜的15倍，比香菇高3.128%。

蛋白质中含有18种氨基酸，其中8种必须氨基酸8.38%，占氨基酸总量20.7%的35%以上，在所含18种氨基酸中，甲硫氨酸1.27%，比蘑菇（0.063%）、香菇（0.17%）都高得多。

此外平菇还有含有十分丰富的维生素B族，如VB20.135%微克，VC9.3%微克，VD0.12%微克（麦角固醇）；

以及含有钾、钠、钙、镁、锰、铜、锌、硫等14种微量元素【2】。

平菇性味甘、温。

具有追风散寒、舒筋活络的功效。

用于治腰腿疼痛、手足麻木、筋络不通等病症。

平菇中的蛋白多糖体对癌细胞有很强的抑制作用，能增强机体免疫功能。

常食平菇不仅能起到改善人体的新陈代谢，调节植物神经的作用，而且对减少人体血清胆固醇、降低血压和防治肝炎、胃溃疡。

十二指肠溃疡、高血压等有明显的效果。

另外，对调节妇女更年期综合征、改善人体新陈代谢、增强体质都有一定的好处。

据日本学者研究【3】，平菇还含有平菇素（蛋白糖）和酸性多糖体等生理活性物质，对健康、长寿、防治肝炎病等作用甚大（用平菇能制肝宁片），对防治癌症也有一定的效果；

还有抑制癌细胞增生的功能，能诱导干扰素的合成。

尤其近年经研究已知平菇等食用菌中，普遍含有能刺激机体产生干扰素的诱导物质（能抑制病毒的抗体），这种物质总称叫“蘑菇核糖酸”（MUSHROOm—vrna），它能强烈地抑制病毒增生。

所以常吃平菇等菌类食品，能减少“流感”、肝炎等病毒性感染的疾病，尤其能抵御现代流行“非典”等病毒入侵的作用。

1.1.3国内外对平菇栽培的研究现状

食用菌栽培过程中常会遭受各种病菌侵害，其中木霉菌（Trichodermaviride）是最常见、最重要的病菌之一【4】。

它不仅污染菌种和培养料，造成菌种或菌筒（袋）报废，同时还可寄生在食用菌菌丝和子实体上引起寄生性病害。

木霉菌丝生长速度极快，感染后会迅速生长占据食用菌生长空间和争夺养分，同时还分泌有毒物质，毒害食用菌菌丝体，使其死亡崩溃造成烂筒，危害性极大。

对木霉菌的防治，目前尚无十分有效的措施，生产上常用多菌灵来防治杂菌污染，但效果普遍不理想【5】。

国内许多研究者也曾进行过多种其他药物防霉试验，但至今未能筛选出一种效取代多菌灵的药物。

在平菇的栽培过程中，防治杂菌及虫害侵染是一个重要问题。

以抑制杂菌和虫害的作用强，而对平菇菌丝生长影响小，平菇能获高产、稳产为原则，人们对众多高效、低毒、低残留的农药进行了筛选。

王振河【6】先后研究了多菌灵、菇耳康和克霉灵对绿色木霉（Trichodermaviride）和平菇菌丝体生长的影响，综合考虑得出，稀释4000倍的50％多菌灵可湿性粉剂（青岛益农化lT有限公司生产）效果较佳。

朱将伟【3】研究百菌清、甲基硫菌灵、多菌灵、代森锰锌和咪鲜胺（施保功）对多种霉菌（绿色木霉、产黄青霉（Penicilliumchrysogenum）和匐枝根霉（Rhizopusnigicas））和平菇菌丝体生长的影响，研究表明，50％咪鲜胺可湿性粉剂（施保功）对霉菌具有很好的抑制效果，而且对平菇菌丝的影响很小。

氨基寡糖素是一种安全无毒、可有效防治一些真菌病害，提高经济作物的抗病性的农药。

王谦、王璞等【7】研究结果表明，4％氨基寡糖素原液2000倍液、1000倍液分别对平菇特抗96、西德99的菌丝生长有显著促进作用。

1.2平菇生产中杀菌剂的选取

在食用菌栽培生产过程中，很容易受到各种病菌的伤害。

在杀菌消毒环节如果操作不当，很容易导致食用菌污染甚至死亡【14】。

使用杀菌剂可以有效的防治污染杀灭杂菌，但是在杀菌的同时也会不同程度的影响菌体生长，因此在食用菌栽培过程中，选取灭菌效果佳，对菌体伤害小的杀菌剂是很重要的。

本文通过选用三种常用杀菌剂进行试验研究，观察对比多菌灵，咪鲜胺，甲基硫菌灵三种杀菌剂对平菇菌丝生长的影响，再选出效果最佳的杀菌剂，研究不同浓度的同一杀菌剂比平菇菌丝的影响。

从而得出对平菇菌丝影响最小的杀菌剂。

1前言

平菇在生物分类学中隶属于真菌门担子菌纲伞菌目白蘑科侧耳属，学名：

[Pleurotusostreatus（Fr.）Kummer]，中文商品名：

平菇，地方名：

北风菌、蚝菌等。

其是栽培广泛的食用菌。

平菇具有很高的营养价值和研究价值，平菇有含丰富的营养物质，每百克于品含蛋白质20—23克，而且氨基酸成分种类齐全，矿物质含量十分丰富，对人的健康、长寿、防治肝炎病等作用甚大（用平菇能制肝宁片），具有追风散寒、舒筋活络的功效。

对防治癌症也有一定的效果；

在平菇的栽培生产中，杀灭杂菌是很重要的环节。

目前在食用菌生产中应用的杀菌剂很少。

因此筛选出既能有效地控制霉菌污染，又不影响食用菌正常生长发育的杀菌剂是十分必要的【8】。

本文选取3种常用的杀菌剂（多菌灵，咪鲜胺，甲基硫菌灵）进行对比研究，通过实验选出效果最佳的杀菌剂，再进行浓度分析对比。

旨在选出最适合实际生产应用的杀菌剂及其浓度范围，从而用于平菇的栽培养殖。

2材料与方法

2.1实验材料

本实验以华中农业大学菌种实验中心生产的早丰平菇为材料，先将菌种活化，在PDA培养基上活化培养后，在无菌条件下接种到PDA平板中央，在恒温箱26°

C下恒温培养。

杂菌对实验的观测结果影响很大，所以菌种活化、培养、接种过程中都要保证无菌操作【15】。

2.2实验药品与仪器

2.2.1多菌灵

多菌灵（carbendazim）是一种高效、广谱、内吸性杀真菌剂，又名苯胼咪唑44号，由于具有高效低毒，残效期短的特点，在国内外广泛应用于食用菌的病害防治，是食用菌真菌病害防治最主要的杀菌剂【9】。

一、基本介绍

英文通用名称carbendazim　　

1.化学名：

N－（2－苯骈咪唑基）－氨基甲酸甲酯　　

2.分子式：

C9H9N3O2　　

3.结构式：

见图　　

4.分子量：

191.2　　

二、特性　　

多菌灵为无味的粉末，在215－217℃时开始升华，大于290℃时熔融，306℃时分解，不溶于水，微溶于丙酮、氯仿和其他有机溶剂。

可溶于无机酸及醋酸，并形成相应的盐，化学性质稳定。

三、作用特点及机理　　

多菌灵为高效低毒内吸性杀菌剂，有内吸治疗和保护作用。

干扰病原菌有丝分裂中纺锤体的形成，影响细胞分裂，起到杀菌作用。

四、药剂特性　　

纯品为白色结晶固体，原药为棕色粉末。

化学性质稳定，原药在阴凉、干燥处贮存2-3年，有效成份不变。

对人畜低毒，对鱼类毒性也低。

2.2.2咪鲜胺

咪鲜胺是一种广谱杀菌剂【10】，对多种作物由子囊菌和半知菌引起的病害具有明显的防效，也可以与大多数杀菌剂、杀菌剂、杀虫剂、除草剂混用，均有较好的防治效果。

对大田作物、水果蔬菜、草皮及观赏植物上的多种病害具有治疗和铲除作用【11】。

中英文通用名：

PROCHLORAZ（咪鲜胺）　　　　

化学名称：

N-丙基-N-[2-（2,4,6-三氯苯氧基）乙基]-咪唑-1-甲酰胺　　

分子式：

C15H16Cl3N3O2

分子量：

376.7　　

结构式：

如图所示　　

生物活性：

杀菌剂　　

理化性质：

熔点：

46.5-49.3℃蒸汽压：

（20℃）0.48mpa　　

溶解度（25℃）：

水55g/L,二氯甲烷、甲苯中>

600g/L。

稳定性：

在日光下降解，在正常贮存条件下稳定，在强酸、强碱条件下稳定。

　　动物毒性：

大白鼠急性经口LD50>

1600mg/kg。

属低毒级。

二、性能特点

　咪鲜胺为高效、广谱、低毒型杀菌剂，具有内吸传导、预防保护治疗等多重作用，内含咪鲜胺为咪唑类广谱杀菌剂。

通过抑制甾醇的生物合成而起作用，在植物体内具有内吸传导作用，对于子囊菌和半知菌引起的多种病害防效极佳。

采用基因诱导技术，激活植物抗病基因表达，内吸性强，速效性好，持效期长。

三、理化性质和制剂

　原药为浅棕色固体，有芳香味，难溶于水，易溶于丙酮、乙醇、二甲苯等溶剂。

常见制剂有25%施保克乳油，绿怡乳油，25%咪鲜胺乳油等。

2.2.3甲基硫菌灵

甲基硫菌灵是一种广谱性内吸低毒杀菌剂，具有内吸、预防和治疗作用。

它最初是由日本曹达株式会社研制开发出来的。

能够有效防治多种作物的病害【10】。

一、基本信息

英文通用名：

Thiophanate-Methyl　　

其他名称：

甲基托布津日友甲托（PD20081302）　　

1,2-二（3-甲氧碳基-2-硫脲基）苯　　

纯品为无色结晶，原粉（含量约93%）为微黄色结晶。

比重1.5（20℃），熔点172℃（分解），蒸气压949．1×

10-8Pa（25℃）。

几乎不溶于水，可溶于丙酮、甲醇、乙醇、氯仿等有机溶剂。

对酸、碱稳定。

属低毒性杀菌剂。

原药大鼠急性经口LD50为7500毫克/公斤，大鼠急性经皮LD50＞10000毫克/公斤。

对兔皮肤和眼睛无刺激作用。

在试验条件下无慢性毒性。

对鲤鱼LC50为11毫克/升（48h），蹲鱼LC50为8.8毫克/升（48h）。

对鸟类、蜜蜂低毒【12】。

剂型：

50%、70%可湿性粉剂，40%、50%胶悬剂，36%悬浮剂。

特点：

广谱杀菌剂，具有向顶性传导功能，对多种病害有预防和治疗作用。

对叶螨和病原线虫有抑制作用。

适用范围：

对禾谷类、蔬菜类、果树上的多种病害有较好的防治作用【13】。

2.2.4三种药品的使用信息

①多菌灵（有效成分50%）

剂型：

可湿型粉剂

净含量：

80g

企业名称：

江西英苏尔生物科技有限公司

②甲基硫菌灵（有效成分70%）

可湿性粉剂

40g

北京威远正红生物科技有限公司

③咪酰胺（有效成分：

25%）

乳油

10g

惠州市中迅化工有限公司

2.2.5实验器材

水浴锅，电子天平，纱布，烧杯，量筒，玻璃棒，称量纸，移液管，玻璃培养皿，恒温箱，高压灭菌锅，酒精灯，接种环，试管，棉塞等。

2.3实验方法

①配制供试培养基：

马铃薯一葡萄糖一琼脂培养基（简称PDA培养基），称取马铃薯（去皮）200g，葡萄糖2Og，琼脂2Og，水1000mL。

配制培养基时先将马铃薯在水浴锅中充分煮熟，再用纱布将水浴锅中的液体过滤入大烧杯中，再将滤液及葡萄糖，琼脂加入水浴锅中加热煮沸【16-18】。

待完全溶解之后定容至1000ml。

将1000ml培养液分别定量倒入4个1000ml锥形瓶中，密封好之后与玻璃培养基一起在121℃高压灭菌30分钟后冷却放置。

在超净工作台无菌条件下将培养液倒入各个培养基中，冷却放置【19】。

②菌种活化与同步：

将保存的平菇菌种在PDA培养基上活化培养后，在无菌条件下分别接种到PDA平板中央，每皿接1块直径约为1cm的菌种，于26℃恒温下培养2～6d后备用【20】。

③含不同杀菌剂的培养基的配制及接种：

以PDA为培养基，定量分装于4个三角烧瓶内灭菌，待培养基冷却至50℃左右时前3个分别加入多菌灵，咪鲜胺，甲基硫菌灵3种生物杀菌剂，最后1个不加杀菌剂。

将药剂摇匀后倒入培养皿，待凝固后分别接直径为5mm的供试菌种菌块，以不加杀菌剂的培养基作空白对照。

每一处理重复4次，共16个培养基，每个做好标记后置于25℃恒温箱下恒温培养。

观察1周后，筛选对菌丝影响最小的杀菌剂进行精确浓度的测试。

④含不同浓度杀菌剂培养基的配制及接种：

将筛选出的杀菌剂配制成600倍、800倍、1200倍、1400倍、1600倍5个浓度的含药培养基，倒平板，并进行标记，当培养基冷却凝固后接种。

以不加杀菌剂的培养基为对照。

用直径为6mm的打孔器沿活化后的菌种的菌落边缘取菌龄一致且大小相同的菌块，接种于不同浓度的含药培养基平板中央，每个含药培养基平板中央接一块菌种，菌丝面朝上。

共设5个处理，每处理3次重复。

接种后置25℃恒温箱中恒温培养。

平菇菌丝培养8天。

培养结束后测量菌丝生长速度，观察比较菌丝的生长势，对平均生长速度进行统计分析。

其中，菌丝生长速度（mm／d）=菌落直径÷

培养天数。

3结果与分析

3.1三种杀菌剂对平菇菌丝的影响分析

3.1.1多菌灵对平菇菌丝生长的效果

采用多菌灵时平菇菌丝的生长情况，如图1所示

图一平菇在多菌灵培养基中培养1周时的生长情况

3.1.2咪鲜胺对平菇菌丝生长的效果

采用咪鲜胺时平菇菌丝的生长情况，如图2所示：

图二平菇在咪鲜胺培养基中培养一周时的生长情况

3.1.3甲基硫菌灵对平菇菌丝生长的效果

甲基硫菌灵对平菇菌丝的影响，如图3所示:

图三平菇菌丝在甲基硫菌灵培养基中培养一周时的生长情况

3.1.4关于三种杀菌剂的使用效果分析

通过图1～图3的观察发现，图2中使用咪鲜胺的培养基上的平菇菌丝生长比图1和图2好，菌种直径和大小上都超过另外2个，此外，虽然不是很明显，但是还能观察到，图2的菌丝成色及质量优于图1和图2。

可见，添加了咪鲜胺的培养基对平菇菌丝的生长效果比较好。

3.2使用三种杀菌剂后菌丝的长度及数据分析

菌种分别接种到加入多菌灵，咪鲜胺，甲基硫菌灵及不加杀菌剂的培养基中，恒温培养一周后测量其直径，所得的数据如表1.1所示：

表1.1不同杀菌剂条件下菌落的直径

杀菌剂名称

A组直径（cm）

B组直径（cm）

C组直径（cm）

平均值（cm）

多菌灵

1.40

1.60

1.47

咪鲜胺

2.10

2.60

甲基硫菌灵

1.70

1.50

1.57

空白对照

4.00

3.00

3.80

3.60

注①：

三种杀菌剂均是稀释1000倍后加入培养基；

②：

空白对照没有加入杀菌剂，只加入了等量的蒸馏水。

通过表1.1可以得知，不加杀菌剂时，平菇在恒温箱内生长最好；

在3种杀菌剂中，在含咪鲜胺的培养基中菌落的直径明显大于多菌灵和甲基硫菌灵；

另外，甲基硫菌灵的效果则比多菌灵要好。

之后选取效果最好的咪鲜胺进行浓度梯度对比，通过实验观察，得出最佳浓度。

3.3不同浓度杀菌剂对平菇菌丝生长的影响

3.3.15种浓度的咪鲜胺培养基中菌丝的观察结果

将咪鲜胺分别稀释为800倍浓度、1000倍浓度、1200倍浓度、1400倍浓度、1600倍浓度，然后加入到PDA培养基中。

每种浓度4次重复，共20组，标记各组。

将菌种分别接种到含不同浓度杀菌剂的培养基中，恒温箱内26°

C恒温放置1周后观察菌丝生长情况。

各组菌丝生长情况如图4～8所示：

图四800倍咪鲜胺培养基中菌丝的生长情况

图五1000倍咪鲜胺培养基中菌丝的生长情况

图六1200倍咪鲜胺培养基中菌丝的生长情况

图七1400倍咪鲜胺培养基中菌丝的生长情况

图八1600倍咪鲜胺培养基中菌丝的生长情况

通过图四～图八的观察发现，菌丝生长情况最好的是1600倍浓度的咪鲜胺培养基；

800倍浓度的咪鲜胺效果次之，1200倍浓度的咪鲜胺培养基中的菌丝生长情况最差；

1000与1600倍浓度的咪鲜胺效果一般。

3.3.25种浓度咪鲜胺培养基中菌落的直径数据

将经过不同浓度处理的培养基放置恒温箱26°

C恒温培养一个星期，测量5种浓度的咪鲜胺培养基中菌落的直径，每组处理有4次重复，共20个。

结果如表1.2所示：

表1.2在5种浓度的咪鲜胺培养基中培养1周后菌落的直径

咪鲜胺的浓度

1组直径（cm）

2组直径（cm）

3组直径（cm）

4组直径（cm）

800倍

1.