分子生物学实验.docx
《分子生物学实验.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《分子生物学实验.docx（19页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。
分子生物学实验
生命科学与技术学院
分子生物学
实验
[教学讲义]
专业：
生物科学、生物技术
2013-2014学年秋季学期
目录
1实验说明
2实验内容
实验一分子生物学实验常用试剂配制
实验二基因组DNA的不同提取方法对比
实验三琼脂糖凝胶电泳检测DNA
实验四PCR基因扩增
实验五大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
实验六质粒DNA的提取
实验说明
一、课程安排
分子生物学实验是生物科学、生物技术专业的一门专业必修课，是分子生物学理论课的实验实践课程。
分子生物学技术作为现代生物技术中最为先进的实验手段之一，现已渗透到生命科学、医学及农业、生产等各个领域，是一种非常重要的现代技术手段。
通过此课程使学生了解分子生物学技术发展的现状、未来及应用，使学生掌握分子生物学技术的基本原理及有关的实验操作技术，提高学生的动手能力，为专业课程的学习及参加科研实践打下基础。
在实验教学过程中，要求学生实验前认真预习实验讲义，实验中亲自动手操作，善于观察，作好实验记录，实验结束后详细整理、统计、分析实验结果，写出规范的实验报告。
考核内容应包括平时表现、实验报告、仪器设备操作使用情况、遵守实验室工作规章制度情况等。
平时成绩包括考勤与课堂表现（10％）、实验操作及实验报告占（40％）；以每次实验结束时随机抽考（30％）和期末闭卷笔试（20％）作为课程考核形式。
教学时间安排如下：
进度
周次
课时
教学内容
（章节）
1
材料准备
2
材料准备
3
实验室规章制度及安全教育
4
3
实验一分子生物学实验常用试剂配制
5
4
实验二基因组DNA的不同提取方法对比（上）
6
国庆放假
7
4
实验二基因组DNA的不同提取方法对比（下）
8
3
实验三琼脂糖凝胶电泳检测DNA
9
4
实验四PCR基因扩增（上）
10
3
实验四PCR基因扩增（下）
11
5
实验五大肠杆菌感受态细胞的制备及转化（上）
12
3
实验五大肠杆菌感受态细胞的制备及转化（下）
13
4
实验六质粒DNA的提取（上）
14
3
实验六质粒DNA的提取（下）
二、学习方法
确定实验目的及实验材料
确定实验方案
确定实验材料和试剂是否符合要求
确定实验材料和仪器是否可用
制定试验进度表
在记录本上记录实验流程
进行预实验以确定实验流程是否可行
开展正式实验
注意：
1.忠于实验流程；
2.注意实验要点；
3.准备充足的实验材料；
4.设平行对照试验；
5.准确的试剂用量；
6.数据整理。
三、实验室规则与安全
1.保持肃静。
不许喧哗、打闹、创造整洁、安静、有序的实验环境。
2.保持整洁。
实验时须穿白大褂，实验结束后应清洁器材和工作台，彻底清洗实验用品，物归原主，实验废品丢到指定位置，不能随意乱丢。
3.严格操作。
认真预习，切忌盲目，做好准备，提高效率。
实验时严格遵守操作规程，仔细观察，作好记录，认真书写实验报告。
枪尖、滴管等专液专放，以防交叉污染。
使用仪器须在教师指导下进行，不得随意乱动。
4.注意节约。
5.注意安全。
四、分子生物学实验常用技术与应用
IPTG诱导法
实验一分子生物学实验常用试剂配制
一、实验目的与要求
（1）了解分子生物学实验常用试剂配制方法；
（2）掌握试剂配制的基本技能。
二、实验内容
分子生物学所用试剂必须是分析纯或分子生物学试剂级。
溶液配制所用水尽可能使用灭菌、蒸馏、去离子的水。
除非有特殊说明，大部分配制的溶液需用0.22μm孔径滤膜过滤除菌或者高压灭菌。
使用高压灭菌的水、灭过菌的容器以及灭过菌的贮液来配制溶液，会延长所配溶液的使用时间。
用干燥的化学试剂和无菌水配制的溶液一般不需要再灭菌；有些酸、碱和一些有机化合物也不需要灭菌，因为微生物不能在这些溶液中生长。
制备的溶液应分为小份保存。
如果没有特殊的说明，则所有的贮液和缓冲液至少能在室温下贮存6个月。
作为贮存液应贮存在4℃或-20℃，使用时取出待达到室温后再开启，以防止试剂内的缩合作用，以确保度量精确。
三、常用试剂配制：
1、LB培养基（最常用的培养基，用于大肠杆菌的培养。
添加氨苄青霉素的LB培养基长写作LA培养基）
将下列组分溶解在0.9L水中：
蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g，用1mol/LNaOH调整pH至7.0，再补足水至1L。
ps：
琼脂平板需添加琼脂粉15g/L。
2、氨苄青霉素（100mg/mL）
溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10mL。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25μg/mL—50μg/mL的终浓度添加于生长培养基。
3、溶液Ⅰ（pH8.0）
葡萄糖50mmol/L、Tris-HCl25mmol/L、EDTA10mmol/L
4、溶液Ⅲ
5mol/L乙酸甲60mL、冰醋酸11.5mL、水28.5mL
5、TE缓冲液（pH8.0）
10mmol/LTris－HCl、1mmol/LEDTA
6、0.5mol/LEDTA（pH8.0）
80mL水中加所需的EDTA-Na2和2gNaOH，再用5mol/LNaOH调pH8.0，待EDTA完全溶解后定容至100mL。
7、5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液
Tris碱54g/L、硼酸盐27.5g/L、0.5mol/EDTA20mL/L
8、氯仿：
异戊醇（24:
1）
9、Tris饱和酚：
氯仿：
异戊醇（25:
24:
1）
预习作业：
1、实验中试剂级别如何选择
2、实验中水质的选择有何依据
实验二基因组DNA的不同提取方法对比
一、实验目的与要求
（1）了解常规提取基因组DNA的原理；
（2）掌握常规提取基因组DNA的步骤；
（3）比较不同提取方法在提取步骤、提取效果及运用范围等方面的差别。
二、实验原理
基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交（包括RFLP）及PCR分离基因等。
利用基因组DNA较长的特性，可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。
加入一定量的异丙醇或乙醇，基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中，可用玻棒将其取出，而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部，从而达到提取的目的。
在提取过程中，染色体会发生机械断裂，产生大小不同的片段，因此分离基因组DNA时应尽量在温和的条件下操作，如尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓，以保证得到较长的DNA。
一般来说，构建基因组文库，初始DNA长度必须在100kb以上，否则酶切后两边都带合适末端的有效片段很少。
而进行RFLP和PCR分析，DNA长度可短至50kb，在该长度以上，可保证酶切后产生RFLP片段（20kb以下），并可保证包含PCR所扩增的片段（一般2kb以下）。
不同生物（植物、动物、微生物）的基因组DNA的提取方法有所不同；不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，分离方法也有差异。
在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法，以获得可用的DNA大分子。
尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用，因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时，应考虑除去多糖和酚类物质。
本实验以大型真菌菌丝体为材料，学习基因组DNA提取的一般方法。
三、试剂
1.SDS提取缓冲液（pH8.0）
50mmol/LTris-HCl、100mmol/LEDTA、50mmol/LNaCl、1%SDS、1%β-巯基乙醇
2.CTAB提取缓冲液（pH8.0）
50mmol/LTris-HCl、50mmol/LEDTA、1.4mol/LNaCl、3%CTAB、3%PVP40
3．改良CTAB提取缓冲液（pH=8.0）
100mmol/LTris-HCl、0.82%NaCl、20mmol/LEDTA、4%CTAB、0.2%PVP40
四、实验步骤
A、SDS法
1、刮取200mg菌丝，加入750μlSDS提取缓冲液迅速研磨至匀浆后转移至1.5ml无菌离心管中；
2、65℃水浴45min后加入750μl饱和酚抽提1次，12000r/min离心10min，取上清转到另一1.5ml无菌离心管中，加等体积的酚/氯仿/异戊醇（25∶24∶1）；
3、上下颠倒摇匀后离心5min，取上清，加等体积的氯仿/异戊醇（24∶1）；
4、上下颠倒摇匀后离心3min，取上清，加入2倍体积的无水乙醇和1/10倍体积的3mol/LNaCl，-20℃沉淀30min，12000r/min离心20min；
5、弃上清，70%酒精洗涤3次，超净工作台倒置进行干燥；
6、加50μlTE溶解DNA，-20℃保存备用。
B、CTAB法
1、刮取200mg菌丝，加入750μlCTAB提取缓冲液后迅速研磨至匀浆，转移至1.5ml无菌离心管中；
2、65℃水浴45min，12000r/min离心10min；
3、取上清（水相）于一新离心管中，加等体积的酚/氯仿/异戊醇（25∶24∶1），12000r/min离心10min；
4、取上清，加等体积的氯仿/异戊醇（24∶1），12000r/min离心10min；
5、取上清，加2倍体积的无水乙醇，-20℃沉淀30min，12000r/min离心20min；
6、收集沉淀，70%酒精冲洗，超净台真空干燥；
7、50μlTE溶解DNA，-20℃保存备用。
C、改良CTAB法
1、刮取200mg菌丝，加入750μl改良CTAB提取缓冲液后迅速研磨至匀浆，转移至1.5ml无菌离心管中；
2、在离心管中加入0.4%改良CTAB提取缓冲液体积的β-巯基乙醇充分混匀后65℃水浴30min，12000r/min离心10min；
3、将水浴的离心管取出置于室温下，待冷却至室温后加等体积的氯仿/异戊醇（24∶1），摇匀3min，12000r/min室温离心10min；
4、弃上清和下液，保留中间固相层，重新加入750μl改良CTAB提取缓冲液充分混匀，65℃水浴约1.5h；
5、1.5h后，取出离心管，收集上清液，加入等体积的异丙醇，充分混匀后，-20℃沉淀30min，12000r/min离心20min，收集沉淀；
6、收集沉淀，70%酒精洗涤2次，超净台室温干燥；
7、50μlTE溶解DNA，-20℃保存备用。
预习作业：
实验中用到各组试剂的作用。
实验三琼脂糖凝胶电泳检测DNA
一、实验目的与要求
（1）了解琼脂糖凝胶电泳的原理；
（2）掌握琼脂糖凝胶的制备及电泳检测DNA的方法。
二、实验原理
琼脂糖凝胶电泳是分离和纯化DNA片段的常用技术。
把DNA样品加入到一块包含电解质的多孔支持介质（琼脂糖凝胶）的样品孔中，并置于静电场上。
由于DNA分子的双螺旋骨架两侧带有含负电荷的磷酸根残基，因此在电场中向正极移动。
在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应。
具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度不一样，因而可依据DNA分子的大小来使其分离。
凝胶电泳不仅可分离不同分子质量的DNA，也可以分离相对分子质量相同，而构型不同的DNA分子。
在电泳过程中可以通过示踪染料或相对分子质量标准参照物和样品一起进行电泳而得到检测。
相对分子质量标准参照物相对可以提供一个用于确定DNA片段大小的标准。
在凝胶中加入少量溴化乙锭（ethidiumbromide,EB），其分子可插入DNA的碱基之间，形成一种络合物，在254～365nm波长紫外光照射下，呈桔红色荧光，因此也可对分离的DNA进行检测。
一般琼脂糖凝胶电泳适用于大小在0.2kb～50kb范围内的DNA片段。
本实验介绍琼脂糖凝胶的制备以及琼脂糖凝胶电泳在DNA片段分离中的应用方法。
三、仪器及试剂
1.仪器及耗材：
水平电泳槽、电泳仪、凝胶成像分析系统、微波炉、微量移液器、透明胶带、点样板或parafilm、100mL或250mL锥形瓶、量筒、吸头等。
2.试剂及配制：
5×TBE缓冲液
溴化乙啶贮存液：
10mg/mL溴化乙啶
10×凝胶加样缓冲液：
0.4%溴酚蓝，60%蔗糖
DNA样品
DNALadder
琼脂糖
四、操作步骤
1.制备1％琼脂糖凝胶（大胶用70mL，小胶用50mL）：
称取0.7g（0.5g）琼脂糖置于锥形瓶中，加入70mL（50mL）1×TBE，瓶口倒扣小烧杯，微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化，摇匀，即成1.0%琼脂糖凝胶液。
待胶液冷至60℃左右时，加入溴化乙锭溶液2-3μl，轻轻混匀。
2.胶板制备：
取电泳槽内的有机玻璃内槽（制胶槽）洗干净、晾干，放入制胶玻璃板。
取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好，形成模子。
将内槽置于水平位置，并在固定位置放好梳子。
将冷却到60℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上，使胶液缓慢展开，直到整个玻璃板表面形成均匀胶层。
室温下静置直至凝胶完全凝固，垂直轻拔梳子，取下胶带，将凝胶及内槽放入电泳槽中。
添加1×TBE电泳缓冲液至没过胶板为止。
3.加样：
在点样板或parafilm上以10:
1的比例混合DNA样品和加样缓冲液。
用10μl微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内，每加完一个样品，应更换一个加样头，以防污染，加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面。
（注意：
加样前要先记下加样的顺序）。
4.电泳：
加样后的凝胶板立即通电进行电泳，电压60－100V，样品由负极（黑色）向正极（红色）方向移动。
电压升高，琼脂糖凝胶的有效分离范围降低。
当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时，停止电泳。
5.观察照相：
在紫外灯下观察，DNA存在则显示出红色荧光条带，采用凝胶成像系统拍照保存。
预习作业：
电泳的原理。
实验四PCR基因扩增
一、实验目的与要求
（1）掌握PCR反应的基本原理；
（2）了解PCR的基本操作流程。
二、实验原理
聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction，PCR）是一种体外核酸扩增系统，其原理类似DNA分子的天然复制过程，是将在待扩增的DNA片段和与其两侧互补的两个寡聚核苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后，DNA扩增2n倍。
该技术已成为分子生物学中一种有助于DNA克隆及基因分析的必需工具。
PCR的工作程序实际上是一个在模板DNA、一对已知序列的寡核苷酸引物和四种脱氧核苷酸等存在的情况下，DNA聚合酶依赖的酶促合成反应。
扩增的特异性取决于引物与模板DNA的结合。
整个扩增过程分三步：
①变性，加热使模板DNA双链间的氢键断裂而形成两条单链；②退火，突然降低温度后模板DNA引物按碱基配对原则互补结合，也存在两条模板链之间的结合，但由于引物的高浓度、结构简单等特点，主要的结合发生在引物与模板之间；③延伸，在DNA聚合酶及镁离子等的存在条件下，从引物的3′端开始，结合单核苷酸，形成与模板链互补的新的DNA链。
完成以上三步为一个循环，每经过一个循环，样本中的DNA量就增加一倍，新形成的DNA链又成为下一轮循环的模板。
经过25～40个循环后，DNA可扩增106～109倍。
现用图示说明PCR原理:
三、仪器及试剂
1.仪器：
PCR仪、台式离心机、移液器及吸头、PCR薄壁管、电泳仪等
2.试剂：
1）10×PCR缓冲液配制（部分随Taq酶提供）：
750mmol/LTris-HCl、200mmol/L（NH4）2SO4、0.1%Tween-20
2）模板DNA
3）dNTP混合液
4）Taq聚合酶
5）上游和下游寡核苷酸引物
ITS1：
TCCGTAGGTGAACCTGCGG
ITS4：
TCCTCCGCTTATTGATATGC
四、操作步骤
1、用无菌去离子水将提取的菌丝体基因组DNA稀释至20ng/µl，-20℃保存备用；
2、PCR反应体系（25µl）如下:
10×PCR缓冲液2.5µl
25mmol/LMgCl22.0µl
2.5mmol/LdNTP1.5µl
2mmol/Lprimer2ulx2
TaqDNApolymerase1U
DNA（20ng/µl）2µl
不足25µl的体积用无菌去离子水补足。
每次反应均以无菌去离子水替代模板DNA作为对照。
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
3、将上述试剂依次加入PCR薄壁管。
加样后用手轻弹混匀，6000rpm离心15sec使反应成分集于管底。
4、PCR反应热循环程序设置：
1）预变性：
94℃2min
2）变性：
94℃40s
3）退火：
58.9℃40s
4）延伸：
72℃100s
5）补平：
72℃10min
重复步骤2-4共35个循环
5、反应结束后短暂离心，扩增产物少量用1%琼脂糖凝胶在1×TBE电泳缓冲液中电泳，以凝胶成像系统检测并记录扩增产物在琼脂糖凝胶上的图谱，其余置4℃保存备用。
预习作业：
PCR的原理。
实验五大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
一、实验目的与要求
（1）掌握感受态细胞的制备（CaCl2）原理和方法；
（2）掌握质粒的转化、重组质粒的筛选和鉴定方法；
二、实验原理
体外连接的重组DNA分子导入合适的宿主细胞中才能大量的进行复制、增殖和表达。
研究发现，用含Ca2+的溶液处理大肠杆菌细胞会易于吸收外源DNA。
大肠杆菌吸收外源DNA的过程被称为转化。
细菌处于容易吸收外源DNA的状态称为感受态。
用理化方法可以诱导细胞进入感受态，如电转化法、CaCl2法。
CaCl2法是目前实验室常用的制备感受态细胞的方法，其原理是使细菌处于0℃、CaCl2低渗溶液中，细胞膨胀成球形，细胞膜的通透性发生改变，外源DNA附着于细胞膜表面，经42℃短时间热冲击处理，促进细胞吸收DNA复合物。
宿主细胞一般是限制―修饰系统缺陷的变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株，而质粒载体携带有某一抗生素抗性基因，如抗氨卞青霉素的基因（AP＋）。
若将转化的细胞涂布与于含氨卞青霉素的平板上，则只有那些含有被转化质粒的细胞才能生存并生长增殖。
从而可以筛选出哪个克隆含有质粒。
本实验以E.coliJM109菌株为受体细胞，用CaCl2处理受体菌使其处于感受态，然后与质粒pGEM-TEASY共保温实现转化。
将经过转化后的全部受体细胞进行适当稀释，在含有氨卞青霉素的平板培养基上培养，只有转化体才能存活，而未有转化的受体细胞则因无抵抗氨卞青霉素的能力而死亡。
转化子经过扩增后，可将转入的质粒DNA分离提取出来，用于电泳分析、限制性内切酶图谱的制作以及DNA测序等实验。
三、仪器及试剂
1.仪器：
恒温摇床、电热恒温培养箱、电热恒温水浴锅、超净工作台、分光光度计、高速冷冻离心机、台式离心机。
3.试剂：
LB培养基
氨苄青霉素
0.1mol/LCaCl2溶液
四、操作步骤
1.感受态细菌的制备：
（1）用接种环从E.coliJM109菌平板上挑取一单克隆菌落，接种于装有5mLLB液体培养基的试管中中，37℃220rpm振荡培养过夜（12～16h）。
（2）取0.5mL过夜菌液接种到装有50mLLB液体培养基三角瓶中，37℃，220rpm振荡培养2－3h，隔20－30min测量OD600值，至OD600值为0.3-0.4。
无菌条件下将细菌转至1.5mL离心管中，每管1mL菌液，按需要决定管数。
（3）4℃，12000rpm，离心2min，以回收细菌。
（4）倒净上清液，倒置离心管于滤纸上1min，使残留的痕量培养液流尽。
每管加1mL冰预冷的0.1mol/LCaCl2悬浮细胞，冰浴30min。
（5）4℃，12000rpm，2min。
（6）倒净上清液，倒置离心管1min，使残留液流尽。
每管加100μl冰预冷的0.1mol/LCaCl2重新悬浮细胞（重悬时操作要轻），即成感受态细胞悬浮液。
2.细菌转化：
（1）取3只灭菌的Ep管，分别编号1、2、3、分别加入以下各组分：
加入质粒DNA2μl，同时做两个对照组：
1号：
受体菌对照组：
100μl感受态细胞悬浮液+2μl无菌ddH2O
2号：
质粒DNA对照组：
100μl0.1mol/LCaCl2+2μlpGEM-TEASY
3号：
正常转化组：
100μl感受态细胞悬浮液+2μlpGEM-TEASY
（2）轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴30min，促进DNA分子在感受态细胞表面的吸附。
（3）转入42℃水浴2min，通过热刺激增强CaCl2的作用，使细胞膜产生通道，便于DNA分子的吸附进入，提高转化率。
（4）迅速转入冰上冷却2min，修复细胞膜。
（5）加600μl无抗生素LB液体培养液，摇匀后于37℃，220rpm，振荡60min。
使受体菌恢复正常生长状态，并且表达Ampicillin抗性基因。
（6）取200μl菌液涂在含Ampicillin的LB平板，将平板置于无菌台直至液体被吸收，37℃恒温培养箱倒置培养12－16h后观察结果，其余保存于4℃。
如果平板上没有长出菌落，可将之置于37℃恒温培养箱继续培养，同时将剩下的500μl菌液离心，倒掉大部分上清，留100μl左右，用移液器吹打重悬，再全部涂于含Ampicillin的LB平板上，置37℃培养。
（7）观察并记录转化子出现的数目，计算转化率。
预习作业：
1、实验的原理。
2、实验设对照的目的。
实验六质粒DNA的提取
一、实验目的与要求
（1）掌握制备质粒DNA的原理方法；
（2）掌握碱裂解法提取质粒的步骤。
二、实验原理
细菌质粒是一类双链、闭环的DNA，大小范围从1kb至200kb以上不等。
各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份，通常情况下可持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定条件下也会可逆地整合到寄主染色体上，随着染色体的复制而复制，并通过细胞分裂传递到后代。
一般分离质粒DNA的方法都包括3个步骤：
①培养细菌，使质粒DNA大量扩增；②收集和裂解细菌；③分离和纯化质粒DNA。
分离制备质粒DNA的方法很多，其中常用的方法有碱裂解法、煮沸法、SDS法、羟基磷灰石层析法等。
在实际操作中可以根据宿主菌株类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒DNA的用途进行选择。
本实验介绍碱裂解法提取质粒DNA。
碱裂解法提取质粒DNA是根据共价闭合环状质粒DNA和线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离质粒DNA。
在pH值介于12.0-12.5这个狭窄的范围内，线性的DNA双螺旋结构解开而被变性，尽管在这样的条件下，共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂，但两条互补链彼此相互盘绕，仍会紧密地结合在一起。
当加入pH4.8乙酸钾高盐缓冲液恢复pH至中性时，因为共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在一起，因此复性迅速而准确，而线性的染色体DNA的两条互补链彼此已完全分开，复性就不会那么迅速而准确，它们相互缠绕形成不溶性网状结构，而复性的质粒DNA恢复原来构型，保持可溶性状态。
通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA，蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去，最后用酚氯仿抽提纯化上清液中的质粒DNA。
三、仪器及试剂
1、仪器及耗材：
37℃恒温摇床、冷冻离心机、台式离心机、微量移液器、50mL离心管、1.5mL离心管、枪头、各种规格的量筒、接种环、试剂瓶、100mL或者250mL三角瓶、玻
升级会员 