高考生物大一轮复习第2讲微生物的培养与应用真题演练新人教版选修1Word文档下载推荐.docx
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以NHNQ为氮源的细菌有很多种。
如果选用含有NHNQ的其他两组，
会在培养基中长出以NHNQ为氮源的杂菌，不能起到筛选作用。
（3）KH2PQ和N&
HPQ为无机
盐，可以提供营养物质，并能维持渗透压，同时HpQ「和HbPQ为一对缓冲对，所以可以维
持细胞生长过程中pH的稳定。
2.（2017年江苏卷）苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。
小明
同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。
请回答下
列冋题:
（1）酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、&
HPQMgSQ苯酚和水，其中可作为碳源的有
（2）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐，以达到富
集酚降解菌的目的。
若上图平板中菌落过于密集，应进一步，以便于菌落
计数与分离。
制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加
⑶下图为连续划线法示意图，在图中（填图中序号）区域更易获得单菌落。
（4）采用比色测定法（使用苯酚显色剂）检测降解后的废水中苯酚残留量。
先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中第1〜5号比色管的苯酚浓度应分别为
AvV口
吕号
1
2
3
4
5
6
苯酚浓度/（mg•L'
）
如果废水为50mg/L苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，则需将残留液稀释
（填序号：
①5②10③20）倍后，再进行比色。
（1）蛋白胨、苯酚
（2）增加稀释涂布凝固剂
（3）③
（4）0、0.2、0.4、0.6、0.8③
【解析】本题考查土壤微生物的分离及计数。
（1）培养基中的营养物质一般都包括水、
无机盐、碳源、氮源，其中蛋白胨和苯酚中含有C元素，可作为碳源。
（2）要富集该菌，应
提高营养物质含量。
若菌落过于密集，说明稀释倍数太小，应进一步稀释，然后再划平板。
制备固体培养基时需加入凝固剂琼脂。
（3）用平板划线法接种菌体，随划线次数的增加，菌
体数量逐渐减少，故③区域更易获得单菌落。
（4）题中已给出6号比色管中的苯酚浓度为1
mg/L,根据浓度梯度的设计原则以及空白对照原则，1〜5号比色管中的苯酚浓度应依次为0
mg/L、0.2mg/L、0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L。
若废水中苯酚的浓度为50mg/L，降解
后约有21%的苯酚残留，则降解后废水中苯酚的浓度为50X21%=10.5（mg/L），因为比色管
中苯酚的浓度范围为0〜1mg/L，若将降解后的废水稀释5倍或10倍，则稀释后废水中苯
酚的浓度均大于1mg/L,若稀释20倍，则稀释后废水中苯酚的浓度为0.525mg/L,介于0〜
1mg/L之间，故需将降解后的废水稀释20倍后再进行比色。
3.（2016年全国新课标I卷）空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。
某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。
实验步骤如下：
1配制培养基（成分：
牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、H2O）;
2制作无菌平板；
3设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；
4将各组平板置于37C恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。
回答下列问题：
（1）该培养基中微生物所需的氮来源于。
若要完
成步骤②，该培养基中的成分X通常是。
2步骤③中，实验组的操作是
（3）若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了现象。
若将
30（即36－6）个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法（填“正确”或“不正
确”）。
【答案】
（1）牛肉膏、蛋白胨琼脂
（2）将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段时间
（3）污染不正确
【解析】
（1）牛肉膏和蛋白胨都含有蛋白质的水解产物，都可以作为氮源；
平板为固体培养基，故需要加入凝固剂琼脂。
（2）实验探究的是教室内“不同高度空气”中微生物的分布，其中自变量为不同高度，故需在不同高度下放置开盖平板。
同时，为了保证单一变量，需要保证开盖放置的时间一致。
为了保证实验的可靠性，需要设置多个平行组。
（3）在完全
正确的操作情况下，空白对照组中不应出现菌落。
若出现菌落，则表明操作过程中存在杂菌污染的现象，属于实验失误，所有实验数据均不应采用。
4.（2016年全国新课标川卷）某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。
分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。
（1）分离纯化乳酸菌时，首先需要用对
泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是。
（2）推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有和
。
分离纯化时应挑选出的菌落作为候选菌。
（3）孚L酸菌在—20C长期保存时，菌液中常需要加入一定量的（填“蒸馏
水”“甘油”或“碳酸钙”）。
【答案】
（1）无菌水泡菜滤液中乳酸菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落
（2）鉴别乳酸菌中和产生的乳酸（或酸）具有透明圈
（3）甘油
（1）分离纯化乳酸菌过程中，需要在固体培养基上培养乳酸菌并得到单菌落。
由于泡菜滤液中菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落，故分离纯化乳酸菌时，首先需
要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释。
（2）由于乳酸菌代谢产生的乳酸可以溶解培养基中的
碳酸钙，形成透明圈，故培养基中加入碳酸钙可用于鉴别乳酸菌，同时碳酸钙也可以中和乳
酸菌产生的乳酸。
（3）乳酸菌在—20C长期保存时，菌液中需要加入一定量的甘油，加甘油是为了避免水结冰产生冰晶损伤细胞。
5.（2016年四川卷）图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的
6.
逐级桃取
mRN/部分序列。
7UGAGUGAGAAAUUUGGL卜・・
LOe细菌选择
丄加样脇培养基培莽慕
图屮
阳“表示从起始密码开始算起的賊慕序号）图乙
（1）图中选择培养基应以作为唯一氮源；
鉴别培养基还需添加作指示
剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成色。
（2）在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品液0.1mL,培养一段
时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。
该过程采取的接种方
法是，每克土壤样品中的细菌数量为X108个；
与血细胞计数板计数
法相比，此计数方法测得的细菌数较。
（3）现有一菌株的脲酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的mRNA在图乙箭头所示位
置增加了70个核苷酸，使图乙序列中出现终止密码（终止密码有UAGUGA和UAA）。
突变基
因转录的mRNA中，终止密码为，突变基因表达的蛋白质含个氨基酸。
（1）尿素酚红红
（2）稀释涂布平板法1.75少
（3）UGA115
（1）脲酶能够催化尿素分解为氨，故图中选择培养基应以尿素作为唯一氮源。
由于尿素被分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，使酚红指示剂变红色。
（2）用于
计数细菌菌落数的接种方法是稀释涂布平板法，统计的菌落数应介于30〜300之间，故选择
细菌菌落数为156、178和191的平板计数，每克土壤样品中的细菌数量为（156+178+
191）十3-0.1X105=1.75X108（个）。
由于两个或多个细菌连接在一起时，往往统计的是一个菌落，故用此方法测得的细菌数偏少。
（3）密码子由三个相邻的碱基组成，271个碱基和
后面2个碱基一起共构成91个密码子，插入的70个核苷酸和后面2个碱基一起共构成24个密码子，紧随其后的是UGA应为终止密码，翻译结束，因此突变基因表达的蛋白质含115
个氨基酸。
7.（2015年全国新课标I卷）已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。
脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。
回答有关问题：
（1）显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用染色。
微生物A产生的油脂
不易挥发，可选用（填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”）从菌体中提取。
（2）为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐
烂物的土壤中取样，并应选用以为碳源的固体培养基进行培养。
（3）若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用直接计数；
若要测定其活菌数量，可选用法进行计数。
⑷为了确定微生物B产生脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35C、40C、45C温度下降解10g油脂所需酶量依次为4mg、1mg、6mg，则上述三个温度中，
C条件下该酶活力最小。
为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕C设计后续实验。
（1）苏丹川（或苏丹W）萃取法
（2）油脂
（3）血细胞计数板稀释涂布平板（4）4540
【解析】本题主要考查了植物油脂的染色和提取方法、选择培养基的配制、微生物的计数以及确定酶的最适温度的实验设计等。
（1）脂肪可用苏丹川（或苏丹W）染液进行染色。
微
生物A产生的油脂不易挥发，不能用水蒸气蒸馏法提取，应用萃取法加以提取。
（2）能产生
脂肪酶的微生物B可存在于含有油料作物种子的腐烂物的土壤中，为了选择培养，固体培养
基上应以油脂作为唯一碳源。
（3）测定培养液中的微生物的菌体数，可在显微镜下用血细胞计数板直接计数；
若要测定活菌数，则可利用稀释涂布平板法进行计数。
（4）酶量需要最多
的温度下，其酶活力最小，即酶活力最小的温度应为45C。
三个温度下酶活力最大的温度
是40C,但40C不一定是该酶的最适温度，故为了确定酶的最适温度应围绕40C设计
后续实验。
8.（2014年全国新课标I卷）植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。
（1）分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其
中的葡萄糖苷酶可将分解成。
（2）在含纤维素的培养基中加入刚果红（CR）时，CR可与纤维素形成色复合物。
用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的
（3）为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基（成分见下表）：
培养基
酵母膏
无机盐
淀粉
纤维
素粉
琼
脂
CR溶液
水
甲
+
一
乙
—
注：
"
+”表示有，"
一”表示无。
据表判断，培养基甲（填“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原
因是;
培养基乙（填“能”或“不
能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是。
（1）纤维二糖葡萄糖
（2）红透明圈
（3）不能液体培养基不能用于分离单菌落不能培养基中没有纤维素，不会形成
CR-纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌
（1）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分：
C酶、G酶和葡
萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，葡萄糖苷酶将纤维二糖分解成葡萄糖。
（2）
刚果红可与纤维素形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。
用
含有刚果红的纤维素培养基培养纤维素分解菌时，由于纤维素被分解，红色复合物无法形成，
培养基中会出现以纤维素分解菌的菌落为中心的透明圈。
（3）培养基甲未使用琼脂，为液体
培养基，不能用于分离单菌落。
含有纤维素和刚果红（CR）的培养基可分离和鉴别纤维素分解菌。
&
（2014年全国新课标n卷）为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。
（1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。
在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是;
然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；
经适当培
养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。
据此可得出每升水样中的活菌数为
个。
（2）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。
操作时，接种环通过灭菌，在第
次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。
这样做的目的是
（3）下图A和B中，表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。
（4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。
结果发现：
振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。
分析其原因是：
振荡培养能提高培养液中的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高
的利用率。
（1）检测培养基平板灭菌是否合格3.8x107
（2）灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落
（3）B（4）溶解氧营养物质
（1）取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，可依据是否产生菌落确定培
养基的灭菌效果是否合格。
由样品中菌株数计算公式（C+V）xM知：
1mL水样中菌株数为
（38十0.1）x100=3.8x10（个），故每升水样中的活菌数为3.8x107（个）。
⑵利用接种环接种时，接种环需灼烧灭菌。
利用平板划线法分离细菌时，在第二次及以后划线时，总是从
上一次划线的末端开始，可以将聚集的菌体逐步稀释以便得到单个菌落。
（3）稀释涂布平板
法是用涂布器将菌液均匀涂布在培养基表面，故培养后产生的菌落应随机分布在培养基表面，即B表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。
（4）液体培养基通过振荡可提
高溶氧量，同时使菌体与营养物质充分接触，提高营养物质的利用率，从而提高细菌的生长
速率。
9.（2014年四川卷）有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。
研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。
分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如
图甲、乙所示。
（4）为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。
该实验的假设是
该实验设计是否合理？
为什么？
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