医学论文呼吸内科Word格式.docx

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　　1资料与方法

　　1.1一般资料2000～2004年我科共收治经组织学或细胞学证实肺癌患者436例，其中123例并发下呼吸道感染，男93例，女30例，年龄36～78岁，平均（62.5±

11.8）岁。

60岁以上81例，占65.9%。

中心型肺癌69.1%（85/123），周围型30.9%（38/123）。

其中有慢性基础性疾病COPD38例，糖尿病12例。

123例患者化疗4个疗程以下者39例，4～6个疗程者68例，6个以上疗程者16例;

24例（19.5%）为住院检查期间发病，99例（80.5%）在住院接受化疗期间或化疗结束后发病。

　　1.2临床特征起病缓慢或隐匿者75例（61.0%）。

亚急性或急骤起病者48例（39.0%），无发热者（<

37.5℃）87例（70.7%），中等程度以上发热（>

37.5℃）36例（29.3%）。

咳嗽112例（91.1%），咳黏液脓性痰59例（48.0%），气短或呼吸困难51例（41.5%），胸痛41例（33.3%）。

听诊肺部局限性干湿性啰音97例（78.9%）。

外周血白细胞计数<

4×

109/L34例（27.7%），>

10×

109/L41例（33.3%）。

中性粒细胞核左移明显78例（63.4%）。

　　1.3影像学及病原学X线、CT表现以片状、斑片状多叶浸润74例（60.2%）、阻塞性肺炎87例（70.7%）和肺不张38例（30.9%），三项综合有115例（93.5%）肺部发现异常。

123例病例通过痰细菌学监测，结果46例获得细菌学结果：

革兰阳性菌感染9例（19.6%）;

主要是肺炎链球菌、表皮葡萄球菌等。

革兰阴性菌感染37例（80.4%）;

主要是大肠杆菌、克雷伯杆菌、不动杆菌、铜绿假单胞杆菌;

合并真菌感染5例，结核感染4例（痰中查到抗酸杆菌）。

　　1.4诊断标准所有患者均符合中华医学会呼吸病学分会1998年制订的《医院获得性肺炎诊断和治疗指南（草案）》中的诊断标准。

　　2结果

　　2.1肺癌化疗患者并下呼吸道感染发生率本组肺癌患者共436例，其中合并下呼吸道感染123例，感染发生率为24.2%。

123例中出现发热者并不常见（29.3%）、咳嗽（91.1%）、咳黏液脓性痰者（48.0%）居多。

外周血白细胞计数升高不多（33.3%），但中性粒细胞核左移明显（63.4%）。

　　2.2肺癌部位、化疗次数与下呼吸道感染发生率肺癌化疗患者并下呼吸道感染以中心型肺癌居多69.1%（85/123），周围型30.9%（38/123）。

其随着化疗疗程增加下呼吸道感染机会也在增加;

24例（19.5%）为住院检查期间发病，99例（80.5%）在住院接受化疗期间或化疗结束后发病，其间有明显的统计学差异（P<

0.05）。

　　2.3其他肺癌合并下呼吸道感染致病菌以细菌为主，其中革兰阴性杆菌占大部分，包括肠杆菌科/发酵菌属等，占80.4%;

革兰阳性菌则以表皮葡萄球菌、肺炎链球菌为主，对部分患者需注意真菌和结核感染。

　　3讨论

　　肺癌发病率和死亡率不断上升，多种因素影响患者预后;

肿瘤所致局部阻塞、分泌物增加引流不畅，加之化疗消耗及全身免疫功能受损等均成为肺癌患者伴发感染的易感因素。

多项研究表明下呼吸道感染以成为影响肺癌患者的预后及生存质量重要因素[1，2]。

国内外报道肺癌合并肺部感染发生率高达41.36%～51.4%[3，4]。

本组合并下呼吸道感染为24.2%，其发生与肺癌生长部位、化疗疗程明显相关。

提示生长在大气道肿物造成气道狭窄，分泌物引流不畅是导致下呼吸道感染主要原因，而化疗所致的肺癌患者的全身和局部的免疫功能受损，进一步增加下呼吸道感染机会。

因此笔者建议在肺癌合并肺部感染的治疗方面要综合考虑，解除局部阻塞是关键，但化疗造成免疫损害不可避免，因此在肺癌治疗的全过程不可忽视免疫支持治疗。

　　临床分析发现肺癌伴肺部感染主要表现为咳嗽、咳黏液脓性痰、气短或呼吸困难，而发热并不常见，对临床诊断无特异性，且由于患者化疗等因素，外周血中性粒细胞多不升高，易误认为原发病变所致。

本组资料显示93.5%患者X线、CT检查能发现肺部感染异常征象，主要表现片状、斑片状多叶浸润阴影和阻塞性肺炎;

外周血白细胞计数升高者33.3%，而中性粒细胞核左移占63.4%。

故提高医生对肺部感染征象者的警惕，对化疗过程或化疗后症状不能缓解者应及时做胸部X线检查，更不能以外周血中性粒细胞升降为指标，应注重外周血中性粒细胞核左移现象。

　　文献[2，4]报道肺癌合并肺部感染后可明显影响患者的生活质量和生存期，因为肺部感染一旦发生，医生所面临的问题是如何控制肺部感染，而不是针对癌肿本身进行综合性的治疗，使得病情进展迅速。

因此对合并肺部感染者的病原学治疗尤为重要，综合国内外报道肺癌合并肺部感染的致病菌以细菌为主，且以革兰阴性杆菌（肠杆菌科、非发酵菌属）为主[3，5]。

这与本文结果革兰阴性杆菌（包括肠杆菌科/非发酵菌属等）占80.4%;

革兰阳性菌（则以表皮葡萄球菌、肺炎链球菌为主）19.6%相一致。

且由于这类患者长期反复住院，细菌对抗生素易产生耐药，治疗相当困难，故我们建议一旦肺部感染诊断成立，应以联合用药为主，同时慎防真菌和结核杆菌感染的可能。

　　因此笔者再次建议肺癌治疗过程中支持疗法、免疫疗法应受到大家重视，此对预防和治疗肺部感染的发生有相当重要作用。

　　【参考文献】

　　1WatanbeA，NakaiY，SaitoJ，etal.Clinicalsignificanceofrespiratoryassociatedwithlungcancerpatients.NipponKyobuShikkanGakkaiZasshi，1992，30（7）:

1250-1256.

　　2MoriK，KonishiM，SawakiM，etal.Analysisofprognosisofbronchopulmonaryinfectiousdiseasewithlungcancer.KansenshogakuZasshi，1997，71

（1）:

34-38.

　　3KohnoS，KogaH，OkaM，etal.Thepatternofrespiratoryinfectioninpatientswithlungcancer.TohokuJExpMed，1994，173（4）:

405-411.

　　\

IL10对TGFβ刺激成纤维细胞转化的影响

　　【摘要】目的探讨白介素10（interleukin10,IL10）对转化生长因子β（transtormgrowthfactorbeta,TGFβ）刺激成纤维细胞增殖、胶原分泌以及向肌成纤维细胞（myofibroblast,MFB）转化的影响。

方法培养人胚肺成纤维细胞，根据不同的处理方法分为五组：

A组加入TGFβ（5ng/ml），B组加TGFβ（5ng/ml）+IL10（5ng/ml），C组加TGFβ（5ng/ml）+IL10（15ng/ml），D组加TGFβ（5ng/ml）+IL10（25ng/ml），E组为空白对照组（无细胞）。

于72　h使用MTT方法观察各组成纤维细胞增殖情况，羟脯氨酸消化法检测胶原产生量，免疫细胞化学法检测平滑肌肌动蛋白（αsmoothmuscleactin,αSMA）的表达情况。

结果B、C、D组细胞内αSMA表达量分别与A组比较，差异均有统计学意义（P均<

0.01），D组与B、C组比较差异均有统计学意义（P均<

0.01）;

羟脯氨酸产生量C与B组、D组比较差异均有统计学意义（P均<

0.01）。

细胞增殖吸光度D组与C、B组比较差异有统计学意义（P<

结论在体外IL10对TGFβ刺激成纤维细胞的增殖、胶原产生及αSMA表达有抑制作用，且呈剂量依赖性。

　　【关键词】白细胞介素10;

成纤维细胞;

平滑肌肌动蛋白

　　EffectsofIL10onTGFβinducedtransdifferentiationoffibroblasts

　　YAOLusuLü

ChangjunWANGXiaozhietal

　　DepartmentofRespirology,AffiliatedHospitalofBinzhouMedicalUniversity,Binzhou256603

　　【Abstract】ObjectiveToexploretheeffectsofIL10onTGFβinducedtransdifferentiationoffibroblasts,multiplicationsandgenerationofcollagen.MethodsHumanembryolungfibroblastsweredividedinto5groupsaccordingtodifferenttreatment.GroupA:

treatedwithTGFβattheconcentrationsof5ng/ml,GroupB:

treatedwithTGFβattheconcentrationsof5ng/mlandIL10attheconcentrationsof5ng/ml,GroupC:

treatedwithTGFβattheconcentrationsof5ng/mlandIL10attheconcentrationsof15ng/ml,GroupC:

treatwithTGFβattheconcentrationsof5ng/mlandIL10attheconcentrationsof25ng/ml,GroupE:

controlgroup，culturedishesnotcontainingfibroblasts.After72hour,MTTevaluatedthesituationofcellmultiplication,hydroxyprolinedigestionexaminationdetectedthecollagengenerationandαSMAexpressionexaminatedbyimmunocytochemistry.ResultsTheαSMAexpressionoffibroblastsingroupB,groupC,groupDwassignificantlyhigherthanthatingroupA（allP<

0.01）,theαSMAexpressioningroupCwashigherthanthatingroupB（P<

0.05）andsignificantlylowerthanthatingroupD（P<

0.01）.ThereweresifnificantdifferencesinthecollagengenerationoffibroblastsbetweengroupB,groupC,groupD（allP<

0.01）.ThecellmultiplicationofgroupCwashigherthanthatofgroupB（P<

0.05）andsignificantlylowerthanthatofgroupD（P<

0.01）.ConclutionDifferentconcentrationsofIL10canreducecellmultiplication,collagenformationandαSMAexpressionoffibroblaststimulatedbyTGFβinvitro,itsinhibitoryeffectdependsonconcentration.

　　【Keywords】interleukin10,fibroblasts,αsmoothmuscleactin

　　肺纤维化为弥漫性肺间质性疾病的共同结局，细胞外基质（extracellularmatrix,ECM）过度生成及异常沉积是其共同的病理学特征。

成纤维细胞特别是其分化所成的以胞浆内含有平滑肌肌动蛋白（αsmoothmuscleactin,αSMA）为特征的肌成纤维细胞（myofibroblast,MFB），可持续分泌大量ECM[1]。

TGFβ（transtormgrowthfactorbeta,TGFβ）作为公认的促纤维化因子在MFB分化过程中起着重要作用，以往研究发现IL10可在体内减弱TGFβ的促纤维化作用[2]。

本实验通过IL10干预TGFβ作用后的成纤维细胞，观察IL10是否可影响TGFβ刺激成纤维细胞转分化作用。

　　1材料和方法

　　1.1材料细胞：

①人胚肺成纤维细胞株:

重庆第三军医大学生物实验室;

羟脯氨酸检测试剂盒：

北京中杉生物公司;

②重组人TGFβ、重组人IL10：

Peprotech公司;

③单克隆鼠抗平滑肌肌动蛋白抗体、羊抗鼠二抗：

武汉博士得生物工程有限公司。

④胎牛血清、RPMI1640、DMEM培养液：

杭州四季青生物公司。

　　1.2方法人胚肺成纤维细胞复苏后，置入5%CO2、37℃培养箱中进行培养，培养瓶内细胞生长达80%左右时，以0.1%胰酶消化传代，选择第3、4代细胞用于下述实验。

　　1.2.1IL10对成纤维细胞增殖的影响:

细胞经胰酶消化后，以6×

104/ml浓度，每孔取200μl加入96孔板中，纵向取5组（每组12孔）。

A组：

加入TGFβ（5ng/ml）;

B组加TGFβ（5ng/ml）+IL10（5ng/ml）;

C组加TGFβ（5ng/ml）+IL10（15ng/ml）;

D组加TGFβ（5ng/ml）+IL10（25ng/ml）;

E组：

空白对照组（孔板内无细胞）[3]。

干预前换无血清培养基培养细胞12h，使细胞处于静止状态。

于加入试剂后72h取出96孔板，每孔加入20μlMTT（5ng/ml，用无血清RPMI1640配制，过滤除菌），继续培养4h。

吸去培养液，加入0.2mlDMSO,震荡5min，继续培养30min。

在波长570nm处测定吸光度。

　　1.2.2羟脯氨酸消化法检测胶原：

细胞经胰酶消化后，加6孔板中，分组及干预方法同上。

于加入试剂后72h终止作用，收集细胞上清液0.25ml于测定管中，空白管和标准管中分别加0.25ml双蒸水和标准液。

三个管中分别加0.05ml的消化液，再分别加入羟脯氨酸检测试剂盒中试剂一0.5ml，混匀，室温静止10min，分别加入试剂二0.5ml，混匀，室温静置5min，分别加入试剂三1.0ml，混匀，60℃水浴15min，流失冷却后，3500r/min离心10min，取上清在550nm处，1cm光径，蒸馏水调零，测各管吸光度。

羟脯氨酸量=（测定管吸光度-空白管吸光度）/（标准管吸光度-空白管吸光度）乘以标准管浓度。

　　1.2.3IL10对成纤维细胞转化的影响:

细胞消化计数后接种于底部放置盖玻片的6孔板中，待细胞贴壁后换成无血清培养基培养12h。

分组及干预方法同上。

于加入试剂后72h终止作用，收取盖玻片，洗涤、固定细胞，行αSMA蛋白免疫细胞化学染色（按试剂说明书），用二氨基苯联胺（DAB）显色。

采用病理图像分析系统分析，随机选择4个视野，以其平均积分吸光度（A）值作为αSMA的相对含量[4]。

　　1.3统计学处理采用SPSS11.0软件处理数据，结果以x±

s表示，数据处理运用方差分析、组间均数进行Dunnettt检验及SNKq检验，以P<

0.05为差异有统计学意义。

　　2.1IL10对TGFβ刺激成纤维细胞增殖的影响B组吸光值与A组比较差异有统计学意义（P均<

0.05）;

C、D组分别与A组比较，均有统计学意义（P均<

D组与B组、C组比较差异也均有统计学意义（P<

0.01），且随IL10浓度的升高而增加（表1，图1～3）。

　　2.2IL10对TGFβ刺激成纤维细胞胶原产生的影响B组与A组比较差异有统计学意义（P<

0.05），C、D组分别与A组比较，均有统计学意义（P均<

C、D组与B组比较差异有统计学意义（P<

0.01），D组与C组比较差异有统计学意义（P均<

0.01），且随IL10浓度的升高而增加（表1）。

　　2.3IL10对TGFβ刺激成纤维细胞转化的影响图像分析显示，B、C、D组细胞内αSMA表达量分别与A组比较，差异均有统计学意义（P均<

　　表172h不同浓度IL10对TGFβ促纤维化作用的影响组别细胞增殖

　　（吸光度）羟脯氨基酸产生量

　　（μg/ml）αSMA值　A组0.877±

0.0670.554±

0.0370.501±

0.050B组0.732±

0.076**0.496±

0.042**0.386±

0.043*C组0.644±

0.061*0.421±

0.030*#0.328±

0.035*D组0.597±

0.056*0.373±

0.043*#△0.253±

0.038*#△F值16.412.720.5P<

0.01<

0.01注：

B、C、D组与A组比较，*P<

0.01，**P<

0.05;

C、D组与B组比较，#P<

0.01;

D与C组比较,△P<

0.01

　　图1A组细胞内SMA免疫组化染色见胞浆内有

　　棕褐色细丝状着色（×

400）

　　图2B组细胞内SMA免疫组化染色见胞浆内有

　　棕褐色细丝状着色，但较A组浅（×

　　图3D组细胞内SMA免疫组化染色见胞浆内有棕褐

　　色细丝状着色，但较A、B组浅（×

　　肺间质疾病是一组发病原因不明的纤维化性肺疾病，在各种致病因素导致肺部早期炎性病变过程中，炎性细胞释放多种活性因子，激活静息状态的成纤维细胞转化为平滑肌肌动蛋白（MFB）。

大量MFB聚集在肺纤维化病灶中持续产生分泌细胞外基质（ECM），造成大量ECM的过度异常沉积，导致肺组织病理性重塑，顺应性降低。

TGFβ是目前已知的在MFB转化过程中发挥重要作用的诱导因子，其可在体外诱导肺、肝、肾、眼眶等多种组织器官中成纤维细胞的增殖、分化[1]。

　　IL6、IL7、Thy1、IL10等多种细胞因子均可拮抗TGFβ的致纤维化作用[5]。

已有发现，对TGFβ作用后的小鼠转导IL10基因后，I型胶原分泌量及纤维化程度均较对照组有明显改善，肺泡巨噬细胞内TGFβ水平明显降低[6]。

我们观察到IL10