高效液相色谱法测定丙戊酸钠的血药浓度.pdf

高效液相色谱法测定丙戊酸钠的血药浓度.pdf

《高效液相色谱法测定丙戊酸钠的血药浓度.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《高效液相色谱法测定丙戊酸钠的血药浓度.pdf（3页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。

16ChinaPharmaceuticals2013年6月20日第22卷第12期Vol22，No12，June20，2013间的相互作用。

在缺氧缺血状态下，外源性神经节苷脂可通过患儿血脑屏障进入大脑，嵌入神经细胞膜，发挥保护神经细胞不受损伤的作用;可防止细胞内钙积聚，提高Na+K+ATP酶活性，清除受损细胞释放的过量自由基，维持细胞内外离子的平衡。

大量研究表明，神经节苷脂在手足口病缺氧缺血状态时，可促进神经组织的再修复，减少兴奋性氨基酸的释放，从而减轻细胞毒性和血管水肿，促进神经功能恢复10。

综上所述，在常规治疗的基础上加用脑细胞保护剂神经节苷脂，可提高临床有效率，改善退热时间、精神状态恢复时间和呕吐停止时间，值得临床推广。

参考文献:

1黄何清，周祖模1119例手足口病的临床表现与药物治疗分析J中国药业，2011，20（21）:

84852中华人民共和国卫生部手足口病防治指南J中医药临床杂志，2008，20（3）:

2352363吴梓梁小儿内科学M郑州:

郑州大学出版社，2003:

223922404范三丽，赵青中西医结合治疗儿童手足口病合并脑炎45例J山西中医，2010，26（12）:

335赵成松，赵顺英手足口病的流行概况和应对策略J中国实用儿科杂志，2009，24（6）:

4194216刘映霞，谢靖倩，何颜霞，等轻型和重型手足口病临床和实验室特征分析J中华实验和临床病毒学杂志，2008，22（6）:

4754777KungCM，KingCC，LeeCN，etalDifferencesinreplicationcapacitybe-tweenenterovirus71isolatesobatinedfrompatientswithencephalitisandthoseobtainedfrompatientswithherpanginainTaiwanJJMedVirol，2007，79

（1）:

60688SokolovaTV，ZakharovaIO，FuraevVV，etalGM1gangliosidecon-tributestoretaintheneuronalconductionandneuronalexcitabilityinviscer-alandbaroreceptorafferentsJZhEvolBiokhimFizio，2008，44（4）:

3733809周君芬，顾红丹神经节苷脂对新生儿缺血缺氧性脑病的疗效及作用机制J中国药业，2011，20（23）:

686910叶鑫神经节苷脂治疗新生儿缺血缺氧性脑病48例J中国药业，2011，20（5）:

1516（收稿日期:

20121126）高效液相色谱法测定丙戊酸钠的血药浓度胡琳（浙江省人民医院，浙江杭州310014）摘要:

摘要:

目的建立测定血清中丙戊酸（VPA）血药浓度的高效液相色谱法。

方法血清用正己烷提取，溴苯乙酮为衍生试剂，环己烷羧酸为内标，采用ZorbbxSBC18柱（250mm46mm，5m）为分析柱;流动相为甲醇水（7921，V/V），检测波长为248nm，流速为10mL/min，设计个体化给药方案。

结果内标环己烷羧酸和丙戊酸的保留时间分别为63min和93min，质量浓度线性范围为125200g/mL（r=09999），平均回收率为9998%，日内、日间RSD均小于566%。

结论该法快速、简单、准确性好，适用于临床进行丙戊酸的血药浓度监测。

关键词:

关键词:

高效液相色谱法;丙戊酸;血药浓度;个体化给药中图分类号:

R9691;R9693;R971+6文献标识码:

A文章编号:

10064931（2013）12001603HPLCMethodforDeterminationofSodiumValproateSerumConcentrationHuLin（ZhejiangProvincialPeoplesHospital，Hangzhou，Zhejiang，China310014）AbstractAbstract:

ObjectiveToestablishtheHPLCmethodfortheserumconcentrationdeterminationofvalproicacid（VPA）andtoguidetheindividualizedmedicationregimenbyanalyingthetypicalcasesMethodsSerumwasextractedwithhexaneWithbromoacetophenoneasthederivativereagentandcyclohexanecarboxylicacidastheinternalstandard，theZorbbxSBC18column（250mm46mm，5m）wasadoptedastheanalyticalcolumn;themobilephasewasmethanolwater（7921，V/V），thedetectionwavelengthwassetat248nm，theflowratewas10mL/minTheabovementionedmethodwasusedtodeterminethedozensofcasesusingsodiumvalproateFromthem，3typicalcaseswereselectedfordiscussingtheinfluencingfactorsoftheserumsodiumvalproateconcentrationanddesigningtheindividualizeddrugadministrationregimenResultsTheretentiontimeofinternalstandardcyclohexanecarboxyacidandVPAwas63minand93minrespectively，thelinearrangewas125200g/mL，theratioofthesodiumvalproatepeakheightandtheinternalstan-dardpeakheightshowedgoodlinearrelationwiththeconcentration（r=09999）Theaveragerecoveryratewas9998%，RSDofin-tradayandinterdaywaslessthan566%Atthesametime，duringtheprocessofthepracticalmeasurementofserumdrugcon-centrations，itwasfoundedthatthesamedosageofsodiumvalproatecouldproducealargergapoftheblooddrugconcentrationindif-ferentindividualsConclusionThismethodisrapid，simple，accurateandsuitableforserumsodiumvalproateconcentrationmonitor-ingInordertoadjusttheindividualizeddosingregimen，theserumsodiumvalproateconcentrationmonitoringisnecessaryKeywordsKeywords:

HPLC;valproicacid;blooddrugconcentration;individualizeddrugadministration檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨丙戊酸为临床抗癫痫的第一线药物，有效血药浓度为50100g/mL，当血药浓度高于100g/mL时，毒副作用增加而疗效无明显增加，常见不良反应有恶心、呕吐、肥胖、脱发、血小板减少和肝功能损害。

其体内过程和疗效个体差异较大，导致剂量与血药浓度之间的相关性较差1。

为最大限度地发挥疗效和避免不良反应，因此在长期用药或增减药物剂量时对体内血药浓度进行监测显得十分必要。

近年来，有关丙戊酸血药浓度监测的文献报道较多，有气相色谱法2、荧光偏振免疫法3、散射免疫比浊抑制法4、高效液相色谱法57等。

笔者建立了以溴苯乙酮为柱前衍生化试剂，能快速简便测定丙戊酸血药浓度的高效液相色谱药物研究DrugIdentification17ChinaPharmaceuticals2013年6月20日第22卷第12期Vol22，No12，June20，20131环己烷羧酸（内标）2丙戊酸图1高效液相色谱图678912t/min（HPLC）法，适用于临床血药浓度监测和药动学的研究，同时为指导个体化给药方案提供了理论依据。

现报道如下。

1仪器与试药Agilent1100型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）;小型三用水箱（北京医疗设备厂）;SZ1型快速混匀器（江苏金坛市金城国胜实验仪器厂）;TGL18GC型高速离心机（上海安亭科学仪器厂）;分析天平（江阴县天平仪器厂）。

甲醇为色谱纯（Merck公司），正己烷、硫酸、乙腈、氨水、三乙胺均为分析纯;环己烷羧酸（中国药品生物制品检定所）;丙戊酸（中国药品生物制品检定所）;溴苯乙酮（Fluka公司）;灭菌注射用水（莎普爱思）。

2方法与结果21色谱条件色谱柱:

ZorbbsSBC18柱（250mm46mm，5m）;柱温:

40;流动相甲醇水（7921）;流速:

10mL/min;检测波长:

248nm;内标:

环己烷羧酸;定量方法:

峰面积内标法。

22溶液配制精密称取丙戊酸100mg，置50mL容量瓶中，用02mol/L氨水稀释至刻度，得质量浓度为2g/L的标准溶液。

精密吸取上述标准液一定量，用02mol/L氨水配成200，100，50，25，125g/mL的丙戊酸系列标准液。

精密吸取环己烷羧酸50L，置50mL容量瓶中，用02mol/L氨水稀释至刻度，再精密吸取该液75mL至50mL容量瓶中，用05mol/L氨水稀释至刻度，得质量浓度1545g/mL的环己烷羧酸内标液。

精密称取溴苯乙酮10g，置100mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，即得衍生试剂。

23血样处理与色谱行为精密吸取空白血清005mL共5份，加入丙戊酸标准液005mL，分别加内标液005mL和1mol/L硫酸01mL，混匀。

加正己烷2mL，振荡提取5min后，以10000r/min的速度离心1min。

精密吸取上清液1mL，加溴苯乙酮和三乙胺各005mL，在50水浴中衍生10min，氮气流吹干，用甲醇01mL溶解残渣，取20L进样。

高效液相色谱图见图1，色谱峰分离较好，完全达到基线分离。

24样品处理将血样以6000r/min离心4min，取上清液01mL，加内标液005mL和1mol/L硫酸01mL，混匀，加正己烷2mL，振荡提取5min后，以10000r/min的速度离心2min，精密吸取上清液1mL，加溴苯乙酮和三乙胺各005mL，在50水浴中衍生10min，氮气流吹干，用甲醇01mL溶解残渣，取10L进样。

25方法学考察标准曲线绘制:

精密吸取空白血清005mL，5份，加入丙戊酸系列标准液005mL（200，100，50，25，125g/mL），分别加内标液005mL和1mol/L硫酸01mL，混匀。

然后拟订方法处理后，取20L进样，分析测定，然后以标准液质量浓度（Y）为纵坐标、丙戊酸与内标峰比值（X）为横坐标，作回归处理，得回归方程Y=37362X02766，r=09999。

结果表明，丙戊酸在2540g/mL范围内呈良好的线性关系。

精密度试验:

在加内标的空白血清中加入丙戊酸标准液适量，分别配置成200，100，50，25，125g/mL5个质量浓度的样品，在同1天内测定，计算日内精密度;每天测1次，连续测定5d，计算日间精密度。

结果日内、日间的RSD均小于566%。

回收率试验:

在加内标的空白血清中加入丙戊酸标准液适量，配置成200，50，125g/mL的丙戊酸血清样品，按拟订方法操作，记录峰面积，由标准曲线求出各点的浓度，与已知加入浓度相比，计算回收率。

结果见表1。

专一性试验:

考虑到临床上合用药物有可能对本试验的结果有干扰，在拟订色谱条件下，对几种可能合用的药物卡马西平、苯妥因钠、地西泮、硝西泮、苯巴比妥进行分析。

结果这几种药物均不出峰，对本法测定无干扰，不会影响丙戊酸血药浓度的测定。

稳定性试验:

将标准液及其他相关溶液存放于210的冰箱中，分别于第1，3，5，7，10，14d时用200，50，125g/mL标准液配置测定液，进行质量浓度测定。

结果血清中标准液含量未发生明显变化，说明贮备液在14d内稳定性良好。

3讨论据报道，以甲醇水（7525）为流动相，结果显示溶剂峰太高，样品峰太小89;而以甲醇水（7921）为流动相，内标环己烷羧酸和丙戊酸钠峰形较好，分离完全。

丙戊酸分子结构中不含有紫外特征吸收基团，难以用高效液相色谱法直接测定。

在碱性条件下，将其连接上有紫外吸收的基团是本法的关键。

本法采用溴苯乙酮为衍生化试剂，在三乙胺的催化下，反应完全彻底，基线稳定，可以用HPLC法测定，流动相不需要使用缓冲液等盐类物质，有利于保护色谱柱，并且衍生试剂在冰箱中冷藏保存6个月以上，对衍生化反应及测定结果无影响。

通过丙戊酸钠血药浓度的监测同时结合特殊案例，发现小于3岁患儿口服同样剂量丙戊酸钠，体内血药浓度差异很大，而且用药依从性差，不具有语言表达能力，机体发育又不成熟，药物对其造成的损害会更大，因此更有必要加强血药浓度的监测。

高于65岁患者血清丙戊酸浓度监测数据较少，可能是因为老年人体内蛋白含量较低、蛋白结合率低，故使用同等剂量的药物在体内的游离药物量较高，药物剂量调节更易，癫痫病情控制更佳，医生或患者认为没有必要进行血清丙戊酸浓度监测。

因此，选择一种不良反应少、疗效高的治疗方案对于保障生命非常重要。

作者简介:

胡琳（1984），女，浙江杭州人，大学本科，初级药师，（电话）057187312094（电子信箱）huLinchrist1126com。

参考文献:

1李金恒临床治疗药物监测的方法和应用M北京:

人民卫生出版社，2003:

402马虹英，李新中气相色谱法测定血浆中丙戊酸浓度的方法改J表1回收率试验结果（n=3）加入量（g/mL）2000500125测得量（g/mL）1997451991201回收率（%）9987103989608X（%）9998RSD（%）3954药物研究DrugIdentification18ChinaPharmaceuticals2013年6月20日第22卷第12期Vol22，No12，June20，2013广州市白云区科技计划项目，项目编号:

2010KZ34。

中国临床药学杂志，2002，13（9）:

5443崔一民，培红，刘玉旺，等高效液相色谱荧光检测法测定人血清中丙戊酸钠浓度J中国药房，2005，16（4）:

2874金燕散射免疫比浊抑制法检测卡马西平、丙戊酸浓度J中国医院药学杂志，2001，21（9）:

5195陈湛芳，胡朝欣，王志燕反相高效液相色谱法测定血清中丙戊酸浓度J中国医院药学杂志，2001，21（8）:

4586陈坚，方维军，吴芳高效液相色谱法测定丙戊酸血药浓度J中国临床药学杂志，2000，9（5）:

2967胡永狮，吴平，黄惠丽衍生化法测定癫痫患儿血清中丙戊酸的浓度J华西药学杂志，2001，16（6）:

4348祝文兵，阳利龙，李望云，等我院儿科抗癫痫药物血药浓度监测结果分析J儿科药学杂志，2004，10（5）:

259张志国，雷力力HPLC法测定丙戊酸钠血药浓度的衍生化影响因素考察J中国药房，2010，21（34）:

3204（收稿日期:

20120703）檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨StevensJohnson综合征患者卡马西平的血药浓度测定蔡茁1，郭丹2（1中国人民解放军第458医院药剂科，广东广州510602;2南方医科大学南方医院药学部，广东广州510515）摘要:

摘要:

目的采用高效液相色谱法测定StevensJohnson综合征患者血清中卡马西平的质量浓度。

方法血清样品采用甲醇和二氯甲烷萃取后进样测定，以VPODSC18柱（250mm46mm，5m）为色谱柱，以甲醇水（1585）为流动相，检测波长为240nm，流速为10mL/min。

结果卡马西平质量浓度在420g/mL范围内与峰面积呈良好线性关系，r=09991（n=5），低、中、高质量浓度的平均相对回收率分别为10312%，10377%，10169%（n=5）。

结论该方法简单、结果准确、灵敏度高，可为临床监测卡马西平不良反应提供科学依据。

关键词:

关键词:

StevensJohnson综合征;卡马西平;高效液相色谱法中图分类号:

R9691;R9693;R971+6文献标识码:

A文章编号:

10064931（2013）12001802DeterminationofBloodConcentrationofCarbamazepineinStevensJohnsonSyndromebyHPLCCaiZhuo1，GuoDan2（1DepartmentofPharmacy，458HospitalofPLA，Guangzhou，Guangdong，China510602;2DepartmentofPharmacy，SouthernHospital，SouthernMedicalUniversity，Guangzhou，Guangdong，China510515）AbstractAbstract:

ObjectiveToadopttheHPLCmethodtodeterminetheserumconcentrationofcarbamazepineinStevensJohnsonsyn-dromeMethodsTheserumsampleswereextractedwithmethanolanddichloromethaneforconductingthesampledeterminationTheVPODSC18（250mm46mm，5m）wastakenasthechromatographiccolumn，themobilephasewascomposedofmethanolwater（1585）withaflowrateof10mL/minThedetectionwavelengthwassetat240nmResultsThelinearrangeofcarbamazepinewas420mg/mL（r=09991，n=5），therelativeaveragerecoveryrateswere10312%，10377%and10169%，respective-lyConclusionThismethodissimplewithaccurateresultandhighsensitivity，whichcanprovidethescientificbasisformasteringtheadversereactionsofcarbamazepineinclinicKeywordsKeywords:

StevensJohnsonsyndrome;carbamazepine;HPLC2468t/min12468t/mint/min24681BAC1卡马西平A空白血清B空白血清+对照品C血清样品图1高效液相色谱图药物研究DrugIdentification卡马西平为癫痫精神运动性发作的首选药，其引起重症药疹在临床上多有报道1。

史蒂文斯约翰逊（StevensJohnson，SJS）综合征为一种严重的药疹，红斑性大疱广泛散布，口腔、眼部及咽部等处黏膜糜烂，唇红缘溃烂结痂，同时伴有高热、头痛、关节痛等全身症状。

经常有药物致StevensJohnson的报道，尤其以卡马西平致StevensJohnson综合征的报道最多2，但未见此类患者卡马西平血药浓度测定的报道。

笔者建立了测定StevensJohnson综合征患者血清中卡马西平浓度的高效液相色谱（HPLC）法，为临床监测卡马西平不良反应提供了科学依据。

1仪器与试药惠普HP1050型高效液相色谱仪，包括四元梯度泵，DAD检测器，HP1100型自动进样器。

卡马西平对照品（中国药品生物制品检定所）;甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2方法与结果21色谱条件色谱柱:

ShimadzuVPODSC18柱（250mm46mm，5m）;流动相:

甲醇水（1585）;检测波长:

240nm;流速:

10mL/min;柱温:

40;进样量:

10L。

22血清样品处理精密量取患者血清样品04mL，置5mL的离心试管中，加入20L甲醇，于旋涡仪中混合均匀。

吸取400L的甲醇，加入上述血清中混匀，再加入二氯甲烷2mL，振荡2min，以3000r/min的速度离心5min，取下层有机相，氮气吹干，用流动相100L复溶，以3000r/min的速度离心10min，取上清液进样分析。

23方法学考察专属性考察:

将空白血清、空白血清加对照品、患者血清标本按拟订方法处理后进样测定。

色谱图见图1。

在该色谱条件下，卡马西平的保留时间为582min。

标准曲线绘制:

准确称取干燥至恒重的卡马西平对照品20mg，精密称定，