激光共聚焦显微镜FV1000中文说明书.docx

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激光共聚焦显微镜FV1000中文说明书

激光共聚焦显微镜

FV1000

（倒置显微镜IX81）简易使用说明书

开启系统

1.打开计算机.

2.打开激光器.（打开钥匙开关.）

2-1.多线氩离子（458nm,488nm,514nm）ON

2-2氦氖绿（543nm）ON

2-3氦氖红（633nm）ON

3.打开汞灯电源开关.

4.登陆WindowsXP系统.

UserID:

Administrator

Password:

fluoview

5.双击快捷方式：

打开FV10-ASW应用软件.

UserID:

Administrator

Password:

Administrator

*系统软件的启动需要等待一定时间.

显微镜镜下观察

微分干涉差观察

1.使用手控面板选择物镜.

（参照④Memo④.）

2.插入起偏镜.

3.插入微分干涉滑块.

4.点击FV10-ASW软件中的图标.

Note1:

使用TD滑块控制卤素灯的光强；

Note2:

检查滤色片转盘的位置是否为“6.DICT”，如果不是，用手柄按下DICT图标

5.标本聚焦

显微镜镜下观察

荧光观察

1.使用手控面板选择物镜.

2.点击FV10-ASW软件中的图标.

3.使用手控面板选择荧光滤色片.（参照④Memo④.）

4.标本聚焦.

扫描模式扫描速

获取单张图像（XY平面）（荧光图像）

例：

绿色荧光染色（FITC）

1.点击FV10-ASW软件中的按钮

关闭汞灯快门.

同时,点击按钮

关闭卤素灯快门.

2.点击染料选择按钮.在染料列表中,双击用于观察的荧光染料.

*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.

3.点击Apply按钮.

（关闭染料选择面板可以用Close按钮.）

7.选择AutoHV,并选择扫描速度.

*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.

（也可以使用Kalmanaccumulation方式.

更多的信息，参照附录2.）

8.点击XY按钮取得一幅图像.

9.点击SeriesDone按钮,“2DView-

LiveImage（x）”2D界面就出现.

10.保存该幅图像:

右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.

（保存为“xml”类型是FV10-ASW软件专用的图像格式.）

1.

点击FV10-ASW软件中的按钮

关闭汞灯快门.

同时,点击按钮

关闭卤素灯快门.

2.点击染料选择按钮.在染料列表中,双击用于观察的荧光染料.

*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.

3.点击Apply按钮.

（关闭染料选择面板可以用Close按钮.）

7.选择AutoHV,并选择扫描速度.

*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.

（也可以使用Kalmanaccumulation方式.

更多的信息，参照附录2.）

8.点击XY按钮取得一幅图像.

9.点击SeriesDone按钮,“2DView-

LiveImage（x）”2D界面就出现.

10.保存该幅图像:

右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.

（保存为“xml”类型是FV10-ASW软件专用的图像格式.）

获取单张图像（XY平面）（荧光图像）

例：

绿色荧光（Alexa488）＋红色荧光（Alexa546）二重染色序列扫描（这里介绍线序列扫描.）

1.点击FV10-ASW软件中的按钮

关闭汞灯快门.

同时,点击按钮

关闭卤素灯快门.

2.点击染料选择按钮.在染料列表中,双击用于观察的荧光染料.

*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.

3.点击Apply按钮.

（关闭染料选择面板可以用Close按钮.）

8.选择AutoHV,并选择扫描速度.

*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.

（也可以使用Kalmanaccumulation方式.

更多的信息，参照附录2.）

9.点击XY按钮取得一幅图像.

10点击SeriesDone按钮,“2DView-

LiveImage（x）”2D界面就出现.

11.保存该幅图像:

右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.

（保存为“xml”类型是FV10-ASW软件专用的图像格式.）

（XY平面-单标+微分干涉差）

1.

点击FV10-ASW软件中的按钮

关闭汞灯快门.

同时,点击按钮

关闭卤素灯快门.

2.点击染料选择按钮.在染料列表中,双击用于观察的荧光染料.

*取消当前荧光染料，选择另外荧光染料，要双击已指定的荧光染料，并重复步骤2.

3.点击Apply按钮.

（关闭染料选择面板可以用Close按钮.）

4.选择TD1.

（XY平面-单标+微分干涉差）

8.选择AutoHV,并选择扫描速度.

*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.

（也可以使用Kalmanaccumulation方式.

更多的信息，参照附录2.）

9.点击XY按钮取得一幅图像.

10.点击SeriesDone按钮,“2DView-

LiveImage（x）”2D界面就出现.

11.保存该幅图像:

右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.

（保存为“xml”类型是FV10-ASW软件专用的图像格式.）

（XYZ扫描-双标）

1.采用13和14页步骤1到7.

确定Z轴的上限和下限如下.

2.输入StepSize大小（点击OP按钮可以使用推荐的值）,并选择

.

3.点击XYRepeat按钮开始扫描.

4.点击

按钮上移焦点位置.

（参照④Memo④.）

5.当图像显示到达上限时,点击Set按钮确定.

6.点击

按钮下移焦点位置.

（参照④Memo④.）

7.当图像显示到达下限时,点击Set按钮确定.

8.点击Stop按钮停止扫描.

（XYZ扫描-双标）

9.选择AutoHV,并选择扫描速度.

*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.

（也可以使用Kalmanaccumulation方式.

更多的信息，参照附录2.）

10.选择Depth按钮.

11.点击XYZ按钮取得图像.

12.点击SeriesDone按钮,“2DView-

LiveImage（x）”2D界面就出现.

13.保存该幅图像:

右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.

（保存为“xml”类型是FV10-ASW软件专用的图像格式.）

*可以通过调用扫描状态来实现该设置.更多的信息,参照附录5.

4.点击按钮

出现光谱设置窗口.

5.设置CHS1光谱带宽为10nm,以此为例.

（参照附录4关于改变光谱带宽的方法.）

6.点击XYRepeat按钮开始扫描.

7.在观察图像的同时,移动光谱带到图像

最亮的位置状态.

（参照附录4关于改变光谱带宽的方法.）

注:

移动光谱带位置要保持光谱带宽为10nm不变.

8.调节图像.

（参照附录1.）

9.点击Stop按钮停止扫描.

10选择AutoHV,并选择扫描速度.

*随着扫描速度变慢,在保持同等亮度的前提下,背景噪音就会消除.

（也可以使用Kalmanaccumulation方式.更多的信息，参照附录2.）

11设定要扫描的波长范围,光谱带宽和步距.

•Start=开始波长

•End=结束波长

•Resolution=光谱带宽

•StepSize=步距

12选择Lambda按钮.

13点击XYL按钮取得图像.

14点击SeriesDone按钮,“2DViewLiveImage（x）”2D界面就出现.

15.保存该幅图像:

右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像..

（保存为“oib”和"oif"类型是FV10-ASW软件专用的图像格式.）

1.双击资源管理器中要选择打开的文件.

1.点击按钮

并选择

.

2.要保存此图像,右击此图像,选择Save

Display并命名.

（比例尺的使用）

1.点击按钮

.

2.点击图像的同时,拖放此比例尺到一个特定的位置.

3.点击手柄的左端或右端,移动鼠标.改变比例尺的大小

4.选择比例尺并右击选择属性的设置.

5.设置具体的比例尺属性.

改变文本,颜色,字体等.

（3D图像的重建）

以一定的角度观察3D图像

1.点击按钮

.

2.创建3D图像.

3.拖动鼠标以一定的角度观察图像.

→要保存此图像,进行下一页第6步的操作.

观察3D图像的某个横截面

4.点击按钮

并选定

.

5.拖动鼠标观察某个垂直横断面.→要保存此图像,进行下一页第6步的操作.

（3D图像的重建

保存上一页中第3、5选项的图像

6.点击按钮

.

7.会创建一个2D图像（带文件名）.

8.保存该幅图像:

右击图像管理器中显示的图像图标，选择另存为保存该幅图像.

（保存为“xml”类型是FV10-ASW软件专用的图

1.

点击按钮

.

2.创建3D图像.

3.拖动鼠标以一定的角度观察图像.

动画的播放

4.点击并控制按钮实现图像围绕着X-轴旋转.

再次点击停止旋转.

点击并控制按钮实现图像围绕着Y-轴旋转.

再次点击停止旋转.

点击并控制按钮

实现图像围绕着Z-轴旋转.

再次点击停止旋转.

例:

绿色荧光（AlexaFluor488）和绿色荧光（YOYO-1）双标

1.

打开一幅AlexaFluor488单标取样的XYL图像.

2.为AlexaFluor488选定一个封闭的区域.

3.从Processing下拉菜单中选择

SpectralDeconvolution图标.

4.双击ROI1区域.

5.点击SaveProfile图标.

6.输入保存的名字并且点击OK按钮将

AlexaFluor488的光谱记载到数据库中.

7.对于YOYO1单标,重复1-6步.

8.打开一幅AlexaFluor488和YOYO1双标的XYL图像.

9.从Processing下拉菜单中选择

SpectralDeconvolution图标.

10.双击数据库中记载的AlexaFluor488和YOYO1图标.

11.检查处理类型设置为“Normal”并且点击Execute按钮.

12获得图像.

XY或者XYZ图像的每个通道存为

TIFF格式的文件

XY或者XYZ通道合并的图像存为

TIFF格式的文件

带有比例尺的图像存为BMP格式的文件

动态图像存为AVI格式的文件

1.右击图像管理器中显示的图像图标,选择另存为保存该幅图像..

2.设置Saveas类型为TIFF并保存.

*存为BMP和JPEG格式也可以.

1.右击图像管理器中显示的图像图标,选择另存为保存该幅图像..

2.设置Saveas类型为TIFF并保存.

3.检查要合并的通道并保存.

*存为BMP和JPEG格式也可以.

**********************************************************************************

1.右击该幅图像.2.选择SaveDisplay并以新的文件名保存该幅图像.

1.右击该图像.

2.选择SaveasAVI并以新的文件名保存该图像.

保存到CD-R

1.插入一张CD-R光盘.

2.点击OK.

3.选择文件并拖放到CD-R的窗口.

4.点击"WritethesefilestoCD."

5.点击Next.

6.开始刻录.

7.点击Finish按钮结束.

关闭系统

1.选择,退出FV10-ASW软件.

2.退出WindowsXP.

（1）选择Start/ShutDown.

（2）在ShutDown窗口中,选择ShutDown并点击OK按钮.

3.关闭激光器.

（关闭钥匙开关.）

3-1.多线氩离子（458nm,488nm,

514nm）OFF

3-2.氦氖绿（543nm）OFF

3-3.氦氖红（633nm）OFF

4.关闭汞灯电源.

附录1共聚焦的原理和调节原理

附录2

④④获取图像如何降低背景噪音④④