检验用细胞管理规程.docx

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检验用细胞管理规程

检验用细胞管理规程

类别

管理标准文件

文件编号

XXXX

版本号

V00

页码

共17页

执行日期

年月日（禁止复印）

审批页

—

起草人

审核人

审核人

批准人

部门

分析研究部

分析研究部

分析研究部

质量保证部

姓名

签名

日期

年月日

年月日

年月日

年月日

颁发部门：

质量保证部

分发部门：

分析研究部

拷贝号:

NO。

/

文件变更历史

版本号

执行日期

变更原因、依据及变更内容

V00

/

新起草

1目的

本规程规范分析研究部检验用细胞验收、制备、检定、储存、使用等过程的控制与管理，进而保证检验用细胞的规范使用与统一管理。

2范围

本规程适用于分析研究部检验用细胞按《中国药典》2015年版对所用检验用细胞由产生到销毁的全过程。

3定义

3.1检验用细胞是指用于生物制品检定的细胞,包括原代细胞、连续传代细胞或二倍体细胞，以及经特定基因修饰过的细胞.

3.2细胞种子（CellSeed）：

由一个原始细胞群体发展成传代稳定的细胞群体,或经过克隆培养而形成的均一细胞群体，通过检定证明适用于生物制品检定。

在特定条件下，将一定数量、成分均一的细胞悬液，定量均匀分装于一定数量的安瓿或适宜的细胞冻存管，于液氮或-130℃以下冻存，即为细胞种子，供建立主细胞库用.

3.3主细胞库（MasterCellBank，MCB）：

取细胞种子通过规定的方式进行传代、增殖后,在特定倍增水平或传代水平同次均匀地混合成一批，定量分装于一定数量的安瓿或适宜的细胞冻存管，保存于液氮或—130℃以下，经检定合格后，即可作为主细胞库,用于工作细胞库的制备.

3.4工作细胞库（WorkingCellBank，WCB）：

工作细胞库的细胞由MCB细胞传代扩增制成。

由MCB的细胞经传代增殖,达到一定代次水平的细胞，合并后制成一批匀质细胞悬液,定量分装于一定数量的细胞冻存管，保存于液氮或-130℃以下备用,即为工作细胞库.

4环境、健康和安全

4.1DMSO对人眼睛、呼吸系统和皮肤有刺激性，应注意适当防护，细胞培养过程中应严格按照无菌操作要求操作。

5培训

5.1培训部门：

分析研究部.

5.2培训对象:

质量研究相关人员。

5.3培训方式和时数:

集中授课或自学,8小时。

5.4考核方式：

问答。

6职责

6.1质量保证部：

负责监督本文件的执行。

6.2分析研究部、基因治疗部：

负责严格执行本规程规定。

7程序（内容）

7.1检验用细胞的来源管理（细胞资料）

7.1.1检验用细胞应具有明确合法来源的证明资料。

检验用细胞按来源可分为技术转让方提供、购买、赠予三类.

7.1.2购买：

质量研究人员细胞相关负责人根据检验需要，确定所需要的检验细胞,填写物资需求计划,注明细胞名称、细胞编号、申购数量、用途、要求购回时间等,提交至公司进行采购,公司应在中科院上海细胞库、ATCC或其他经国家批准的细胞保藏中心进行购买。

7.1.3技术转让或赠予检验细胞，需填写附表《细胞交接单》.

7.2检验用细胞的验收

7.2.1检验细胞取得后,由细胞库管理员与指定复核人一起按来源证明等资料验收，应详细核对细胞名称、来源及数量等的一致性以及相关资料符合后方可签字验收。

接收时应填写《细胞验收记录》，包括细胞名称、数量、传代代次、细胞管编号、来源等内容。

如果为冻存细胞则由细胞库管理员与指定复核人办理入库。

7.2.2检验用细胞管理台账，内容包括细胞名称、细胞来源、细胞库名称、编号、入库日期、出库日期、入库数量、出库数量、结存数量、液氮罐中存放位置及使用人、复核人等项目。

见附表《检验用细胞管理台账》。

7.3检验用细胞库的建立

7.3.1本公司检验用细胞应建立主细胞库（MCB）与工作细胞库（WCB），由细胞培养操作人员按要求进行培养建库，细胞培养记录见附表。

在操作过程中应写明培养基、胰酶批号及来源，传代后培养方瓶上应注明信息,如UMR-106P61：

4传代（操作时间）.如同时传多瓶应进行编号，如UMR-106P6—X1：

N传代（操作时间），X即为瓶号。

7.3.2检验细胞的检定

7.3.2.1检定项目：

细胞鉴别试验、无菌检查、支原体检查、细胞功能检查。

7.3.2.2细胞鉴别试验、支原体检测、细胞功能检查等项目依照委托检验相关规定进行委托检验.

7.3.2.3检验记录归入建库资料保存.细胞库交细胞库管理员入库，并填写相应管理记录。

7.4检验用细胞的储存与管理

7.4.1本公司检验用细胞储存于细胞库专用液氮罐中.

7.4.2细胞库实行实验室管理员与细胞主要负责人共同管理，由实验室管理员管理钥匙与细胞领用台账.

7.4.3本公司检验细胞所用的保存容器上的标识应包括：

细胞名称、代次、批号、细胞库类别-瓶号，例如UMR—106P620140408WCB—1，即为UMR-106细胞第6代，批号为20140408（冻存日期为2014年04月08日）,工作细胞库的第一支。

7.4.4细胞存放位置编号应为：

液氮罐编号+提篮编号+冻存盒层数，例如X号-01-01,即为X号罐的第1提篮的第一层（从下往上数）位置。

7.4.5细胞库管理员应每周检查液氮高度，在液氮危险高度2cm处时需要及时添加液氮，填写附表《液氮记录》。

7.4.6检验细胞的领用：

检验细胞由细胞培养操作人员到细胞库管理员处领取，填写《检验用细胞库管理台账》。

7.5检验细胞的销毁

7.5.1检验剩余细胞,不得随意弃置,应采用高压蒸汽灭菌的方式处理（122℃，30分钟）或者置于沸水中30min进行销毁。

7.5.2无保存价值、污染或经检验不合格细胞库细胞，应经细胞管理负责人、质量保证部审核，销毁时应在质量保证人员的监督下进行销毁，并应填写好相应的附表八《细胞销毁记录》。

7.6文件归档

7.6.1细胞培养记录按同一细胞系进行归类，按季度归档至实验管理员处。

7.6.2细胞建库资料如:

购买合同（复印件）、发票（复印件）、验收记录、细胞检定报告、细胞交接单等均应归档至实验室管理员处。

8相关文件

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9参考文献

《中国药典》2015年版三部“生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程

10流程图

————

11附录

细胞培养记录（细胞复苏记录）

时间：

年月日

细胞名称

代次/编号

冻存时间

规格/密度

冻存人

领用数量（支）

设备及编号

CO2培养箱

□ESCO/CCl—170B—8（BZSY—022）□THERMO/311（201412178）

离心机

湘智离心机/TD25-WS（BZSY-046）

倒置显微镜

Motic倒置显微镜/AE31（BZSY—041）

细胞计数仪

Bio-rad细胞计数仪/TC20（2016011301）

超净工作台

苏净安泰超净工作台/SW-CJ-2FD（□BZSY—007□201412145）

试剂试液

培养基/来源

FBS/来源

操作过程（*无菌操作）

取细胞冻存管，于37℃水浴中融化后，立即用移液器转移至ml完全培养基中,rpm离心min，弃上清,用ml完全培养基重悬细胞。

取重悬的细胞悬液计数，结果（若未计数，此处填“/"）.

将重悬的细胞悬液转移至细胞培养瓶中，放入CO2培养箱中培养.

备注：

操作人/日期

细胞培养记录（细胞传代、接板记录）

时间:

年月日

细胞名称

代次/编号

传代时间

规格/密度

设备及编号

CO2培养箱

□ESCO/CCl—170B—8（BZSY-022）□THERMO/311（201412178）

离心机

湘智离心机/TD25—WS（BZSY-046）

倒置显微镜

Motic倒置显微镜/AE31（BZSY—041）

细胞计数仪

Bio—rad细胞计数仪/TC20（2016011301）

超净工作台

苏净安泰超净工作台/SW-CJ-2FD（□BZSY-007□201412145）

试剂试液

0。

25％胰酶/来源

培养基/来源

FBS/来源

操作过程（＊无菌操作）

□消化：

取上述生长状态良好的细胞，吸弃培养液，用ml0.25％胰酶（或PBS缓冲液）洗涤细胞后弃去，加入ml0。

25％胰酶消化，消化结束后，加入ml完全培养基终止反应，轻轻吹下细胞.（悬浮细胞无需此操作）

□离心：

将细胞液转移至离心管中,rpm离心min，弃上清,用ml完全培养基重悬细胞。

□接板：

取重悬的细胞悬液计数，计数结果:

cells/ml，取ml细胞悬液，加入ml完全培养基（终浓度cells/ml）；μl/孔接板,接板数量：

。

□传代:

取重悬的细胞悬液ml，加入ml完全培养基，于培养瓶中培养，传代后信息：

备注：

操作人/日期

细胞培养记录（细胞冻存记录）

操作时间

细胞名称

代次/编号

传代时间

规格/密度

数量

设备及编号

CO2培养箱

□ESCO/CCl-170B—8（BZSY—022）□THERMO/311（201412178）

离心机

湘智离心机/TD25-WS（BZSY—046）

倒置显微镜

Motic倒置显微镜/AE31（BZSY-041）

细胞计数仪

Bio-rad细胞计数仪/TC20（2016011301）

超净工作台

苏净安泰超净工作台/SW—CJ—2FD（□BZSY-007□201412145）

试剂试液

培养基/来源

FBS/来源

DMSO/来源

操作过程（*无菌操作）

□冻存液:

□消化：

取上述生长状态良好的细胞,吸弃培养液，用ml0.25％胰酶（或PBS缓冲液）洗涤细胞后弃去，加入ml0.25%胰酶消化,消化结束后，加入ml完全培养基终止反应，吹下细胞并收集于离心管中。

（悬浮细胞无需此操作）

□离心：

将细胞液转移至离心管中，rpm离心min，弃上清，用ml冻存液重悬细胞。

□计数：

取重悬的细胞悬液计数，计数结果:

cells/ml。

□稀释：

取ml细胞悬液,加入ml冻存液，混匀（终浓度cells/ml）。

□分装：

将上述含细胞的冻存液分装入冻存管中，ml/支、共支。

于每支冻存管上标记细胞名称、代次、批号、细胞库类别-瓶号等信息，分装完成后,将冻存管放入冻存盒中，于-70℃下冷冻过夜，将冻存管转移至液氮管中保存，冻存位置：

备注：

操作人/日期

细胞交接单

细胞信息

序号

细胞名称

代次

单位

数量

资料明细

序号

资料名称

原件/复印件

份数

移交单位

签字/日期

接收单位

签字/日期

备注：

细胞名称

数量

传代代次

编号

来源

验收人/日期

复核人/日期

验收项目

验收结果

1、□实物与购买申请单的一致性。

□实物与交接单的一致性。

2、包装完好，标签清晰,封口严密、无渗漏、无启封痕迹.

结论：

□验收合格

□验收不合格

备注：

细胞验收记录

检验用细胞管理台账

细胞名称

类别□主细胞库□工作细胞库

细胞来源

用途

细胞编号/批号

细胞密度

装量

冻存数量

存放位置

冻存人

冻存日期

使用日期

使用数量

（）

结存数量

（）

使用人

复核人

备注

注：

备注应注明细胞具体编号等信息。

液氮高度记录

液氮罐编号：

液氮危险高度：

日期

工作内容

液氮高度

操作人

备注

测量高度

测量高度

测量高度

测量高度

测量高度

测量高度

测量高度

测量高度

测量高度

测量高度

测量高度

测量高度

测量高度

测量高度

测量高度

测量高度

测量高度

测量高度

测量高度

测量高度

测量高度

测量高度

测量高度

测量高度

注：

监测频率为每周一次，危险高度为液氮完全淹没细胞冻存管处的高度。

.2413

细胞销毁记录

销毁原因

销毁方式

销毁人/负责人

年月日

质量保证人员

年月日

备注

销毁原因

销毁方式

销毁人/负责人

年月日

质量保证人员

年月日

备注

销毁原因

销毁方式

销毁人/负责人

年月日

质量保证人员

年月日

备注