安捷伦1200标准操作规程.docx

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安捷伦1200标准操作规程

Agilent1200液相色谱仪操作规程

设备组成:

G1311A（四元泵）、G1329A（标准型自动进样器）、

G1316A（柱温箱）、G1314B（VWD检测器）、

G1315D（DAD检测器）。

基本操作步骤：

（一）、开机：

1、打开计算机，进入WindowsXP画面。

（IP地址由BootpService程序写入）

2、打开1200LC各模块电源。

3、待各模块自检完成后,双击“仪器1联机”图标，或（点击屏幕左下角的“开始”，选择“程序”，选择“AgilentChemstation",选择“仪器1联机”）化学工作站自动与1200LC通讯,进入的工作站画面如下所示.

4、从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面,点击“系统视图”,“样品视图”,使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。

5、把流动相放入溶剂瓶中。

6、手动旋开冲洗阀。

7、点击“泵"图标，点击“设置泵”选项,进入泵编辑画面。

8、设流速：

3-5ml/min，点击“确定”。

9、点击“泵”图标，点击“控制”选项，选中“启动"，点击“确定”,则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。

若使用缓冲盐，要加入泵头冲洗（seal-wash），点击“泵”图标,点击“控制”选项，选择“用于泵密封垫清洗的泵"，开启清洗泵前要配制90%水+10%异丙醇，溶剂不能干涸.

10、点击“泵"图标,点击“控制”选项，选中“关闭”，点击“确定”关泵，手动旋紧冲洗阀。

11、点击“泵”图标，点击“设置泵选项"，设流速：

1。

0ml/min。

12、点击泵下面的瓶图标，选择“溶剂瓶添充量”如下图所示（以四元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。

也可输入停泵的体积，点击“确定”。

（二）数据采集方法编辑：

1、开始编辑完整方法：

从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项,如下图所示选中除“数据分析”外的三项，点击“确定”，进入下一画面。

2、方法信息:

在“方法注释”中加入方法的信息（如：

Thisisfortest！

）。

点击“确定"，进入下一画面。

3、泵参数设定：

（以四元泵为例）

在“流速”处输入流量,如1。

5ml/min，停止时间：

10min。

在“溶剂B”处输入70.0,（A=100-B—C—D），也可“插入”一行“时间表”，编辑梯度。

在“压力限”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。

点击“确定"，进入下一画面。

4、自动进样器参数设定：

（以标准型G1329A为例）

选择合适的进样方式,如图所示，进样体积1。

0ul，洗瓶位置为6号。

“标准进样”—--—只能输入进样体积，此方式无洗针功能。

“洗针进样”-—-—可以输入进样体积和洗瓶位置,此方式针从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针.

“使用进样器程序”---可以点击“编辑"按钮进行进样程序编辑。

点击“确定”，进入下一画面。

5、柱温箱参数设定：

在“温度”下面的空白方框内输入所需温度,如:

40度。

并选中它，点击“更多信息〉〉”键,如图所示,选中“与左侧相同”，使柱温箱的温度左右一致.点击“确定”，进入下一画面。

6、VWD检测器参数设定：

在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长，如254nm,在“峰宽（响应时间）”下方点击下拉式箭头,选择合适的响应时间,如〉0。

1min（2s）.G1314B：

最快采样速率13.74HZ。

在“时间表”中可以“插入”一行，输入随时间切换的波长，如1min，波长=300nm。

点击“确定"，进入下一画面。

7、DAD检测器参数设定:

检测波长：

254nm，带宽=4nm，参比波长=360nm，带宽=100nm；

检测波长：

一般选择最大吸收处的波长。

样品带宽:

一般选择最大吸收值一半处的整个宽度.

参比波长:

一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域。

参比带宽：

至少要与样品信号的带宽相等，许多情况下用100nm作为缺省值。

峰宽（响应时间）：

其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。

狭缝—狭缝窄，光谱分辨率高;宽时，噪音低.同时可以输入采集光谱方式,步长，范围，阈值。

选中所用的灯。

10、在“运行时选项表”中，选中“数据采集"，点击“确定”。

11、从“方法”菜单，选中“方法另存为"，输入一方法名，如“测试”，点击“确定”。

12、从“视图”菜单中，选中“在线信号”，选中“信号窗口1”,然后点击“改变”钮，将所要绘图的信号移到右边的框中，点击“确定”。

（如同时检测二个信号，则重复10，选中“信号窗口2”。

）

13、从“运行控制”菜单中，选择“样品信息"选项，如下图所示，输入操作者名称,如“安装工程师";在“数据文件”中选择“手动”或“前缀/计数器”。

区别:

手动--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。

前缀/计数器—-—-“前缀”框中输入前缀，在“计数器”框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如vwd数据0001,vwd数据0002。

14、点击“确定”，从“仪器"菜单选择“启动系统"。

15、等仪器准备好，基线平稳，从“运行控制”菜单中选择“运行方法”，进样.（若无自动进样器，则基线平稳后，进样并搬动手动进样阀，启动运行。

）

（三）、数据分析方法编辑:

1、从“视图”菜单中，点击“数据分析”进入数据分析画面.

2、从“文件”菜单选择“调用信号”,选中您的数据文件名，如下图所示。

点击“确定”,则数据被调出。

3、做谱图优化：

从“图形”菜单中选择“信号选项",如下图所示。

从“范围”中选择“满量程”或“自动量程”及合适的时间范围或选择“自定义量程”调整.反复进行，直到图的比例合适为止。

点击“确定”。

4、积分:

从“积分”菜单中选择“积分事件"选项，如下图所示.选择合适的“斜率灵敏度”,“峰宽"，“最小峰面积”，“最小峰高”。

从“积分”菜单中选择“积分”选项，则数据被积分。

如积分结果不理想，则修改相应的积分参数,直到满意为止。

点击左边“√”图标,将积分参数存入方法。

5、打印报告：

从“报告”菜单中选择“设定报告"选项。

点击“定量结果”框右侧的黑三角，选中“面积百分比”，其它选项不变。

点击“确定”。

从“报告”菜单中选择“打印报告”，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则点击“报告”底部的“打印”钮。

（五）、关机:

1、关机前，先关灯，用相应的溶剂充分冲洗系统。

2、退出化学工作站，依提示关泵，及其它窗口，关闭计算机（用shutdown关）。

3、关闭Agilent1200各模块电源开关。

（六）、Agilent1200LC维护保养：

1、色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂，两端封死（乙睛/甲醇适于反相色谱柱，正相色谱柱用相应的有机相）。

2、手动进样器,当使用缓冲溶液时，要用水冲洗进样口。

3、流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）.

4、带seal-wash的1200，要配制90％水+10%异丙醇，开启seal—wash清洗泵，溶剂不能干涸。