分子生物学题库3文档格式.docx
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25．限制性片段长度多态性（restrictionfragmentlengthpolymorphism，RFLP）。
26．计算下列三种酶各自在某染色体DNA序列上识别位点间的平均距离：
AluⅠ：
5’AGCT3”EcoRⅠ:
5’GAATTC3’
3TCGA5’3’CTTAGG5’
AcyⅠ:
5’GPuCGPyC3’
3’CPyGCPu5’
（注：
Py=任何一种嘧啶；
Pu=任何一种嘌呤）
27．在细菌质粒pBP1的四环素抗性基因tetR的中间有一个HindⅡ的切点。
用HindⅢ切割果蝇基因组DNA，以pBP1为载体构建基因组文库。
分子杂交证明克隆15带有果蝇的目的基因。
用HindⅢ和EcoRV对克隆15进行了酶切分析，电泳结果如图15.1（用酶切的pBP1质粒DNA作对照），旁边标出了片段的大小。
（1）绘制含有插入片段和不含插入片段时的pBPl的限制性图谱，并标明四环素抗性基因的位置—;
（2）如果用克隆在另一个与pBP1完全不同源载体上的四环素抗性基因作为探针，进行Southern印迹杂交，预测上述电泳图会出现什么样的杂交带?
（3）如果用克隆15的果蝇DNA片段作为探针进行Southem印迹杂交，放射自显影的结果又是如何?
28．为什么大多数切酶被称为“限制”酶。
29．据Science杂志报道:
一种重要的遗传疾病可由导致DNA中碱基替换的诱变剂在体外进行人工诱导。
设计一种快速用以鉴定疾病基因型的检测方法。
30．为了绘制长为3.0kbBamHⅠ限制性片段的限制性图谱，分别用EcoRⅠ、HpaⅡEcoRⅠ十HpaⅡ消化这一片段的三个样品，然后通过凝胶电泳分离DNA片段，溴化乙锭染色后观察DNA带型（图15.2）。
请根据这些结果，绘制一个限制性图谱，要标明E.coRⅠ和HpaⅡ识别位点间的相对位置，以及它们之间的距离（kb）。
31．1967年，有5个实验室几乎同时独立发现了DNA连接酶，每个实验室的实验有什么特点?
32．简述DNA和RNA连接酶的催化反应机制。
33.影响DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些?
34．什么是Klenow酶?
有哪些活性?
35.如何利用T4DNA聚合酶制备3’隐含末端或双链平末端?
36.如何利用T4DNA聚合酶进行双链DNA的3’末端标记?
37．如何利用T4DNA聚合酶制备平末端?
38．反转录酶有两种类型，一是来源于禽类骨髓母细胞瘤病毒（AMY,aviammyeloblastosisvirus），另一种来源于鼠类莫洛尼氏白血病毒（M—MLV，Moloneymurineleukemiavirus），它们之间有什么不同?
39．与E.coliRNA聚合酶相比，细菌噬菌体的SP6RNA聚合酶、T7RNA聚合酶和T3RNA聚合酶具有哪些优越性?
40．什么是多核苷酸激酶的向前反应和交换反应?
41．细菌碱性磷酸酯酶和小牛肠碱性磷酸酯酶有什么不同?
在基因工程中有什么用途?
42．λ外切核酸酶（lambdaexonuclease）基本活性是什么?
在基因工程中有什么应用?
43．Mn2+、Mg2+对DNaseⅠ（deoxyribonucleaseⅠ）的活性有什么影响?
DNaseⅠ在基因工程中有什么作用?
44．比较S1-Mapping和Footprinting在原理上、方法上、应用上有何不同?
45．什么是复制子（replicon）?
46．什么是质粒的相容性?
什么是不相容群?
机制是什么?
47．什么是质粒的带动转移?
48．说明变性定位法和限制性切核酸酶定位法研究质粒复制起点的原理。
49．Co1El衍生质粒拷贝数调节机理的机理是什么?
50．R1质粒拷贝数受到怎样的调节控制?
51．质粒如何维持在细胞中的稳定?
52.引起质粒不相容性的主要原因是什么?
53．由于基因工程是人为改变遗传信息的操作，因此必须注意被操作基因的安全，进行严格的监控，质粒载体的安全性是十分重要的。
请问质粒载体的安全条件包括哪几个方面?
54．请指出质粒pSC101的一些生物学特性（包括结构和遗传）及在基因工程中的作用。
55.自然界中具备理想条件的质粒载体为数不多，即使是Co1E1和pSC101这两个自然质粒也不尽人意，通常需要进行改造，请问质粒改造包括哪些基本容?
56.质粒改造的发展过程如何?
57.在质粒中如何增减酶切点?
58．有人用限制性切核酸酶EcoRI分别切割松弛型质粒Co1E1和严紧型质粒pSC101（各有一个切点），然后重组连接形成一个杂种质粒pSC134，请推测这种质粒有什么特性和用途。
59．现分离了4种新的大肠杆菌Hfr菌株，通过中断接合实验，针对每一菌株确定了高频转移的标记基因和它们进入F—受体的时间分别为：
标记基因和第一次进入的时间
Hfr1
Hfr2
Hfr3
Hfr4
man
13min
mal
29
lys
16
pur
6
trp
met
14
arg
9
3
his
23
thr
4
2
31
uvr
20
32
lac
gal
（gal、lac、mal、man不能发酵半乳糖、乳糖、麦芽糖和甘露糖；
arg、his、met、trp生长需要精氨酸、组氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、嘌呤和色氨酸；
uvr：
紫外线敏感）。
任何没有给出的标记都是不能高频转移的。
上述数据能够说明大肠杆菌的染色体是环状的吗?
以分钟表示图距构建一个大肠杆菌染色体的连锁图。
假定整个染色体用了100分钟转移，而且氨酸被认为位于0分钟或10O分钟处。
60．YAC克隆载体常出现哪些问题?
61．为什么野生型的λ噬菌体DNA不宜作为基因工程载体?
62．什么是蓝白斑筛选法?
63．蓝白斑筛选法为什么也会有假阳性?
64．什么是cⅠ筛选法?
65．λ噬菌体载体具有哪些优点与不足?
66．什么是M13的IG序列区?
有何特点和功能?
67．将野生型的M13改造成基因工程载体，首先是进行酶切位点的改造，请问M13中的EcoRⅠ最初是如何引入的?
68．以置换型λ噬菌体作为载体进行克隆时，为什么说能够形成噬菌斑的就一定是重组体?
69．M13系列载体具有哪些优缺点?
70．粘粒载体具有哪些特点与不足?
71．辅助噬菌体DNA和相应的噬菌粒是如何协同工作的?
72.克隆的DNA在质量上有什么要求?
73．为什么从细胞中分离DNA时往往会断裂?
74．为什么苯酚要重蒸饱和后才能用于DNA的分离?
75．为什么氧化变色的酚不能直接用于DNA的分离?
应如何处置?
76.在DNA分离过程中，酚通常与氯仿联合使用，即使不联合使用也要在苯酚抽提后用氯仿再抽提一次，为什么?
77.说明溴化乙锭—氯化钩密度梯度离心（ethidiumbromide-caesiumchloridegradientcentrifugation）纯化DNA的原理。
78.采用什么措施保证DNA化学合成的定时性和专一性?
79．何谓简并引物（degenerateprimer）?
80．简并引物设计的一般原则是什么?
81．双脱氧法（dideoxynucleotidemethod）测序的基本原理是什么?
82．在古生物学中，尚不知道恐龙是否是温血爬行动物，而不像今天的变温爬行动物。
假如你得到一些恐龙的DNA，你如何通过PCR和基因克隆来检测恐龙是否是温血爬行动物?
83．如果知道某一基因的功能及其相应的蛋白质的氨基酸序列组成，可以通过何种方法克隆该基因?
84．何谓定位克隆（positionalcloning）?
85．何谓染色体步移（chromosomewalking）?
86．在染色体步移中，用哪些方法获得克隆的末端?
87．何谓表型克隆（phenotypecloning）?
88．什么是基因文库?
89．什么是基因组文库（genomiclibrarY）?
构建基因组文库，涉及哪些基本过程?
它同遗传学上的基因库有什么不同?
90．什么是cDNA文库（complementDNAlibraly）?
同基因组文库有何差别?
91．粘性末端连接法是最常用的连接方法，具有许多优点，但是也有一些不足，请指出这些不足之处，
92．什么是同聚物加尾连接法（homopolymertailsjoining）?
用何种方法加尾?
具有哪些优缺点?
93．何谓接头连接法（Iinkerligation）?
94．什么是同裂酶?
为什么说用同裂酶进行体外重组效率最高?
95．如何使用甲基化酶对克隆DNA进行保护?
有什么意义?
96．何谓稀有酶?
（举例说明）
97．为了大量获得许多用于生化鉴定的产物，你想将拟南芥中的一个序列已知、编码单体酶蛋白的基因在单细胞微生物中表达，你如何确保最终能得到产物?
98．若在进行DNA重叠群分析时，你发现在一个编码有价值但不稳定蛋白质的可读框之后，紧接着另一个可读框，它可在蛋白质的C末端加上一个稳定结构。
举出至少两种获得被修饰蛋白产物的方法。
99．某一质粒载体具有Tetr和Kanr的表型，在Kan抗性基因有一BglⅠ的切点。
现用BglⅠ切割该载体进行基因克隆，问：
（1）转化后涂皿时应加什么样的抗生素?
（2）培养后长出的菌落具有什么样的抗性基因型?
（3）如何利用抗性变化筛选到含有插人片段的重组体?
100．限制性切核酸酶BamHⅠ和PstⅠ切割某一DNA序列，结果示于图20.1。
图20.1BomHⅠ和PstⅠ识别序列处的切割，只显示识别位点的核苷酸序列
（1）指出被切割DNA分子的5’端和3’端；
（2）如果你将切割后的DNA同DNA聚合酶、4种dNTP在一起温育，这些DNA末端会有什么样的变化?
（3）经过B中的反应后，你还能够用T4DNA连接酶将BamHⅠ末端连接起来吗?
PstⅠ末端呢？
（T4DNA连接酶能够连接平末端和黏性末端）
（4）（3）中的连接后，能够重新形成BamHI位点吗？
PstI位点呢？
101．什么是遗传学检测法?
102．以pBR322DNA作为载体，从四环素抗性基因区克隆外源DNA时，可采用环丝氨酸富集法筛选重组体，说明其基本原理和基本操作过程。
103．放射性抗体检测法（radioactiveantibodytest）的基本原理是什么?
104．何谓液相杂交?
举例说明在分子生物学中的应用。
105.什么是活体标记法（invivolabeling）?
106.单链RNA作为探针，具有哪些单链DNA探针所没有的优点?
107.什么是随机引物（randomprimer）?
如何标记DNA?
108．良好的固相支持物必须具备哪些优良特性?
109．以硝酸纤维素滤膜（nitrocellulosefiltermembrane）作为杂交的固相支持物具有哪些优缺点?
110．什么是印迹（blotting）杂交?
111．什么是斑点杂交（dothybridization）与狭缝杂交（slothybridizatlon）?
112．什么是原位菌落杂交（colonyhybridization）?
113．说明Southern杂交的原理和方法。
114．Northern印迹与Southern印迹有什么不同?
115．建立了一个基因文库后，如何鉴定一个携带目的基因的克隆?
116．说明原核生物基因表达的正控制诱导型（positiveinduciblecontrol）和负控制阻遏型（Negative-represiblecontrol）调控的遗传机理。
117．一个四核苷酸序列的DNA分子
，经羟胺处理后，再经过两次复制，会产生什么样的DNA分子？
（5分）
118．有一段多肽链的C端氨基酸残基的Tyr-Pro-Asn-Val-Thr-Cys-Glu,其对应的DNA序列为
（SS-1）GATAAGCGTGCATGTAAGCCCCAT
（SS-2）CTATTCGCACGTACATTCGGGGTA
119.已知E.Coli基因组DNA含有4.2×
106bp，Cot/2为4。
鸡管状细胞DNA含有7×
108，其复性动力学曲线为：
请求出鸡细胞DNA中，中度重复序列组分每一重复单位的核苷酸？
及重复频率？
120.将一个重组质粒PMR1分别感染三个被λphage溶原的E.coli菌株（三菌株的差别为λphage的pRoR区段分别为或w.t或oR1—或oR2—），培养于含ONPG（邻硝基苯—β—半乳糖苷）的培养皿中，在加入不同的IPTG（异丙基—β—D—硫代半乳糖苷，类似于乳糖，作为效应物分子）的培养皿中，检测被LacZ酶分解ONPG的黄色色度，并换算成Z酶酶活，请根据测定结果判断这三条曲线分别代表哪一个测验菌株？
为什么？
121.某一生物DNA的chemicaicomplexity=8.82×
108bp，复性动力学研究表明约有40%的DNA其Cot（1/2）=5,请较详细地说明这部分DNA的特点。
（E.coliDNAkineticcomplexity=chemicalcomplexity=4.2×
108bp，Cot（1/2）=4）
122．分别说明λphage以下突变型的表现型并简述其分子机理：
λ[cⅠ]—,λ[cⅡ]—,λ[hfl]—,λ[cro]—
123.说明constitutivesplicing与alternativesplicing,cis-splicing与trans-splicing之间在概念及机制上的区别。
124．E.Coli阿拉伯糖（Arabinose）分解酶操纵子（araoperon）的调节基因I发生突变后，即使在培养基中加入效应物（Arabinose），操纵子仍处于关闭状态。
将构建的i—/I基因的部分二部体E.Coli培养在含有阿拉伯糖的培养基中，操纵子处于开放状态。
请说明araoperon的调控类型，并推测i—突变基因的基因型。
（简述推论的理由）
125．简述λphage选择溶原途径（lysogenicpathway）的分子生物学原理。
126.请说明一种利用PCR技术进行目标基因定点突变的技术路线及原理。
127．拟应用云金秆菌中的一个毒素蛋白基因培育抗虫作物品种。
请提出一个从基因分离开始到品种推广为止的实验方案。
并指出值得注意的关键问题。
128．说明不同种属的植物基因组共线性发现的理论和实践意义。
129．基因组研究对作物遗传改良将会产生哪些影响？
130．你正在克隆一个基因。
现在你己得到了数个DNA片段。
下一步你将如何从中鉴定出你所希望得到的目标基因。
131．谈谈基因工程的基本步骤，说明重要工具酶在各个步骤中的作用。
132．根据你对分子克隆载体的了解，对克隆载体的类别，用途及各自的特殊性加以简述。
133．以E.Coli为例，简述其基因重组的类型，作用机理及其在分子生物学研究中的应用。
134．如何解释抗体生成多样性的分子机理。
135．如果你发现了一种新蛋白质，你将如何进行下一步研究?
请按先后顺序列出基本方案。
136．应用生物技术创建作物新的种质有哪些途径和方法。
137．分子标记辅助选择在作物育种中有那些重要作用?
如何实施?
138．说明真核生物前体RNA加工的类别及机理。
139．说明原核生物与真核生物转录元件（cisandtrans）的特点。
140．简述人类基因组研究近年来的进展。
141.说明DNA芯片（含OligonucleotidechipandcDNAmicroarray）技术的基本概念和可能的用途。
142.如何确定细菌的某一个遗传表型是由染色体控制还是由质粒控制的。
143.简述DNA重组的几种不同方式及分子机理。
144.比较说明原核生物与真核生物在基因表达水平上的异同。
145．至少列举三例（除DNA双螺旋结构外）说明核酸分子结构的研究成果对分子生物学理论发展的重要贡献．
146．说明生物体保证自身稳定遗传的机制。
147．说明蛋白质与DNA之间序列非线性相关的因素。
148．在核苷酸测序的操作中，利用哪几个途径分别获得一个片段两条单链的序列?
各自的理论依据是什么?
试言简意赅地加以论述。
149．到目前为止，在高等生物中根据性状表现分离未知产物基因采用哪些途径?
请说明各种途径的基本原理并各举一例。
150．请以基因组研究的新进展为例，讨论分子生物学发展与生物技术产业化的关系。
151．试述作物遗传资源的重要性，何谓作物遗传资源的创新?
152．利用分子标记进行基因定位的遗传群体有几种?
各有什么优、缺点?
153．就你所熟悉的某一作物，简述作物杂种优势研究与利用的现状。
154．你对“基因工程育种”有何评价?
155．何谓断裂基因（splitgene）?
何谓重叠基因（overlappinggene）?
它们在生物进化与适应上有何意义?
156．何谓分子标记?
分子标记的种类有哪些?
可以开展哪些领域的研究?
157．自花授粉作物与异花授粉作物的育种方法有何异同?
数量性状如何进行改良?
158．在提取由ColEI所衍生的质粒（如pBR322）时，常在培养携带质粒的大肠杆菌摇瓶中加入一定浓度的氯霉素或壮观霉素以扩增质粒DNA。
质粒DNA扩增的理论依据是什么?
这种质粒DNA扩增的方法为何并不具有普遍性?
159．E.ColiK12菌株的限制一修饰系统分别由R.M基因控制现有K12的三个突变菌系，当用A噬菌体分别感染三个突变株后，将放出的噬菌体再去感染这三个菌株。
得到如下不同的eop值，请判断这三个突变株的有关（R.M）基因型。
放出A的原始菌株
K12-1
K12—2
K12—3
1
10-2
160．现有两种DNA片段：
1）ATTCCAGGATCCTGGCACCG
TAAGGTCCTAGGACCGTGGC
2）CGATCTCCTAGATCTCAC
GCTAGAGGATCTAGAGTG
分别用形成等列序列的同裂酶<
Isoschizomer>
MboI和Sau3A消化后，混合，加入连接酶，会形成什么样的DNA片段。
161．现有枯草杆菌dnaG基因的一个终止突变型菌株，当用HA处理后，会得到什么结果？
说明理由。
162．下表中，a、b、c代表E.coli的Lacoperon中的i、o、z三个基因。
A）根据不同试验菌株在效应物有无的条件下，测定Z酶的表达结果，说明a、b、c各代表哪个基因。
B）用i、o、z三个基因代号写出第①、⑤菌株的可能基因型。
菌株基因型
有Lac
无Lac
①a-b+c+
+
②a+b+c-
③a+b-c+/F’-a-b+c-
④a+b+c-/F’-a-b-c+
-
⑤a-b=c+/F’-a=b-c-
163.一位科学研究λ噬菌体的一个蛋白质的功能时，获得了以下几个试验结果。
A、当用HA处理野生型λ噬菌体后，分离得到一个突变体a（mu+a），它只产生该蛋白质的一个片段。
B、当用5Bru处量muta后，又分离出两个突变体，mu+b,mu+c，它们也只产生与muta后相同长度的该蛋白质的一个片段。
C、mu+a，mu+b,mu+c分别可以在不同的Su+基因型细胞合成该蛋白质的正常多肽链。
基因型
Su-
Su2+
Su4+
Su6+
Su-→Su+的DNA序列突变
5°
CGA3’
3°
GCT5’
↓
CTA3’
GAT5’
TTG
AAC
TTA
AAT
CCA
GGT
TCA
AGT
mu+a
mu+b
mu+c
—
D、当感染有mu+a的Su4+细菌分别与感染有mu+b的Su2+感染有mu+c的Su6+细菌结合后，没有野生型重组λ噬菌体产生，不能在野生型Su-受菌体繁殖，但当感染有mu+b的Su2+与感染有mu+c的Su6+细菌结合后的极少数野生型λ噬菌体产生。
请推测mu+a,mu+b,mu+c分别在su4+、su2+、su6+细菌产生的蛋白质与野生型λ合成的该蛋白质的差异，并解释A、B、C、D结果。
（CAA为谷氨酰胺的密码子：
UCG为丝氨酸的密码子；
UGG为色氨酸的密码子）
164．大豆phasealin（菜豆朊）是在种子特异表达的一种分泌性蛋白，请用线段示意出该基因在DNA水平上的全部结构区域，以及Pre-mRNA，mature-mRNA，多肽链的对应区域，并标明各区域的名称。
（提示：
该基因的各区域包括：
Promoter（含3个重要的Site或Box）,Terminator,LeaderSeq.,Trailerseq.,Signalseq.,Chambonrul
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