R碳酸丙烯酯Ee值分析方法验证方案.docx
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R碳酸丙烯酯Ee值分析方法验证方案
（R）-碳酸丙烯酯Ee值分析方法验证方案
分析方法验证方案编号：
INSERIREROBUSTEZZASOSTANZECORRELATE
anchenellanumerazioneindice
起草人
审核人
批准人
2范围………………………………………….………………………………….....2
3标准………………………………………….…………………………….……....2
4职责………………………………………….…………………………………….3
5简述………………………………………….…………..………………….……..3
6培训………………………………………….………………………………….....3
7有关物质分析方法…………………….……………………………………….....3
8.6精密度…….…………………..………………….…………………….….........16
8.6.1重复性…….……………..………………….…………………….…......16
8.6.2中间精密度…….……………..…………….…………………….…......18
1、目的
确保按（R）-碳酸丙烯酯Ee值分析方法检测，能达到测试（S）-碳酸丙烯酯含量的要求。
2范围
适用于****公司生产的（R）-碳酸丙烯酯测试（S）-碳酸丙烯酯含量。
3、可接受标准（依据中国药典2015版四部通则9101药品质量标准分析方法验证指导原则）
项目
标准
专属性
（R）-碳酸丙烯酯和（S）-碳酸丙烯酯之间的分离度不小于1.5
检测限
信噪比为2:
1～3:
1时，或能明显检测出的浓度不高0.3%。
定量限
信噪比约10:
1时，或能明显检测出的浓度不高于0.5%。
准确度
（S）-碳酸丙烯酯定量限浓度回收率在80%~120%之间
线性
浓度在定量限到限度的120%内，线性相关系数
≥0.995。
准确度和范围
50%
回收率在90%~108%之间
100%
回收率在90%~108%之间
120%
回收率在90%~108%之间
精密度
重复性
测试6份样品的RSD不得过2.0%。
中间精密度
测试6份样品的RSD不得过2.0%。
2分析员测试12份样品的RSD不得过2.0%。
耐用性
改变流速、柱温、进样口和检测器等条件，不同规格或不同批次的色谱柱测试（R）-碳酸丙烯酯和（S）-碳酸丙烯酯的分离度和相对保留时间。
溶液稳定性
测试溶液间隔一定时间后，测得（S）-碳酸丙烯酯的RSD不得过10.0%
4职责
QC负责分析方法验证文件起草和实施。
QA经理负责分析方法验证文件起草和审核，及文件与记录的管理。
QC经理负责分析方法验证文件和记录和数据的审核。
质量总监负责分析方法验证方案和报告的批准。
5简述
6培训
于验证铅对操作人员进行了本分析方法验证的培训。
7（S）-碳酸丙烯酯检查方法
用β-环糊精衍生物为固定液的毛细管柱为色谱柱（例如ChiraldexB-DM30m×0.25mm×0.12um），
柱温100℃；进样口温度为300℃，检测器温度为300℃；总流速为每分钟60ml，分流比为50:
1。
取样品直接进样，精密量取0.2μl，注入气相色谱仪，记录色谱图，按面积归一化法计算，纯度不得少于99.0%。
本验证方案所用工作对照品及样品信息
/
来源
批号
含量
（R）-碳酸丙烯酯工作对照品
（S）-碳酸丙烯酯工作对照品
（R）-碳酸丙烯酯样品批号
8分析方法验证
8.1专属性
电子天平型号
编号
气相色谱仪型号
编号
进样口温度为300℃，
检测器温度为300℃
分流比为50:
1
nm
流速：
60ml/min
ml/min
柱温：
100℃
℃
进样量：
0.2μl
μl
色谱柱：
ChiraldexB-DM30m×0.25mm×0.12um
编号
8.1.1溶液配制
专属性溶液：
精密移取（S）-碳酸丙烯酯1.0ml用（R）-碳酸丙烯酯稀释至100ml。
8.1.2操作
依次进样（S）-碳酸丙烯酯、（R）-碳酸丙烯酯、专属性溶液各1针，记录色谱图，计算专属性溶液中（S）-碳酸丙烯酯和（R）-碳酸丙烯酯的保留时间、分离度、理论塔板数和拖尾因子。
8.1.3结果如下：
名称
（S）-碳酸丙烯酯
（R）-碳酸丙烯酯
保留时间
相对保留时间（以（R）-碳酸丙烯酯为1）
分离度
理论塔板数
拖尾因子
结论：
检验人：
复核人：
8.2检测限
分别称取适量的（S）-碳酸丙烯酯和（R）-碳酸丙烯酯用甲醇稀释至（S）-碳酸丙烯酯和（R）-碳酸丙烯酯的主峰信噪比约2~3：
1。
8.2.1溶液配制
8.2.2操作
将调整好的溶液重复测试3次，记录色谱图。
8.2.3结果如下：
名称
浓度（μg/ml）
相当于供试液的百分比
信噪比
1
2
3
平均值
（S）-碳酸丙烯酯
（R）-碳酸丙烯酯
结论：
检验人：
复核人：
8.3定量限
分别称取适量的（S）-碳酸丙烯酯和（R）-碳酸丙烯酯用甲醇稀释至（S）-碳酸丙烯酯和（R）-碳酸丙烯酯的主峰信噪比约10：
1。
8.3.1溶液配制
8.3.2操作
将调整好的溶液重复测试6次，记录色谱图。
8.3.3结果如下：
名称
浓度（μg/ml）
相当于供试液的百分比
信噪比
1
2
3
4
5
6
平均值
（S）-碳酸丙烯酯
（R）-碳酸丙烯酯
8.4线性
8.4.1溶液配制
溶液配制范围，从定量限到标准限度的120%。
L1：
定量限浓度
L2：
分别称取适量的（S）-碳酸丙烯酯和（R）-碳酸丙烯酯用甲醇稀释至（S）-碳酸丙烯酯和（R）-碳酸丙烯酯。
（含（S）-碳酸丙烯酯和（R）-碳酸丙烯酯各约1mg/ml，0.1%）；
L3：
分别称取适量的（S）-碳酸丙烯酯和（R）-碳酸丙烯酯用甲醇稀释至（S）-碳酸丙烯酯和（R）-碳酸丙烯酯。
（含（S）-碳酸丙烯酯和（R）-碳酸丙烯酯各约2mg/ml，0.2%）；
L4：
分别称取适量的（S）-碳酸丙烯酯和（R）-碳酸丙烯酯用甲醇稀释至（S）-碳酸丙烯酯和（R）-碳酸丙烯酯。
（含（S）-碳酸丙烯酯和（R）-碳酸丙烯酯各约5mg/ml，0.5%）；
L5：
分别称取适量的（S）-碳酸丙烯酯和（R）-碳酸丙烯酯用甲醇稀释至（S）-碳酸丙烯酯和（R）-碳酸丙烯酯。
（含（S）-碳酸丙烯酯和（R）-碳酸丙烯酯各约10mg/ml，1%）；
L6：
分别称取适量的（S）-碳酸丙烯酯和（R）-碳酸丙烯酯用甲醇稀释至（S）-碳酸丙烯酯和（R）-碳酸丙烯酯。
（含（S）-碳酸丙烯酯和（R）-碳酸丙烯酯各约12mg/ml，1.2%）；
8.4.2操作：
依次进样溶剂（甲醇）1针、L1~L6各2针，记录色谱图，计算（S）-碳酸丙烯酯和（R）-碳酸丙烯酯的线性方程。
线性方程中相关系数R2≥0.995，（S）-碳酸丙烯酯和（R）-碳酸丙烯酯之间的校正因子
8.4.3结果如下：
（S）-碳酸丙烯酯
浓度（μg/ml）
面积
平均峰面积
RF值
1
2
L1
L2
L3
L4
L5
L6
平均值
线性方程：
（R）-碳酸丙烯酯
浓度（μg/ml）
面积
平均峰面积
RF值
1
2
L1
L2
L3
L4
L5
L6
平均值
线性方程：
结论：
检验人：
复核人：
8.5准确度和范围
8.5.1色谱条件同专属性项下。
范围应根据分析方法的具体应用及其线性、准确度、精密度结果和要求确定。
通常情况下是选择50%、100%、150%进行分析，通过对被分析物的百分回收率得出的准确度及其置信区间来评价杂质分析方法的准确性。
回收率在90%~108%之间。
范围的可接受标准为不得小于报告限至限度的120%。
8.5.2溶液配制
对照液：
精密称取（S）-碳酸丙烯酯工作对照品mg100μl于10ml量瓶中，用（R）-碳酸丙烯酯稀释至刻度。
（含（S）-碳酸丙烯酯约10mg/ml，1%）
A1：
精密称取（S）-碳酸丙烯酯工作对照品mg50μl于10ml量瓶中，用（R）-碳酸丙烯酯稀释至刻度。
（含（S）-碳酸丙烯酯约5mg/ml，0.5%）。
共配制3份。
记录色谱图，计算（S）-碳酸丙烯酯回收率。
A2：
精密称取（S）-碳酸丙烯酯工作对照品mg100μl于10ml量瓶中，用（R）-碳酸丙烯酯稀释至刻度。
（含（S）-碳酸丙烯酯约10mg/ml，1%）。
共配制3份。
记录色谱图，计算（S）-碳酸丙烯酯回收率。
A3：
精密称取（S）-碳酸丙烯酯工作对照品mg150μl于10ml量瓶中，用（R）-碳酸丙烯酯稀释至刻度。
（含（S）-碳酸丙烯酯约15mg/ml，1.5%）。
共配制3份。
记录色谱图，计算（S）-碳酸丙烯酯回收率。
8.5.3操作：
依次进空白（（R）-碳酸丙烯酯）1针、对照液3针，（A1，A2，A3）各1针，记录色图谱。
8.5.4计算公式：
；增加量=检出量-空白量；
；
式中：
Az：
空白溶液中各杂质的峰面积；Cv：
加入样品的浓度（mg/ml）；
m：
测试溶液称样量；CX：
空白样品的浓度（mg/ml）；
V：
加入的体积；P：
各杂质的含量。
8.5.5结果如下
对照液
1
2
3
4
5
平均值
SD
RSD
（S）-碳酸丙烯酯
A1结果
（S）-碳酸丙烯酯
测试液称样量（mg）
峰面积
空白量（μg）
检出量（μg）
增加量（μg）
加入量（μg）
回收率（%）
A1.1
A1.2
A1.3
平均值
SD
RSD
A2结果
（S）-碳酸丙烯酯
测试液称样量（mg）
峰面积
空白量（μg）
检出量（μg）
增加量（μg）
加入量（μg）
回收率（%）
A2.1
A2.2
A2.3
平均值
SD
RSD
A3结果
（S）-碳酸丙烯酯
测试液称样量（mg）
峰面积
空白量（μg）
检出量（μg）
增加量（μg）
加入量（μg）
回收率（%）
A3.1
A3.2
A3.3
平均值
SD
RSD
8.5.6结论：
检验人：
复核人：
结合线性范围，得出按本分析方法检测（S）-碳酸丙烯酯含量的准确范围为：
8.6精密度
8.6.1重复性
色谱条件同专属性项下。
8.6.1.1溶液配制
对照液：
精密称取（S）-碳酸丙烯酯工作对照品mg100μl于10ml量瓶中，用（R）-碳酸丙烯酯稀释至刻度。
（含（S）-碳酸丙烯酯约10mg/ml，1%）
供试液：
精密称取（S）-碳酸丙烯酯工作对照品mg100μl于10ml量瓶中，用（R）-碳酸丙烯酯稀释至刻度。
（含（S）-碳酸丙烯酯约10mg/ml，1%）。
共配制6份。
记录色谱图。
8.6.1.2操作：
依次进对照液3针和供试液各1针，记录色谱图。
计算公式：
（S）-碳酸丙烯酯=
8.6.1.3结果见下表
对照液
1
2
3
4
5
平均值
SD
RSD
（S）-碳酸丙烯酯
测试液结果
项目
称样量
（S）-碳酸丙烯酯
峰面积
含量
P1
P2
P3
P4
P5
P6
平均值
/
RSD
/
8.6.1.4结论：
检验人：
复核人：
8.6.2中间精密度
8.6.2.1色谱条件
电子天平型号
编号
气相色谱仪型号
编号
进样口温度为300℃，
检测器温度为300℃
分流比为50:
1
nm
流速：
60ml/min
ml/min
柱温：
100℃
℃
进样量：
0.2μl
μl
色谱柱：
ChiraldexB-DM30m×0.25mm×0.12um
编号
8.6.1.1溶液配制
对照液：
精密称取（S）-碳酸丙烯酯工作对照品mg100μl于10ml量瓶中，用（R）-碳酸丙烯酯稀释至刻度。
（含（S）-碳酸丙烯酯约10mg/ml，1%）
供试液：
精密称取（S）-碳酸丙烯酯工作对照品mg100μl于10ml量瓶中，用（R）-碳酸丙烯酯稀释至刻度。
（含（S）-碳酸丙烯酯约10mg/ml，1%）。
共配制6份。
记录色谱图。
8.6.1.2操作：
依次进对照液3针和供试液各1针，记录色谱图。
计算公式：
（S）-碳酸丙烯酯=
8.6.1.3结果见下表
对照液
1
2
3
4
5
平均值
SD
RSD
（S）-碳酸丙烯酯
测试液结果
项目
称样量
（S）-碳酸丙烯酯
峰面积
含量
IP1
IP2
IP3
IP4
IP5
IP6
平均值
/
RSD
/
8.6.2.4结论：
检验人：
复核人：
8.6.3测试员之间的值
项目
（S）-碳酸丙烯酯
含量
P1
P2
P3
P4
P5
P6
IP1
IP2
IP3
IP4
IP5
IP6
平均值
RSD
8.6.4结论：
检验人：
复核人：
8.7耐用性
8.7.1改变流速、柱温、进样口和检测器温度，不同规格或不同批次的色谱柱测试（R）-碳酸丙烯酯和（S）-碳酸丙烯酯的分离度和相对保留时间。
8.7.1.1溶液配制
取专属性项下的专属性溶液。
8.7.1.2改变条件
/
柱温，℃
流速ml/min
检测器温度
进样口温度
色谱柱
正常条件
100
60
300℃
300℃
ChiraldexB-DM30m×0.25mm×0.12um
条件1
100
55
300℃
300℃
ChiraldexB-DM30m×0.25mm×0.12um
条件2
100
65
300℃
300℃
ChiraldexB-DM30m×0.25mm×0.12um
条件3
95
60
300℃
300℃
ChiraldexB-DM30m×0.25mm×0.12um
条件4
105
60
300℃
300℃
ChiraldexB-DM30m×0.25mm×0.12um
条件5
100
60
280
300℃
ChiraldexB-DM30m×0.25mm×0.12um
条件6
100
60
300℃
280
ChiraldexB-DM30m×0.25mm×0.12um
条件7
100
60
300℃
300℃
8.7.1..3操作
依次进空白和以上条件各1针，记录色谱图，（S）-碳酸丙烯酯和（R）-碳酸丙烯酯分离不小于1.5。
8.7.1..4结果如下：
（S）-碳酸丙烯酯
（R）-碳酸丙烯酯
正常条件
RT（min）
RRT
分离度
条件1
RT（min）
RRT
分离度
条件2
RT（min）
RRT
分离度
条件3
RT（min）
RRT
分离度
条件4
RT（min）
RRT
分离度
条件5
RT（min）
RRT
分离度
条件6
RT（min）
RRT
分离度
条件7
RT（min）
RRT
分离度
结论：
检验人：
复核人：
8.7.2溶液稳定性
8.7.2.1溶液配制
取精密度项下的供试液
8.7.2.2操作
依次进空白1针、测试液每间隔一定时间进样1针，记录图谱图。
8.7.2.3结果如下：
时间
（S）-碳酸丙烯酯面积
（R）-碳酸丙烯酯面积
h
h
h
h
h
h
h
h
h
h
h
h
h
h
h
h
h
h
结论：
检验人：
复核人：
8.8样品测试
按此验证的方法测试三批样品
9结论
项目
标准
结果
专属性
（R）-碳酸丙烯酯和（S）-碳酸丙烯酯之间的分离度不小于1.5
检测限
信噪比为2:
1～3:
1时，或能明显检测出的浓度不高0.3%。
定量限
信噪比约10:
1时，或能明显检测出的浓度不高于0.5%。
准确度
（S）-碳酸丙烯酯定量限浓度回收率在80%~120%之间
线性
浓度在定量限到限度的120%内，线性相关系数
≥0.995。
准确度和范围
50%
回收率在90%~108%之间
100%
回收率在90%~108%之间
120%
回收率在90%~108%之间
精密度
重复性
测试6份样品的RSD不得过2.0%。
中间精密度
测试6份样品的RSD不得过2.0%。
2分析员测试12份样品的RSD不得过2.0%。
耐用性
改变流速、柱温、进样口和检测器等条件，不同规格或不同批次的色谱柱测试（R）-碳酸丙烯酯和（S）-碳酸丙烯酯的分离度和相对保留时间。
溶液稳定性
测试溶液间隔一定时间后，测得（S）-碳酸丙烯酯的RSD不得过10.0%
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