实用血培养厌氧菌分离鉴定及药敏试验方文档格式.doc
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哥伦比亚血琼脂
新鲜配制或经24h预还原(厌氧环境放置)!
!
特殊成份(降低氧还电势):
L-半胱氨酸、氯化血红素(Hemin)、VitK1
·
选择性厌氧血平板:
自制、商商品化
三、厌氧血培养瓶报警后
步骤一:
转种
转种(四区划线)
需氧
厌氧
血平板、巧克力平板,5%CO2
还原后的厌氧血平板
24h检查
生长,G染色,分离,鉴定
——
48h检查
原始平板是否有新菌落出现
打开
步骤二:
耐氧试验确认厌氧菌
培养48h后可能有以下几种情况
血平板
巧克力平板
处理方法
厌氧血平板
情况一
+
常规
耐氧试验、G染色
再培养48h
情况二
—
可能流感杆菌
情况三
G染色,厌氧菌
情况一和二:
耐氧试验24-48h再观察结果,有确认厌氧菌的菌落按下边鉴定步骤。
耐氧试验方法:
选择每种形态的单菌落,转种一个厌氧血平皿和巧克力平皿,分别培养。
情况三:
相当于耐氧试验,再结合菌落菌体形态,可以确认厌氧菌,用以下方法鉴定。
四、厌氧菌鉴定方法
(一)快速商品鉴定系统(4h报告结果)
1无须厌氧培养,4h培养后人工输入结果,电脑软件辅助报告结果:
VITEKANI卡
RapID32A
MicroScanAnareobePanel
RapIDANAII等
2厌氧环境培养24-48h观察结果
API20A
特点是快速,可鉴定到种水平,但有时不一定获得满意结果,可同时进行以下操作提供临床初步报告。
(二)初步鉴定方法
1临床重要的厌氧菌特殊菌落形态和菌体形态及特征(图示)
G-cb有色素——普雷沃菌、卟啉单胞菌
细G-b,两端变尖——具核梭菌
多晶(空泡),染色着色浅G-b——拟杆菌属
非常小的G-c——韦容球菌属
“咬”琼脂(凹陷)——解尿拟杆菌群
2产色素、荧光
产黑色素拟杆菌——卟啉单胞菌、普雷沃菌
砖红色荧光——中间普雷沃菌、洛氏普雷沃菌
黄绿色荧光——梭杆菌属
3特殊鉴定用抗生素纸片(Oxoid,BBL,Diffico等)
万古霉素5μg/ml
卡那霉素1,00μg/ml
多粘菌素10μg/ml
聚茴香脑磺酸钠(SPS)1,00μg/ml:
抑菌环直径小于10mm(R),大于12mm(S)
于厌氧血平皿贴1/4平皿(划线第一区);
如果需要硝酸盐或SPS纸片,则贴另1/4区
菌群万古卡那多粘菌素SPS
G-RVV
G+SVV
B.frag群RRR
解尿拟杆菌群RSS
梭杆菌属RSS
卟啉单胞菌属SRR
普雷沃菌属RRV
韦荣氏球菌属RSS
厌氧消化链球菌SRsRS
其他G+cSSRR
4生化反应
触酶、吲哚、硝酸盐
五、厌氧菌药敏
1经验用药
J>
99%厌氧菌对甲硝唑、克林霉素、氯霉素、亚胺培南敏感
J95—99%β-内酰胺酶/β-内酰胺酶抑制剂复合抗生素类、
K革兰阴性厌氧杆菌对头孢菌素类抗生素敏感性不同,头孢菌素类、β-内酰胺酶、青霉素类等。
2常规做厌氧菌药敏试验指征
脑脓肿、心内膜炎、骨髓炎、关节感染、血管移植、辅助装置、菌血症从正常无菌部位来源的标本,除非确认是污染的。
J医生是否要求做药敏试验是非常重要的
L当几种菌混合感染确定哪个菌做药敏,做什么抗生素很难判断,一般来讲,具有高致病性的菌或不能预测药敏结果的常用抗生素,或两者具备,考虑做药敏试验,包括拟杆菌属某些种,普雷沃菌属、梭杆菌属,梭菌,Bilophila,andSutterella.
L不能用临床标本直接做药敏
3常规厌氧菌药敏方法
1)β-内酰胺酶
除脆弱拟杆菌外的菌在做药敏试验前都应检测β-内酰胺酶试验。
决大多数脆弱拟杆菌都产β-内酰胺酶,应报告青霉素、阿莫西林和氨苄西林耐药。
2)E-test方法
重症,血培养来源的厌氧菌适用。
E-test方法是琼脂稀释法的替代方法,注意判读结果时尽量保守,否则容易出现“非常主要错误”。
E-test方法是精确和实用的药敏试验方法。
3)其他适合临床使用的商品药敏系统
Dubreuil等评价ATBANA(Version96)系统(生物梅里埃)与琼脂稀释法对200株临床分离厌氧菌对9种抗生素的结果后指出,ATBANA是临床做厌氧菌药敏试验非常方便的方法,结果与参考方法较符合。
此系统可按照法国临床微生物学会抗生素分会和NCCLS两种标准解释结果。
六、报告结果
初级报告
最终报告