实验常用试剂缓冲液培养基的配制方法孤岛颠人收藏.docx

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实验常用试剂缓冲液培养基的配制方法孤岛颠人收藏

生物实验常用试剂、缓冲液，培养基的配制方法

孤岛颠人收藏

1、1MTris-HCl     

★组份浓度1MTris-HCl（pH7.4，7.6，8.0）

★配制量1L

★配置方法

1.称量121.1gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

      pH值                     浓HCl 

    7.4                        约70mL

7.6                        约60mL

8.0                        约42mL

4.将溶解定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2、1.5MTris-HCl  

★组份浓度1.5MTris-HCl   （pH8.8） 

★配制量1L

★配置方法

称取181.7gTris置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.用浓盐酸调pH值至8.8。

4.将溶液定容至1L。

5.高温高压灭菌后，室温保存。

★注意：

应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

3、10×TEBuffer       

★组份浓度100mMTris-HCl，10mMEDTA（pH7.4，7.6，8.0）

★配制量1L

★配置方法

1.量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1MTris-HClBuffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL

                            500mMEDTA（pH8.0）20mL

2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。

3.将溶液定至1L后，高温高压灭菌。

4.室温保存。

4、3M醋酸钠    

★组份浓度3M醋酸钠   （pH5.2）

★配制量100mL

★配置方法

称取40.8gNaOAc•3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。

加入冰乙酸调节pH值至5.2。

3.加入去离子水将溶液定容至100mL。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

5、Buffer       

★组份浓度137mMNaCl，2.7mMKCl，10mMNa2HPO4，2mMKH2PO4

★配制量1L

★配置方法

称量下列试剂，置于1L烧杯中。

                                                     NaCl                   8g

                                                     KCl                     0.2g

                                                     Na2HPO4          1.42g

                                                     KH2PO4            0.27g

2.向烧杯中加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。

4.高温高压灭菌后，室温保存。

★注意：

上述PBSBuffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mMCaCl2和0.5mMMgCl2。

6、10M醋酸铵        

★组份浓度10M醋酸铵                               

★配制量100mL

★配置方法

1.称量77.1g醋酸铵置于100～200mL烧杯中，加入约30mL的去离子水搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至100mL。

3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。

4.密封瓶口于室温保存。

 ★注意：

醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

7、Tris-HCl平衡苯酚   

★配置方法

使用原料：

大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。

但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。

同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。

因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。

操作注意：

苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。

所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。

3.苯酚平衡：

因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：

①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。

从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。

②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。

该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。

有助于方便识别有机相。

③加入等体积的1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

④重复操作步骤③。

⑤加入等体积的0.1MTris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。

⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。

⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。

⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

8、苯酚/氯仿/异戊醇 

★配置方法

说明：

从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异戊醇（25：

24：

1）。

氯仿可使蛋白（25：

24：

1）质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

2.配置方法：

将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24：

1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

9、10％（W/V）SDS 

★组份浓度10％（W/V）SDS

★配制量100mL

★配置方法

称量10g高纯度的SDS置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水，68℃加热溶解。

2.滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。

3.将溶液定容至100mL后，室温保存。

10、2NNaOH          

★组份浓度2NNaOH

★配制量100mL 

★配置方法

量取80mL去离子水置于100～200mL塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。

2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100mL。

4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

11、2.5NHCl        

★组份浓度2.5NHCl

★配制量100mL

★配置方法

1.在78.4mL的去离子水中加入21.6mL的浓盐酸（11.6N），均匀混合。

2.室温保存。

12、5MNaCl        

★组份浓度5MNaCl

★配制量1L

★配置方法

称取292.2gNaCl置于1L烧杯中，加入约800mL的去离子水后搅拌溶解。

2.加去离子水将溶液定容至1L后，适量分成小份。

3.高温高压灭菌后，4℃保存。

13、20％（W/V）Glucose    

★组份浓度20％（W/V）Glucose 

★配制量100mL 

★配置方法

称取20gGlucose置于100～200mL烧杯中，加入约80mL的去离子水后，搅拌溶解。

加去离子水将溶液定容至100mL。

高温高压灭菌后，4℃保存。

14、SolutionI  （质粒提取用）      

★组份浓度25mMTris-HCl（pH8.0），10mMEDTA，50mMGlucose

★配制量1L

★配置方法

量取下列溶液，置于1L烧杯中。

1MTris-HCl（pH8.0）            25mL

                           0.5MEDTA（pH8.0）           20mL 

                           20％Glucose（1.11M）          45mL

                              dH2O                                   910mL

2.高温高压灭菌后，4℃保存。

3.使用前每50mL的SoliutionI中加入2mL的RNaseA（20mg/mL）。

15、SolutionII  （质粒提取用）   

★组份浓度250mMNaOH，1％（W/V）SDSm

★配制量500mL

★配置方法

1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。

                                                       10％SDS                       50mL

                                                        2NNaOH                       50mL 

2.加灭菌水定容至500mL，充分混匀。

3.室温保存。

此溶液保存时间最好不要超过一个月。

★注意：

SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。

16、SolutionIII （质粒提取用）

★组份浓度3MKOAc，5MCH3COOH

★配制量500mL

★配置方法

1.量取下列溶液置于500mL烧杯中。

                                                       KOAc                           147g

                                                       CH3COOH                   57.5mL 

2.加入300mL去离子水后搅拌溶解。

3.加去离子水将溶液定容至500mL。

4.高温高压灭菌后，4℃保存。

17、0.5MEDTA           

★组份浓度0.5MEDTA （pH8.0）      

★配制量1L

★配置方法

1.称取186.1gNa2EDTA•2H2O，置于1L烧杯中。

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌。

3.用NaOH调节pH值值8.0（约20gNaOH）。

注意：

pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。

4.加去离子水将溶液定容至1L。

5.适量分成小份后，高温高压灭菌。

6.室温保存。

18、1MDTT         

★组份浓度1MDTT

★配制量20mL

★配置方法

1.称取3.09gDTT，加入到50mL塑料离心管内。

2.加20mL的0.01M的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌。

3.适量分成小份后，-20℃保存。

19、10mMATP           

★组份浓度10mMATP

★配制量20mL

★配置方法

1.称取121mgNa2ATP•3H2O，加入到50mL塑料离心管内。

2.加20mL的25mMTris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。

3.适量分成小份，-20℃保存。

分子生物学实验常用培养基的配制方法

1、Ampicillin             

★组份浓度100mg/mlAmpicillin（100mg/ml）  

★配制量50mL

★配置方法

1.称量5gAmpicillin置于50mL离心管中。

2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。

3.用0.22μm滤膜过滤除菌。

4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。

2、IPTG                   

★组份浓度24mg/mLIPTG（24mg/mL）

★配制量50mL

★ 配置方法

1.称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。

2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。

3.用0.22μm滤膜过滤除菌。

4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。

3、X-Gal         

★组份浓度20mg/mLX-Gal（20mg/mL）            

★配制量50mL

★配置方法

1.称取1gX-Gal置于50mL离心管中。

2.加入40mLDMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。

3.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。

4、LB培养基             

★组份浓度1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）YeastExtract，1％（W/V）NaCl

★配制量1L

★配置方法

1.称量下列试剂，置于1L烧杯中

                        Tryptone                          10g

                          YeastExtract                   5g 

                         NaCl                              10g

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

3.滴加5NNaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。

4.高温高压灭菌后，4℃保存。

5、LB/Amp培养基     

★组份浓度

1％（W/V）       Tryptone

0.5％（W/V）   YeastExtract

1％（W/V）       NaCl

0.1mg/mL            Ampicillin

★配制量1L        

★配置方法

1.称量下列试剂，置于1L烧杯中

                                                      Tryptone                     10g

                                                      YeastExtract               5g

                                                      NaCl                          10g

2.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

滴加5NNaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。

4.加去离子水将培养基定容至1L。

5.高温高压灭菌后，冷却至室温。

6.加入1mLAmpicillin（100mg/mL）后均匀混合。

7.4℃保存。

6、TB培养基            

★组份浓度    1.2％（W/V）     Tryptone

                                                      2.4％（W/V）    YeastExtract

                                                      0.4％（V/V）       Glycerol 

                                                       17mM                  KH2PO4

                                                      72mM                  K2HPO4 

★配制量1L     

★配置方法

1.配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。

2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

                                                      Tryptone                          12g 

                                                       YeastExtract                   24g

                                                      Glycerol                             4mL 

3.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

4.加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。

5.待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液。

6.4℃保存。

7、TB/Apm培养基   

★组份浓度1.2％（W/V）   Tryptone 

                    2.4％（W/V）   YeastExtract

                     0.4％（V/V）     Glycerol

                   17mM                KH2PO4

                    72mM                K2HPO4

                    0.1mg/mL          Ampicillin 

★配制量1L

★配置方法

1.配制磷酸盐缓冲液（0.17MKH2PO4，0.72MK2HPO4）100mL。

溶解2.31gKH2PO4和2.54gK2HPO4于90mL的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至100mL，高温高压灭菌。

2.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

                                                     Tryptone                       12g

                                                     YeastExtract                24g 

                                                      Glycerol                          4mL

3.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

4.加去离子水将培养基定容至1L后，高温高压灭菌。

5.待溶液冷却至60℃以下时，加入100mL的上述灭菌磷酸盐缓冲液和1mLAmpicillin（100mg/mL）。

6.均匀混合后4℃保存。

8、SOB培养基        

★组份浓度2％（W/V）      Tryptone

                                                 0.5％（W/V）   YeastExtract

                                                 0.05％（W/V）NaCl

                                                 2.5mM               KCl

                                                10mM                MgCl2 

★配制量1L

★配置方法

1.配制250mMKCl溶液。

 在90mL的去离子水中溶解1.86gKCl后，定容至100mL。

2.配制2MMgCl2溶液。

在90mL的去离子水中溶解19gMgCl2后，定容至100mL，高温高压灭菌。

3.称取下列试剂，置于1L烧杯中。

                                                     Tryptone                       20g

                                                    YeastExtract                 5g

                                                    NaCl                            0.5g

4.加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。

5量取10mL250mMKCl溶液，加入到烧杯中。

6.滴加5NNaOH溶液（约0.2mL），调节pH值至7.0。

7.加入去离子水将培养基定容至1L。

8.高温高压灭菌后，4℃保存。

9.使用前加入5mL灭菌的2MMgCl2溶液。

9、SOC培养基         

★组份浓度   2％（W/V）          Tryptone

                                                   0.5％（W/V）             YeastExtract

                                                   0.05％（W/V）