常用培养基配方.docx

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常用培养基配方

常用培养基配方

（微生物学与微生物检验学部分）

渤海大学生物与食品科学学院

2006年3月

01糖发酵管

02ONPG培养基

03西蒙氏柠檬酸盐培养基

04缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR和VP试验用）

05克氏柠檬酸盐培养基

06丙二酸钠培养基

07葡葡糖铵培养基

08　Hugh－Leifson培养基（O/F试验用）

09马尿酸钠培养基

10营养明胶

11苯丙氨酸培养基

12氨基酸脱羧酶试验培养基

13蛋白胨水（靛基质试验用）

14硫酸亚铁琼脂（硫化氢试验用）

15尿素琼脂

16氰化钾（KCN）培养基

17氧化酶试验

18硝酸盐培养基

19细胞色素氧化酶试验

20过氧化氢酶试验

21过氧化物酶试验

22磷酸盐缓冲液

23明胶磷酸盐缓冲液

24乳酸－苯酚溶液

25肉浸液肉汤

26肉浸液琼脂

27牛肉（或牛心）消化汤

28血消化汤

29豆粉琼脂

30血琼脂

31营养琼脂

32营养肉汤

33乳糖胆盐发酵管

34乳糖发酵管

35EC肉汤

36缓冲蛋白胨水（BP）

37氯化镁孔雀绿增菌液（MM）

38四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）

39四硫磺酸钠煌绿增菌液（换用方法）

40亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）

41GN增菌液

42肠道菌增菌肉汤

43亚硫酸铋琼脂（BS）

44DHL琼脂

45HE琼脂

46SS琼脂

47WS琼脂

48麦康凯琼脂

49伊红美蓝琼脂（EMB）

50三糖铁琼脂（TSI）

51三糖铁琼脂（换用方法）

52克氏双糖铁琼脂（KI）

53克氏双糖铁琼脂（换用方法）

54葡萄糖半固体发酵管

555%乳糖发酵管

56CAYE培养基

57Honda氏产毒肉汤

58Elek氏培养基（毒素测定用）

59氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基

60胰蛋白胨水

61Rustigian氏尿素培养液

62氯化钠结晶紫增菌液

63氯化钠蔗糖琼脂

64嗜盐菌选择性琼脂

653.5%氯化钠三糖铁琼脂

66氯化钠血琼脂

673.5%氯化钠生化试验培养基

68改良磷酸盐缓冲液（小肠结肠炎耶尔森氏菌专用）

69CIN－1培养基

70嗜盐性试验培养基

71改良Y培养基

72改良克氏双糖

73快速硫化氢（H2S）试验琼脂

74DNA酶甲基绿琼脂（DTA）

75Cary－Blair氏运送培养基

76Skirrow氏培养基

77TTC琼脂

78甘氨酸培养基

79改良磷酸盐缓冲液

80氯化镁孔雀绿肉汤

81胰酪胨大豆肉汤

82Baird－Parker氏培养基

837.5%氯化钠肉汤

84匹克氏肉汤

85甘露醇卵黄多粘菌素琼脂

863.8%柠檬酸钠溶液

87酪蛋白琼脂

88木糖－明胶培养基

89庖肉培养基

90卵黄琼脂培养基

91亚硫酸盐－多粘菌素－磺胺嘧啶琼脂（SPS）

92液体硫乙醇酸盐培养基（FT）

93含铁牛奶培养基

94动力-硝酸盐培养基（A法）

95动力－硝酸盐培养基（B法）

96血清肉汤

97马丁氏肉汤

98明胶培养基

99察氏培养基

100高盐察氏培养基

101马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）

102马铃薯琼脂

103孟加拉红培养基

104玉米粉琼脂

105大米粉培养基

106亚硒酸盐煌绿增菌液

107煌绿肉汤增菌液

108肠毒素产毒培养基

1090.1%蛋白胨水稀释剂

110半固体琼脂

01糖发酵管

成分：

　牛肉膏　　　　　　5g

　　蛋白胨　　　　　　10g

　　氯化钠　　　　　　3g

　　磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）　　2g

　　0.2%滇麝香草酚蓝溶液　12mL

　　蒸馏水　　　　　　1000mL

　　pH7.4

制法：

　1葡萄糖发酵管按上述成分配好后，按0.5%加入葡萄糖，分装于有一个倒置小管的小试管内，121℃高压灭菌15min。

　　2其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶100mL，121℃高压灭菌15min。

另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。

将5mL糖溶液加入于100mL培养基内，以无菌操作分装小试管。

注：

蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。

试验方法：

从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36℃±1℃培养，一般观察2～3d。

迟缓反应需观察14～30d。

02ONPG培养基

成分：

　　邻硝基酚β－D-半乳糖昔（ONPG）　　　　　　　60mg

　　（O－Nitrophenyl－β－D－galactopyranoside）

　　0.01mol/L磷酸钠缓冲液（pH7.5）　　　　　　　10mL

　　1%蛋白胨水（PH7.5）　　　　　　　　　　　　　30mL

制法：

将ONPG溶于缓冲液内，加入蛋白胨水，以过滤法除菌，分装于10mm×75mm试管，每管0.5mL，用橡皮塞塞紧。

试验方法：

自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种，于36±1℃培养1～3h和24h观察结果。

如果β－半乳糖苷酶产生，则于1～3h变黄色，如无此酶则24h不变色。

03西蒙氏柠檬酸盐培养基

成分：

　　氯化钠　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　5g　

　　硫酸镁（MgSO4·7H2O）　　　　　　　　　　　　　　　　　0.2g

　　磷酸二氢铵　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　1g

　　磷酸氢二钾　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　1g

　　柠檬酸钠　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　5g

　　琼脂　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　20g

　　蒸馏水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　1000mL

　　0.2%溴麝香草酚蓝溶液　　　　　　　　　　　　　　　　　40mL

　　pH6.8

制法：

先将盐类溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化。

然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121℃高压灭菌15min。

放成斜面。

试验方法：

挑取少量琼脂培养物接种，于36±1℃培养4d，每天观察结果。

阳性者斜面上有菌落生长，培养基从绿色转为蓝色。

04缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR和VP试验用）

成分：

　　磷酸氢二钾　　5g

　　多胨　　　　　7g

　　葡萄糖　　　　　5g

　　蒸馏水　　　　　1000mL

　　pH7.0

制法：

溶化后校正pH，分装试管，每管1mL，121℃高压灭菌15min。

甲基红（MR）试验：

自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，于36±1℃培养2～5d，哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。

滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。

鲜红色为阳性，黄色为阴性。

甲基红试剂配法：

10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中，然后加入20mL蒸馏水。

V－P试验：

用琼脂培养物接种本培养基中，于36±1℃培养2～4d。

哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。

加入6%α－萘酚－乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL，充分振摇试管，观察结果。

阳性反应立刻或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在36±1℃下培养4h再进行观察。

　05克氏柠檬酸盐培养基

成分：

　　柠檬酸钠　　　　　　　　　　　3g

　　葡萄糖　　　　　　　　　　　　0.2g

　　酵母浸膏　　　　　　　　　　　0.5g

　　单盐酸半胱氨酸　　　　　　　　0.1g

　　磷酸二氢钾　　　　　　　　　　1g

　　氯化钠　　　　　　　　　　　　5g

　　0.2%酚红溶液　　　　　　　　　6mL

　　琼脂　　　　　　　　　　　　　15g

　　蒸馏水　　　　　　　　　　　　1000mL

制法：

加热溶解，分装试管，121℃高压灭菌15min。

放成斜面。

试验方法：

用琼脂培养物接种整个斜面，在36±1℃培养7d，每天观察结果。

阳性者培养基变为红色。

06丙二酸钠培养基

成分：

　　酵母浸膏　　　　　　　　　1g

　　硫酸铵　　　　　　　　　　2g

　　磷酸氢二钾　　　　　　　　0.6g

　　磷酸二氢钾　　　　　　　　0.4g

　　氯化钠　　　　　　　　　　2g

　　丙二酸钠　　　　　　　　　3g

　　0.2%溴麝香草酚蓝溶液　　　12mL

　　蒸馏水　　　　　　　　　　1000mL

　　pH6.8

制法：

先将酵母浸膏和盐类溶解于水，校正pH后再加入指示剂，分装试管，121℃高压灭菌15min。

试验方法：

用新鲜的琼脂培养物接种，于36±1℃培养48h，观察结果。

阳性者由绿色变为蓝色。

07葡葡糖铵培养基

成分：

　　氯化钠　　　　　　　　　　　　　　5g

　　硫酸镁（MgSO4·7H2O）　　　　　　　0.2g

　　磷酸二氢铵　　　　　　　　　　　　1g

　　磷酸氢二钾　　　　　　　　　　　　1g

　　葡萄糖　　　　　　　　　　　　　　2g

　　琼脂　　　　　　　　　　　　　　　20g

　　蒸馏水　　　　　　　　　　　　　　1000mL

　　0.2%溴麝香草酚蓝溶液　　　　　　　40mL

　　pH6.8

制法：

先将盐类和糖溶解于水内，校正pH，再加琼脂，加热溶化，然后加入指示剂，混合均匀后分装试管，121℃高压灭菌15min，放成斜面。

试验方法：

用接种针轻轻触及培养物的表面，在盐水管内做成极稀的悬液，肉眼观察不见混浊，以每一接种环内含菌数在20～100之间为宜。

将接种环灭菌后挑取菌液接种，同时再以同法接种普通斜面一支作为对照。

于36±1℃培养24h。

阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长；阴性者不生长，但在对照培养基上生长良好。

如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果。

注：

容器使用前应用清洁液浸泡。

再用清水、蒸馏水冲洗干净，并用新棉花做成棉塞，干热灭菌后使用。

如果操作时不注意，有杂质污染时，易造成假阳性的结果。

　　08Hugh－Leifson培养基（O/F试验用）

成分：

　　蛋白胨　　　　　　　　　　　　　　2g

　　氯化钠　　　　　　　　　　　　　　5g

　　磷酸氢二钾　　　　　　　　　　　　0.3g

　　琼脂　　　　　　　　　　　　　　　4g

　　葡萄糖　　　　　　　　　　　　　　10g

　　0.2%溴麝香草酚蓝溶液　　　　　　　12mL

　　蒸馏水　　　　　　　　　　　　　　1000mL

　　pH7.2

制法：

将蛋白胨和盐类加水溶解后，校正pH至7.2。

加入葡萄糖、琼脂煮沸，溶化琼脂，然后加入指示剂。

混匀后，分装试管，121℃高压灭菌15min，直立凝固备用。

试验方法：

从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种，同时接种两支培养基，其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面，高度约1cm，于36±1℃培养。

09马尿酸钠培养基

成分：

　　马尿酸钠　　1g

　　肉浸液　　　100mL

制法：

将马尿酸钠溶解于肉浸液内，分装于小试管内，并于管壁画一横线。

以标志管内液面高度，高压灭菌121℃20min。

试剂：

三氯化铁（FeCl3·6H2O）12g，溶于2%盐酸溶液100mL中即成。

试验方法：

用纯培养物接种，于42℃培养48h，观察培养液是否到达试管壁上记号处，如不足时，用蒸馏水补足至原量。

经离心沉淀，吸取上清液0.8mL，加入三氯化铁试剂0.2mL，立即混合均匀，经10～15min，观察结果。

结果：

出现恒久之沉淀物为阳性。

10营养明胶

成分：

　　蛋白胨　　　　　5g

　　牛肉膏　　　　　3g

　　明胶　　　　　　120g

　　蒸馏水　　　　　1000mL

　　pH6.8～7.0

制法：

加热溶解、校正至pH7.4～7.6，分装小管，121℃高压灭菌10min，取出后迅速冷却，使其凝固。

复查最终pH应为6.8～7.0。

试验方法：

用琼脂培养物穿刺接种，放在22～25℃培养，每天观察结果，记录液化时间。

或放在36士1℃培养，每天取出，放冰箱内30min后再观察结果。

11苯丙氨酸培养基

成分：

　　酵母浸膏　　　　　　　　　　　　　　　3g

　　DI－苯丙氨酸（或L－苯丙氨酸1g）　　　　2g

　　磷酸氢二钠　　　　　　　　　　　　　　1g

　　氯化钠　　　　　　　　　　　　　　　　5g

　　琼脂　　　　　　　　　　　　　　　　　12g

　　蒸馏水　　　　　　　　　　　　　　　　1000mL

制法：

加热溶解后分装试管，121℃高压灭菌15min，使成斜面。

试验方法：

自琼脂斜面上挑取大量培养物，移种于苯丙氨酸琼脂，在36±1℃培养4h或18～24h。

滴加10%三氯化铁溶液2～3滴，自斜面培养物上流下，苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。

12氨基酸脱羧酶试验培养基

成分：

　　蛋白胨　　　　　　　　　　5g

　　酵母浸膏　　　　　　　　　3g

　　葡萄糖　　　　　　　　　　1g

　　蒸馏水　　　　　　　　　　1000mL

　　1.6%滇甲酚紫－乙醇溶液　　1mL

　　L－氨基酸或DL－氨基酸　　0.5或1g/100mL

　　pH6.8

制法：

除氨基酸以外的成分加热溶解后，分装每瓶100mL，分别加入各种氨基酸：

赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸。

L－氨基酸按0.5%加入，DL－氨基酸按1%加入。

再行校正pH至6.8。

对照培养基不加氨基酸。

分装于灭菌的小试管内，每管0.5mL，上面滴加一层液体石蜡，115℃高压灭菌10min。

试验方法：

从琼脂斜面上挑取培养物接种，于36±1℃培养18～24h，观察结果。

氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基应呈紫色。

阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色。

对照管应为黄色。

13蛋白胨水（靛基质试验用）

成分：

　　蛋白胨（或胰蛋白胨）　20g

　　氯化钠　　　　　　　5g

　　蒸馏水　　　　　　　1000mL

　　pH7.4

制法：

按上述成分配制，分装小试管，121℃高压灭菌15min。

靛基质试剂

柯凡克试剂：

将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中。

然后缓慢加入浓盐酸25mL。

欧－波试剂：

将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内。

然后缓慢加入浓盐酸20mL。

试验方法：

挑取小量培养物接种，在36±1℃培养1～2d，必要时可培养4～5d。

加入柯凡克试剂约0.5mL，轻摇试管，阳性者于试剂层呈深红色；或加入欧－波试剂约0.5mL，沿管壁流下，覆盖于培养液表面，阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。

注：

蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。

每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。

14硫酸亚铁琼脂（硫化氢试验用）

成分：

　　牛肉膏　　　　　　3g

　　酵母浸膏　　　　　3g

　　蛋白胨　　　　　　10g

　　硫酸亚铁　　　　　0.2g

　　硫代硫酸钠　　　　0.3g

　　氯化钠　　　　　　5g

　　琼脂　　　　　　　12g

　　蒸馏水　　　　　　1000mL

　　pH7.4

制法：

加热溶解，校正pH，分装试管，115℃高压灭菌15min，取出直立候其凝固。

试验方法：

挑取琼脂培养物，沿管壁穿刺，于36±1℃培养1～2d，观察结果。

产硫化氢者使培养基变为黑色。

注：

肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生，应采用三糖铁琼脂或本培养基。

15尿素琼脂

成分：

　　蛋白胨　　　　　　1g

　　氯化钠　　　　　　5g

　　葡萄糖　　　　　　1g

　　磷酸二氢钾　　　　2g

　　0.4%酚红溶液　　　3mL

　　琼脂　　　　　　　20g

　　蒸馏水　　　　　　1000mL

　　20%尿素溶液　　　100mL

　　pH7.2±0.1

制法：

将除尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH，加入琼脂，加热溶化并分装烧瓶。

121℃高压灭菌15min。

冷至50～55℃，加入经除菌过滤的尿素溶液。

尿素的最终浓度为2%，最终pH应为7.2±0.1。

分装于灭菌试管内，放成斜面备用。

试验方法：

挑取琼脂培养物接种，在36±1℃培养24h，观察结果。

尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。

16氰化钾（KCN）培养基

成分：

　　蛋白胨　　　　　10g

　　氯化钠　　　　　5g

　　磷酸二氢钾　　　0.225g

　　磷酸氢二钠　　　5.64g

　　蒸馏水　　　　　1000mL

　　0.5%氰化钾溶液　20mL

　　pH7.6

制法：

将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。

放在冰箱内使其充分冷却。

每100mL培养基加入0.5%氰化钾溶液2.0mL（最后浓度为1∶10000），分装于12mm×100mm灭菌试管，每管约4mL，立刻用灭菌橡皮塞塞紧，放在4℃冰箱内，至少可保存两个月。

同时，将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。

17氧化酶试验

试剂：

　　　1%盐酸二甲基对苯二胺溶液：

少量新鲜配制，干冰箱内避光保存。

　　　1%α-萘酚－乙醇溶液。

试验方法：

取白色洁净滤纸沾取菌落。

加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴，阳性者呈现粉红色，并逐渐加深；再加α-萘酚溶液一滴，阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色。

阴性于两分钟内不变色。

以毛细吸管吸取试剂，直接滴加于菌落上，其显色反应与以上相同。

18硝酸盐培养基

成分：

　　硝酸钾　　　　　　　　0.2g

　　蛋白　　　　　　　　　5g

　　蒸馏水　　　　　　　　1000mL

　　pH7.4

制法：

溶解，校正pH，分装试管，每管约5mL，121℃高压灭菌15min。

硝酸盐还原试剂：

　　甲液：

将对氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。

　　乙液：

将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中。

试验方法：

接种后在36±1℃培养1～4d，加入甲液和乙液各一滴，观察结果。

硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色。

注：

本试验阴性的原因有三：

细菌不能还原硝酸盐；亚硝酸盐继续分解，生成氨和氮；培养基不适于细菌的生长。

如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解，可再加入锌粉少许，可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色。

19细胞色素氧化酶试验

试剂：

　　1%盐酸二甲基对苯二胺溶液。

　　1%α-萘酚－乙醇溶液。

试验方法：

取37℃（或低于37℃）培养20h的斜面培养物一支，将两种试剂各2～3滴，从斜面上端滴下，并将斜面略加倾斜，使试剂混合液流经斜面上的培养物。

如系平板培养物，则可用试剂混合液滴在菌落上。

结果：

于2min内呈现蓝色者为阳性。

阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应，2min以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果。

20过氧化氢酶试验

试剂：

3%过氧化氢溶液：

临用时配制。

试验方法：

挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加3%过氧化氢溶液2mL，观察结果。

结果：

于半分钟内发生气泡者为阳性，不发生气泡者为阴性。

21过氧化物酶试验

试剂：

2%儿茶酚溶液。

　　3%过氧化氢溶液。

试验方法：

挑取固体培养基上菌落一接种环，置于洁净试管内，滴加2%儿茶酚溶液1mL及3%过氧化氢溶液1mL。

静置于室温（20℃）中30～60min，观察结果。

结果：

阳性反应，细菌变为黑褐色；阴性反应，细菌不变色。

注：

过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制。

22磷酸盐缓冲液

储存液

　　磷酸二氢钾　　　　　　　　34g

　　1mol/L氢氧化钠溶液　　　　175mL

　　蒸馏水　　　　　　　　　　825mL

　　pH7.2　　

制法：

先将磷酸盐溶解于500mL蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH后，再用蒸馏水稀释至1000mL。

稀释液：

取储存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL。

分装每瓶100mL或每管10mL，121℃高压灭菌15min。

23明胶磷酸盐缓冲液

成分：

　　明胶　　　　　　　　　2g

　　磷酸氢二钠　　　　　　4g

　　蒸馏水　　　　　　　　1000mL

　　pH6.2

制法：

加热溶解，校正pH，121℃高压灭菌15min。

24乳酸－苯酚溶液

成分：

　　苯酚　　　　　　　　　10g

　　乳酸（比重1.21）　　　　10g

　　甘油　　　　　　　　　20g

　　蒸馏水　　　　　　　　10mL

制法：

将苯酚在水中加热溶解，然后加入乳酸及甘油。

用途：

检验真菌形态时用。

25肉浸液肉汤

成分：

　　绞碎牛肉　　　　　　　500g

　　氯化钠　　　　　　　　5g

　　蛋白胨　　　　　　　　10g

　　磷酸氢二钾　　　　　　2g

　　蒸馏水　　　　　　　　1000mL

制法：

将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL，混合后放冰箱过夜，除去液面之浮油，隔水煮沸半小时，使肉渣完全凝结成块，用绒布过滤，并挤压收集全部滤液，加水补足原量。

加入蛋白胨、氯化钠和磷酸盐，溶解后校正pH7.4～7.6煮沸并过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌30min。

26肉浸液琼脂

成分：

　　肉浸液肉汤（PH7.4）　　1000mL

　　琼脂　　　　　　　　　17～20g

制法：

加热溶化琼脂，分装烧瓶或试管，121℃高压灭菌30min。

根据需要，倾注平板或放成斜面。

27牛肉（或牛心）消化汤

成分：

　　绞碎牛肉（或牛心）　　　1000g

　　15%氢氧化钠溶液　　　27mL

　　胰蛋白酶　　　　　　　40mL

　　三氯甲烷　　　　　　　1mL

　　氯化钠　　　　　　　　10g

　　蒸馏水　　　　　　　　2000mL

制法：

　　1　称取碎牛肉，加蒸馏水，隔水加热到80℃，维持15min。

　　2　加氢氧化钠溶液，对pH试纸呈弱碱性，冷至40℃。

　　3　加胰蛋白酶、氯仿，在36±1℃放置4～5h，每小时摇动一二次。

　　4　4h后，吸取上层液5mL于试管中，加5%硫酸铜溶液0.1mL、4%氢氧化钠溶液5mL，混合之。

若呈红色，则不须再消化，可由温箱取出。

　　5　加入15%乙酸溶液45mL，对pH试纸呈酸性。

　　6　煮沸15min，使胰蛋白酶破坏，冷后，放冰箱内一夜。

　　7　次日吸取上层清液，加氯化钠10g，并加水补足原量，煮沸。

　　8　校正pH7.4～7.6（加15%氢氧化钠溶液约10mL），加热，用滤纸过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌20min。

注：

①此培养基可作为琼脂培养基的基础，不需加蛋白胨。

　　②胰蛋白酶之配制：

称取去脂绞碎的猪胰500g，加入乙醇500mL、蒸馏水1500mL，混合之，装人玻塞瓶内。

每日摇匀三次。

3d后，用绒布过滤挤出其汁，加盐酸至0.05%，放冰箱内保存备用。

28血消化汤

成分：

　　绞碎猪胃　　　　　100g

　　绞碎猪血块　　　　100g

　　蒸馏水　　　　　　1000mL

　　浓盐酸　　　　　　10mL

制法：

　　1　洗涤猪胃，除去油脂，保留胃粘膜，用绞肉机绞碎。

　　2　用绞肉机将猪血块绞碎。

　　3　将蒸馏水加热至55℃，加入猪胃、猪血块和盐酸，置55℃水浴中24h，时常加以摇动。

　　4　从水浴内取出，加入1moL/L碳酸钠溶液5mL，煮沸10min，置于冰箱内一夜。

　　5　吸取上层清液，加磷酸氢二钾1g，加热至75℃，加入1mol/L碳酸钠溶液45mL，煮沸，校正pH7.2～7.4。

　　6　用滤纸过滤，分装烧瓶，121℃高压灭菌20min。

29豆粉琼脂

成分：

　　牛心消化汤（PH7.4～7.6）