常用培养基配方.docx
《常用培养基配方.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《常用培养基配方.docx（14页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。
常用培养基配方
修改记录单
版本
时间
简述
A
2003-11-15
新发行
A
2004-06-02
品控部改为品质部
染色法、培养基和（微生物检验）试剂配制作业指导书
1目的
对染色法、培养基和试剂配制方法作出明确规定，为检测结果的准确性提供最基本的保证。
2范围
适用于微生物检验。
3职责
3.1微检人员负责培养基、试剂配制。
3.2微检人员掌握微生物的染色方法。
4培养基和试剂配制名称、用途
名称
用途
4.1革兰氏染色液
微生物染色
4.2营养琼脂
细菌培养和细菌总数测定
4.3孟加拉红培养基
霉菌、酵母菌计数
4.4乳糖胆盐发酵管
大肠菌群，粪大肠菌群及大肠杆菌的测定
4.5乳糖发酵管
供大肠菌群证实试验用
4.6三糖铁琼脂
肠杆菌科细菌的生化反应筛选
4.7伊红美兰琼脂
分离肠道致病菌。
4.8缓冲蛋白胨水
沙门氏菌检验中的前增菌
4.9四硫酸钠煌（TTB）绿增菌液
沙门氏菌检验中的前增菌
4.10GN增菌液
志贺氏菌的前增菌
4.11亚硒酸盐胱氨酸增菌液
沙门氏菌选择性增菌培养
4.12SS琼脂
沙门氏菌、志贺氏菌的分离
4.13V-P半固体琼脂
细菌检验的V-P试验
4.147.5%氯化钠肉汤
金黄色葡萄球菌的增菌培养
4.15Baird-Parker培养基
金黄色葡萄球菌的检验
4.16酸性肉汤
酸性罐头食品商业无菌检验
4.17尿素琼脂基础
细菌检验中的尿素酶试验
4.18赖氨酸脱羧酶培养基
细菌检验中的赖氨酸脱羧酶试验
4.19吲哚培养基
细菌靛基质试验，亦称色氨酸肉汤
4.20硝酸盐氰化钾培养基
细菌检验中的硝酸盐还原试验和氰化钾试验
4.21生理盐水
检样的溶解与稀释
5具体内容
5.1革兰氏染色法
5.1.1革兰氏染色液
5.1.1.1结晶紫染色液
成份：
结晶紫1.0g
95%乙醇20.0ml
1%草酸铵水溶液80.0ml
5.1.1.2革兰氏碘液
成份：
碘1.0g
碘化钾2.0g
蒸馏水300.0ml
5.1.1.395%乙醇
5.1.1.4沙黄复染液
成份：
沙黄0.25g
95%乙醇10.0ml
蒸馏水90.0ml
5.1.2染色法
5.1.2.1将涂片在火焰上固定。
5.1.2.2初染：
滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。
5.1.2.3媒染：
滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。
5.1.2.4脱色：
滴加95%乙醇脱色，水洗；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再用乙醇滴满整个涂片，脱色10s，水洗。
5.1.2.5复染：
滴加沙黄复染液，染1min，水洗，待干，镜检。
5.1.2.6结果判定：
革兰氏阳性菌呈紫色；革兰氏阴性菌呈红色。
5.2一般培养基和专用培养基
5.2.1营养琼脂
5.2.1.1用途：
用于一般细菌培养及细菌总数测定。
5.2.2.2成份（g/L）：
蛋白胨10.0
牛肉粉3.0
氯化钠5.0
琼脂15.0
PH7.3±0.1
5.2.2.3制法:
称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121℃15min高压灭菌备用。
5.2.2.4注意事项：
密封保存于阴凉干燥处。
5.2.2孟加拉红培养基
5.2.2.1用途：
用于粮食、食品、饮料中霉菌、酵母菌计数。
5.2.2.2成份（g/L）：
蛋白胨5.0
葡萄糖10.0
磷酸二氢钾1.0
硫酸镁0.5
孟加拉红0.03
氯霉菌0.1
琼脂15.0
5.2.2.3制法:
称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121℃20min高压灭菌备用。
5.2.2.4注意事项：
保存于阴凉干燥处；密封、避光。
5.2.3乳糖胆盐发酵管
5.2.3.1用途：
用于大肠菌群，粪大肠菌群及大肠杆菌的测定。
5.2.3.2成份（g/L）：
蛋白胨20.0
胆盐3.0
乳糖5.0
溴甲酚紫0.01
PH7.4±0.1
5.2.3.3制法:
称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，115℃15min高压灭菌，双料乳糖胆盐发酵管除纯水外，其它成份加倍。
5.2.3.4注意事项：
密封保存于阴凉干燥处。
5.2.4乳糖复发酵管
5.2.4.1用途：
供大肠菌群证实试验用。
5.2.4.2成份（g/L）：
蛋白胨20.0
乳糖10.0
溴甲酚紫0.01
PH7.4±0.1
5.2.4.3制法:
称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装10ml于有倒立发酵管的试管中，115℃15min高压灭菌备用。
5.2.4.4注意事项：
密封保存于阴凉干燥处。
5.2.5三糖铁琼脂
5.2.5.1用途：
主要用于肠杆菌科细菌的生化反应筛选。
5.2.5.2成份（g/L）：
蛋白胨20.0酚红0.025
牛肉膏3.0氯化钠5.0
乳糖10.0硫酸亚铁铵（6H2O）0.5
蔗糖10.0硫代硫酸钠0.5
琼脂12.0葡萄糖1.0
PH7.4±0.1
5.2.5.3制法:
称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至溶解，分装试管，115℃15min高压灭菌制成高层斜面备用。
5.2.5.4注意事项：
保存于阴凉干燥处，密封、避光。
5.2.6伊红美兰琼脂
5.2.6.1用途：
弱选择性培养基，用于分离肠道致病菌。
5.2.6.2成份（g/L）：
蛋白胨10.0
乳糖10.0
磷酸氢二钾2.0
琼脂15.0
伊红0.4
美兰0.065
PH7.1±0.2
5.2.6.3制法:
称取各成份溶于纯水中，加热溶解，121℃15min高压灭菌，冷至55℃倾注平板备用。
5.2.6.4注意事项：
保存于阴凉干燥处，密封、避光。
5.2.7缓冲蛋白胨水
5.2.7.1用途：
用于沙门氏菌检验中的前增菌。
5.2.7.2成份（g/L）：
蛋白胨10.0
氯化钠5.0
Na2HPO4（12H2O）9.0
KH2PO41.5
最终PH7.2±0.1
5.2.7.3制法:
称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，每瓶225ml，121℃15min高压灭菌备用。
5.2.7.4注意事项：
密封保存于阴凉干燥处。
5.2.8四硫酸钠煌（TTB）绿增菌液
5.2.8.1用途：
用于沙门氏菌检验中前增菌。
5.2.8.2成份（g/L）：
A基础培养基
多胨或胨5.0g
胆盐1.0g
碳酸钙10.0g
硫代硫酸钠30.0g
蒸馏水1000ml
B碘溶液
碘5.0g
碘化钾6.0g
蒸馏水20ml
5.2.8.3制法：
将基础培养基的各成分加入蒸馏水中，加热溶解，分装每瓶100ml。
分装时应随时震荡，使其中的碳酸钙混匀。
121℃高压灭菌15min备用，临用时每100ml基础培养基中加入碘溶液2ml、0.1%煌绿溶液1ml。
5.2.8.4注意事项：
密封保存于阴凉干燥处。
5.2.9GN增菌液
5.2.9.1用途：
用于志贺氏菌的前增菌液
5.2.9.2成份（g/L）：
胰蛋白胨20.0g
葡萄糖1.0g
甘露醇2.0g
柠檬酸钠5.0g
去氧胆酸钠0.5g
磷酸氢二钾4.0g
磷酸二氢钾1.5g
氯化钠5.0g
蒸馏水1000ml
5.2.9.3制法:
按上述成分配好，加热使溶解，校正pH。
分装每瓶225ml，115℃高压灭菌15min。
5.2.9.4注意事项：
密封保存于阴凉干燥处。
5.2.10亚硒酸盐胱氨酸增菌液
5.2.10.1用途：
用于沙门氏菌选择性增菌培养。
5.2.10.2成份（g/L）：
蛋白胨5.0
乳糖4.0
磷酸氢二钠10.0
亚硒酸氢钠4.0
L-胱氨酸0.1
PH7.0±0.1
5.2.10.3制法:
称取各成份溶于灭菌纯水中，在无菌容器中溶解，分装，每瓶100ml，备用。
5.2.10.4注意事项：
于4℃冰箱中密封保存。
5.2.11SS琼脂
5.2.11.1用途：
用于沙门氏菌、志贺氏菌的分离。
5.2.11.2成份（g/L）：
蛋白胨5.0牛肉粉5.0
乳糖10.0三号胆盐3.5
柠檬酸铁10.0柠檬酸钠8.5
中性红0.025硫代硫酸钠8.5
琼脂15.0煌绿0.00033
PH7.0±0.1
5.2.11.3制法:
称取各成份溶于纯水中，加热煮沸溶解，冷至55℃，倾注平板备用。
5.2.11.4注意事项：
A保存于阴凉干燥处，密封、避光。
B勿高压灭菌。
5.2.12V-P半固体琼脂
5.2.12.1用途：
用于细菌检验的V-P试验。
5.2.12.2成份（g/L）：
蛋白胨12.0
酵母膏1.0
葡萄糖10.0
氯化钠5.0
琼脂3.0
PH7.3±0.1
5.2.12.3制法:
称取各成份于纯水中，加热煮沸至溶解，分装试管，每管1～1.5ml，121℃10min高压灭菌，立即取出冷却备用。
5.2.12.4配制试剂：
甲液：
α-萘酚6.0g
无水乙醇溶液100.0ml
乙液：
氢氧化钾40.0g
肌酸0.3g
蒸馏水100.0ml
先将氢氧化钾溶于水中，再加入肌酸。
甲液和乙液保存于4℃冰箱内，可使用2个月。
5.2.12.5试验方法：
挑取琼脂培养物接种V-P培养基中，于36±1℃培养24h±2h，将甲液0.2ml（约6滴）加入试管中，摇混均匀，再加入乙酸0.1ml（约3滴），再摇混均匀。
阳性反应立即或15min内呈现红色，阴性反应为铜色。
阴性结果在1h后再做一次检查。
有些试管在数小时后红色会逐渐消失，此仍作阳性反应。
5.2.12.6注意事项：
保存于阴凉干燥处，密封、避光。
5.2.137.5%氯化钠肉汤
5.2.13.1用途：
用于金黄色葡萄球菌的增菌培养。
5.2.13.2成份（g/L）：
蛋白胨10.0
牛肉粉3.0
氯化钠75.0
PH7.4±0.1
5.2.13.3制法:
称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，每瓶50ml，121℃15min高压灭菌备用。
5.2.13.4注意事项：
密封保存于阴凉干燥处。
5.2.14Baird-Parker培养基
5.2.14.1用途：
用于食品中金黄色葡萄球菌的检验。
5.2.14.2成份（g/L）：
胰蛋白胨10.0丙酮酸钠10.0
牛肉膏5.0甘氨酸12.0
酵母膏1.0氯化锂（6H2O）5.0
琼脂20.0PH7.4±0.1
5.2.14.3用法:
称取各成份于纯水中，加热煮沸至溶解，分装每瓶95ml，121℃15min高压灭菌，冷至50℃时，每95ml加入5ml亚碲酸钾卵黄增菌液。
5.2.14.4注意事项：
A保存于阴凉干燥处，密封、避光。
B平板冰箱贮存不超过48小时。
5.2.15酸性肉汤
5.2.15.1用途：
用于酸性罐头食品商业无菌检验。
5.2.15.2成份（g/L）：
多价蛋白胨5.0
酵母粉5.0
葡萄糖5.0
磷酸氢二钾4.0
PH5.0±0.2
5.2.15.3制法:
称取各成份溶于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121℃20min高压灭菌备用。
5.2.15.4注意事项：
保存于阴凉干燥处；密封、避光。
5.3生化试验培养基和试剂
5.3.1尿素琼脂基础
5.3.1.1用途：
用于细菌检验中的尿素酶试验。
5.3.1.2成份（g/L）：
蛋白胨1.0
葡萄糖1.0
氯化钠5.0
磷酸二氢钾2.0
酚红0.012
琼脂15.0
PH6.8±0.1
5.3.1.3制法:
称取各成份于纯水中，加热煮沸至完全溶解，121℃15min高压灭菌，冷至55℃以无菌技术每95ml溶液加入40%尿素水溶液5ml，混匀后制成斜面备用。
5.3.1.4试验方法：
挑取琼脂培养物接种，在36±1℃培养24h，观察结果。
尿素酶阳性者出于产碱而使培养基变为红色。
5.3.1.5注意事项：
保存于阴凉干燥处；密封、避光。
5.3.2赖氨酸脱羧酶培养基
5.3.2.1用途：
用于细菌检验中的赖氨酸脱羧酶试验。
5.3.2.2成份（g/L）：
酵母膏3.0
葡萄糖1.0
L-赖氨酸5.0
溴甲酚紫0.016
PH6.7±0.1
5.3.2.3制法:
称取各成份于纯水中，加热煮沸至完全溶解，分装试管，每管1-1.5ml，121℃15min高压灭菌备用。
5.3.2.4试验方法：
从琼脂斜面上挑取琼脂培养物接种，在36±1℃培养18-24h，观察结果。
赖氨酸脱羧酶阳性者出于产碱而使培养基变为紫色。
阴性者无碱性产物，但因葡萄糖产酸而使培养基变黄色。
对照管应为黄色。
5.3.2.5注意事项：
保存于阴凉干燥处；密封、避光。
5.3.3吲哚培养基
5.3.3.1用途：
用于细菌靛基质试验，亦称色氨酸肉汤。
5.3.3.2成份（g/L）：
蛋白胨10.0
氯化钠5.0
DL-色氨酸1.0
PH7.4±0.1
5.3.3.3用法:
称取各成份于纯水中，加热煮沸至完全溶解，121℃15min高压灭菌备用。
5.3.3.4配制柯凡克试剂：
对二甲氨基苯甲醛10.0g
戊醇150.0ml
浓盐酸50.0ml
将色泽鲜明干燥的对二甲氨基苯甲醛溶于戊醇中，缓慢搅拌加入盐酸，加热至60℃，呈深黄色，静置6-7h，变成黄色即可使用。
试剂宜少量配制，不用时保存于4℃冰箱内。
久存后试液变成褐色不可使用。
5.3.3.5试验方法：
挑取琼脂培养物接种，在36±1℃培养24h，滴加柯凡克试剂0.1ml。
阳性反应出现红色环；阴性反应为黄色环。
5.3.3.6注意事项：
保存于阴凉干燥处；密封、避光。
5.3.4硝酸盐氰化钾培养基
5.3.4.1用途：
用于细菌检验中的硝酸盐还原试验和氰化钾试验。
5.3.4.2成份（g/L）：
蛋白胨10.0
氯化钠5.0
磷酸二氢钾0.225
磷酸氢二钠5.64
硝酸钾（无亚硝酸盐）1.0
5g/L氰化钾溶液10.0
PH6.8±0.1
5.3.4.3用法:
称取各成份于纯水中，加热煮沸至完全溶解，121℃15min高压灭菌，每100ml无菌加入0.5%氰化钾溶液1ml，分装无菌试管备用；同时将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。
5.3.4.4试验方法：
挑取琼脂培养物接种，先接种于吲哚培养基中，混匀，然后灼烧接种环，再沾取吲哚培养基少许接种于氰化钾培养基中，于36±1℃培养24h，观察培养液有无混浊，培养液出现混浊，即有细菌生长，为阳性反应（不抑制）；经2天培养，细菌不生长为阴性反应（抑制）。
5.3.4.5注意事项：
保存于阴凉干燥处；密封、避光。
5.3.5生理盐水
5.3.5.1用途：
用于检样的溶解与稀释。
5.3.5.2成份：
（g/L）：
氯化钠8.5g
纯水1000.0ml
5.3.5.3制法：
称取氯化钠于纯水中，至完全溶解，分装，121℃高压灭菌15min。
升级会员 