心脑康胶囊质量标准的研究Word下载.docx
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XinnaokangCapsules;
TLC;
HPLC
心脑康胶囊为部颁中药第12册收载品种,全方由丹参、枸杞子、甘草、川芎、牛膝等16味药组成,具有活血化淤、通窍止痛、扩张血管、增加冠状动脉血流量之功效。
用于冠心病、心绞痛及脑动脉硬化症。
为了有效控制产品内在质量,采用HPLC法对其主要药味赤芍中的有效成分芍药苷进行含量测定,并建立了丹参、枸杞子、甘草、川芎等的薄层色谱鉴别。
1仪器与试药
点样毛细管;
硅胶G薄层板、硅胶GF254薄层板;
高效液相色谱仪:
LC10ATvp泵(日本岛津)、SPD10Avp紫外检测器(日本岛津)、CTO10Asvp柱温箱(日本岛津);
ShimadzuLibrorAEL40SM天平。
乙腈;
水;
磷酸;
芍药苷对照品;
样品三批;
原儿茶醛对照品;
甘草次酸对照品;
齐墩果酸对照品;
川芎对照药材;
牛膝对照药材。
其余试剂均为分析纯。
2方法
薄层鉴别实验
丹参的TLC鉴别研究供试品溶液的制备:
取本品内容物2g,加1%盐酸25ml,搅拌使溶解,离心,分取上清液,加乙醚提取2次,25ml/次,合并乙醚液,挥干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
对照品溶液的制备:
取原儿茶醛对照品,加乙醇制成每毫升含1mg的溶液,作为对照品溶液。
阴性溶液的制备:
取除丹参以外的其他药材,按制备工艺制成丹参阴性样品。
取丹参阴性样品2g,按供试品溶液制备方法制成丹参阴性溶液。
丹参的TLC鉴别:
吸取上述3种溶液各10μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以苯醋酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%三氯化铁乙醇溶液。
供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
斑点清晰,阴性对照无干扰。
结果见图1。
原儿茶醛对照品2,3,4.样品5.缺丹参样品
图1丹参TLC鉴别图枸杞子对照药材2,3,4.样品5.缺枸杞子样品
图2枸杞子TLC鉴别图
枸杞子的TLC鉴别研究供试溶液的制备:
取本品内容物2g,加水20ml,搅拌使溶解,离心,分取上清液,用醋酸乙酯提取2次,20ml/次。
合并醋酸乙酯液,挥干,残渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液。
对照药材溶液的制备:
取枸杞子对照药材g,加水30ml,煮沸15min,滤过,滤液用醋酸乙酯提取2次,20ml/次。
合并醋酸乙酯液,挥干,残渣加醋酸乙酯1ml溶解,作为对照药材溶液。
取除枸杞子以外的其他药材,按制备工艺制成枸杞子阴性样品。
取枸杞子阴性样品2g,按供试品溶液制备方法制成枸杞子阴性溶液。
枸杞子的TLC鉴别:
吸取上述3种溶液各10μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以石油醚醋酸乙酯冰醋酸为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯365nm下检视。
供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
供试品色谱与对照药材色谱对应整齐,斑点分离清晰,阴性对照无干扰。
结果见图2。
甘草的TLC鉴别研究供试液的制备:
取本品内容物2g,加氯仿30ml,盐酸3ml,超声处理1h,滤过,滤液用水30ml洗涤,弃去水液,氯仿液加入适量无水硫酸钠脱水,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
取甘草次酸对照品,加乙醇制成每毫升含1mg的溶液,作为对照品溶液。
取除甘草以外的其他药材,按制备工艺制成甘草阴性样品。
取甘草阴性样品2g,按供试品溶液制备方法制成甘草阴性溶液。
甘草的TLC鉴别:
吸取上述3种溶液各10μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以石油醚苯醋酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,于105℃下烘烤10min,置紫外光灯365nm下检视。
斑点分离清晰,阴性对照无干扰。
结果见图3。
川芎的TLC鉴别研究供试液的制备:
取本品内容物1g,加乙醚20ml,超声处理10min,滤过,滤液挥干,残渣加醋酸乙酯1ml使溶解,挥干,残渣加醋酸乙酯1ml使溶解,作为供试品溶液。
对照药材溶液的制备:
另取川芎对照药材1g,同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。
取除川芎以外的其他药材,按制备工艺制成川芎阴性样品。
取川芎阴性样品1g,按供试品溶液制备方法制成川芎阴性溶液。
川芎的TLC鉴别:
吸取上述3种溶液各10μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以正己烷醋酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯365nm下检视。
斑点分离圆正、清晰,阴性对照无干扰。
结果见图4。
甘草次酸对照品2,3,4.样品5.缺甘草样品
图3甘草TLC鉴别图川芎对照药材2,3,4.样品5.缺川芎样品
图4川芎TLC鉴别图
牛膝的TLC鉴别研究供试液的制备:
取本品内容物2g,加乙醇20ml,回流提取40min,滤过,滤液加入盐酸2ml,回流提取1h后浓缩至约5ml,加水10ml,用石油醚提取2次,20ml/次,合并石油醚液,蒸干,残渣加乙醇2ml使溶解,作为供试品溶液。
取牛膝对照药材2g,同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。
再取齐墩果酸对照品,加乙醇制成每毫升含1mg的溶液,作为对照品溶液。
取除牛膝以外的其他药材,按制备工艺制成牛膝阴性样品。
取牛膝阴性样品2g,按供试品溶液制备方法制成牛膝阴性溶液。
牛膝的TLC鉴别:
吸取上述4种溶液各10μl,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以氯仿甲醇为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,置105℃下显色至斑点清晰。
供试品色谱中,在与对照品和对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
供试品色谱与对照品和对照药材色谱对应整齐,斑点分离清晰,阴性对照无干扰。
结果见图5。
齐墩果酸对照品2.牛膝对照药材3,4,5样品6.缺牛膝样品
图5牛膝TLC鉴别图
含量测定
色谱条件色谱柱为DiamonsilC18(5μm,250mm×
mm,迪马);
流动相为乙腈水磷酸;
流速1ml/min;
柱温35℃;
检测波长230nm。
溶液制备对照品溶液制备:
精密称取芍药苷对照品适量,加甲醇制成每毫升含60μg的溶液,即得。
供试品溶液制备:
取装量差异项下本品内容物1g,精密称定,加甲醇25ml,称重,超声处理30min,取出,放冷,用甲醇补足减失重量,滤过,取续滤液以微孔滤膜滤过,即得。
阴性溶液制备:
取除赤芍以外的其他药材,按制备工艺制成缺赤芍样品。
取缺赤芍样品1g,按供试品溶液制备方法制备,即得。
系统适用性实验分别取芍药苷对照品溶液、供试品溶液及缺赤芍的阴性溶液各10μl注入液相色谱仪,记录色谱。
从色谱图可知,在此色谱条件下,芍药苷峰与其他组分峰分离完全,在与芍药苷峰相同的保留时间内,阴性对照无干扰。
供试品溶液制备方法考察提取方法选择:
取本品内容物,精密加甲醇25ml,分别用不同的提取方法提取30min,过滤,滤液经微孔滤膜过滤,作为供试品溶液,测定芍药苷含量,结果回流提取效率和超声提取效率相当,而索氏提取效率较低,由于超声提取操作方法简便,所以选择超声提取为样品提取方法。
结果见表1。
表1提取方法考察结果
提取溶剂选择:
取本品内容物,分别精密加水、甲醇和乙醇25ml,超声提取30min,过滤,滤液经微孔滤膜过滤,作为供试品溶液,测定芍药苷含量,结果溶剂甲醇的提取效率最高,所以我们选择甲醇为样品提取溶剂。
结果见表2。
提取时间考察:
对同一批样品进行不同提取时间考察,结果表明,供试样品中的芍药苷在30~60min内含量变化已不大,说明芍药苷基本提尽,故选30min为提取时间。
结果见表3。
线性关系的考察精密称取芍药苷对照品mg,置50ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,精密吸取2ml,置10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,得80mg/ml的芍药苷对照品溶液,分别精密吸取芍药苷对照品溶液,5,10,15,20μl,注入色谱仪,记录色谱图,测定峰面积积分值,测定结果见表3,并以对照品进样量X为横坐标,峰面积值Y()为纵坐标,绘制标准曲线。
结果表明,芍药苷在5~μg范围内线性关系良好。
结果见表4,图6。
表2提取溶剂考察结果
表3提取时间考察结果
表4芍药苷线性关系考察
回归方程:
Y=747 r=9将直线方程拟合为过原点的方程为:
y=746
图6芍药苷拟合曲线图
取线性关系考察中最低点进样量分别代入上述两个方程,计算得两者相对偏差为%,说明本品可用外标一点法进行含量测定计算结果。
精密度实验精密吸取对照品溶液10μl,重复进样5次,测定芍药苷峰面积积分值,求出相对标准偏差,结果表明精密度良好。
结果见表5。
表5精密度实验结果
稳定性实验取供试品,按上述供试品溶液的制备方法制备供试液。
在室温下每隔一段时间进样10μl,测定芍药苷峰面积值,求相对标准偏差。
结果表明,芍药苷在12h内基本稳定。
结果见表6。
表6稳定性实验结果
重复性实验精密取本品内容物1g,共5份,照前述供试品溶液的制备方法制备成供试品溶液。
精密吸取供试品溶液各10μl,测定芍药苷峰面积积分值,计算含量,求相对标准偏差。
结果表明,重复性良好。
结果见表7。
回收率实验采用加样回收法试验,取已知含量的同一批样品5份,精密称取各约g,精密加入芍药苷对照品适量,按供试品溶液制备方法制备成供试品溶液,精密吸取供试品溶液各10μl,照上述色谱条件测定,计算含量,结果表明,芍药苷的回收率良好。
结果见表8。
表7重复性实验结果
样品测定取3批样品,按上述供试品溶液制备方法,分别制成供试品溶液。
吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,在上述色谱条件下进行测定,计算芍药苷含量。
结果见表9。
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