基因工程考试题库(便携版)Word格式.docx

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指lacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β-半乳糖苷酶（β-galactosidase，由

1024个氨基酸组成）阴性的突变体之间实现互补。

11. cos序列（cohesive endsite）：

λDNA分子两端各有12碱基

（5′-GGGCGGCGACCT-3′）的单链互补粘性末端，当λ噬菌体进入细菌细胞后，其DNA可迅速按碱基互补配对结合形成双链环状

DNA分子。

COS位点：

当λDNA进入细菌细胞后，便迅速粘性末端配对形成双链环状DNA分子，这种粘性末端结合形成的双链区域叫做COS位点.

13.端粒重复序列（telomericrepeat，TEL）：

定位于染色体末端一

段序列，用于保护线状的DNA不被胞内的核酸酶降解，以形成稳

定的结构。

14.自主复制序列：

一段特殊的序列，含有酵母菌中DNA进行双向复制所必须的信号。

22. 多克隆位点：

含有紧密排列的多个限制性内切酶识别位点的一

段DNA片段。

23、分子杂交：

是指在分子克隆中的一类核酸和蛋白质分析方法，用于检测混合样品中特定核酸分子或蛋白质分子是否存在及其分子

量大小。

24、菌落原位杂交：

是将菌落或噬菌斑转到固相膜上，原位裂解细胞后使核酸固定在膜上，然后与探针杂交。

用标记的核酸探针，经

放射自显影或非放射检测体系，在组织细胞间期染色体上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手段。

26、真核细胞原位杂交：

是一项组织化学与分子杂交相结合的技术，

应条件例如高浓度的核酸内切限制酶、高浓度的甘油、低离子强度、使探针与固定在载玻片上的细胞组织切片内的变性染色体杂交。

用Mn2+取代Mg2+以及高pH值等。

）克服星号活性的方法：

维持反

应体系适当的离子强度、较低的温度或酶浓度，尽可能缩短反应时

间或DNA样品的重新处理等。

7.载体（vector）:

在基因操作中携带外源基因进入受体细胞的工具。

克隆载体：

主要用于扩增或保存DNA片段，是最简单的载体。

主要有：

质粒载体、噬菌体载体、黏粒载体、人工染色体（YAC和

BAC）。

YAC（酵母人工染色体）：

是利用酿酒酵母的染色体的复制元件构建的载体，其工作环境也是在酿酒酵母中。

BAC（细菌人工染色体）：

是基于大肠杆菌（E.coli）的F质粒构建的高通量低拷贝的质粒载体。

表达载体是可携带外源基因进入宿主细胞进行复制并进行转录、翻

译的载体。

病毒表达载体：

是以病毒基因组序列为基础，插入必要的表达元件所构建成的真核基因转移工具。

T-载体：

Taq酶的末端转移酶活性可在PCR产物的3’端加上一个不

依赖于模板的A，根据这一特性，为方便进行PCR产物的直接克隆

而开发出T-载体。

Ti质粒（tumorinducingplasmid）：

是在根癌农杆菌中发现的可决定冠瘿病（即可诱发寄主植物产生冠瘿瘤）的质粒。

大小在

200kb左右。

12. 粘粒载体：

由人工构建的、大小一般在 5~7kb左右、含有

λDNA的cos序列和质粒复制子的一类特殊的质粒载体。

17.一元载体：

含目的DNA的中间表达载体与改造后的受体（Ti质粒）通过同源重组所产生的一种复合型载体。

18.双元载体：

是指由两个分别含有T-DNA和vir区的相容性突变Ti

质粒构成的系统。

16. 卸甲载体：

将Ti质粒上的T-DNA的致瘤基因全部去掉，仅保留其两边界及与T-DNA转移所必需的25bp序列而构建成的载体。

8.质粒的相容性：

是指两种质粒是否可以共存于同一个细胞，如果

能够共存则叫相容又叫亲和。

质粒的不相容性：

两个质粒在同一宿主中不能共存的现象，出现这种现象的原因主要是它们常常共用同一复制系统。

9.转移性：

质粒具转移性是指在自然条件下，很多质粒可以通过称

为细菌接合的作用转移到新宿主内。

不含tra基因的质粒则不具备

27、荧光原位杂交（fluorescenceinsituhybridization，FISH）：

对寡核苷酸探针做特殊的修饰和标记，后用原位杂交方法与靶染色体或DNA上特定的序列结合，再通过与荧光素分子相偶联的单克隆

抗体（单个细胞增殖形成的细胞群所产生的抗体）来确定该DNA

序列在染色体上的位置。

28、凝胶阻滞试验：

（gelretardationassay）：

又叫DNA迁移率变动试验（electrophoreticmobilityshiftassay，EMSA），是用于体外研究DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。

26.盒式诱变：

就是用一段人工合成具有突变序列的DNA片段，取代野生型基因中的相应序列。

这就好象用各种不同的盒式磁带插入

收录机中一样，故而称合成的片段为“盒”，这种诱变方式为盒式诱变。

27.定点诱变（寡核苷酸介导；

重叠延伸PCR、大引物PCR）：

（site-directedmutagenesis）是使已克隆基因或DNA片段中任何

一个特定碱基发生取代、插入或缺失突变的过程。

27、体外随机诱变：

指随机的在克隆化DNA中引入碱基置换突变。

28、探针：

指用于检测特定基因或转录产物存在或表达的DNA、RNA

或寡核苷酸序列，这些序列在使用之前需标记。

29、DNaseI足迹试验：

DNaseI足迹试验是一种鉴别RNA聚合酶等蛋白质在DNA上结合位点的方法，它不仅能找到与特异性DNA

结合的目标蛋白，而且能告知目标蛋白结合在哪些碱基部位。

30.衔接物：

是指人工合成的由10~12nt组成的、具有一个或数个限制性内切核酸酸识别位点的平末端的双链寡核苷酸短片段。

此方法

适用于没有衔接物限制性内切核酸酶酶切位点的外源DNA片段。

DNA接头（人工接头）:

是指人工合成的含有限制酶识别顺序的核苷酸片段。

人工合成的一类具有某种限制性内切酶粘性末端，另一

头为平末端的双链寡核苷酸片段。

31.接头分子连接法（DNA接头连接法）：

将具有平末端的外源

DNA片段与人工接头分子在T4DNA连接酶的作用下连接起来；

然

后与具有同样粘性末端的载体DNA分子在T4 DNA连接酶作用下连接成重组体。

32.转化（transformation）：

把重组质粒DNA导入受体细胞（大

肠杆菌、酵母、动植物细胞等）,使其遗传性状改变的过程。

转染（transfection）:

把重组的噬菌体或病毒导入受体细胞的过程。

相互关系：

转化一词严格地说是指，感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达质粒载体DNA分子的生命过程；

而转染一词，则是专指感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达噬菌体DNA分子的生命过程。

但从本质

上讲，两者并没有什么根本的差别。

无论转化还是转染，其关键的因素都是用氯化钙处理大肠杆菌细胞，以提高膜的通透性，从而使外源DNA分子能够容易地进入细胞内部。

33.转化子（transformant）：

经转化获得外源遗传物质/DNA的细

胞，是向有功能缺陷的细胞补充相应功能。

34、感受态（competence）：

作为受体细胞的细菌经一定处理 （如冰冷的CaCl2溶液）后处于易于接受外源DNA的状态。

35.“选择（selection）”，是指通过某种外来附加压力（或因素）的

辨别作用，呈现具有重组DNA分子的特定克隆类型的一种方法。

“筛选（screening）”则是指通过某种特定的方法，从被分析的细胞群体或基因文库中，鉴定出真正具有所需要重组DNA分子的特定克

隆的过程。

36.启动子：

是RNA聚合酶识别和结合的一段DNA序列，位于基因的上游。

是基因表达调控的重要顺式元件，具有以下特征：

①序

列特异性；

②方向性；

③位置特异性；

④种属特异性

37.增强子：

是能够增强启动子转录活性的一段DNA序列，由多个元件组成，每一个元件可以与一种或多种转录调控因子结合。

38.沉默子（silencer）：

是参与基因表达负调控的一种元件（降低转录

效率的一段DNA）

平台效应：

在PCR反应后期，产物的积累按减弱的指数速率增长。

原因：

①底物浓度因消耗而降低，dNTPorprimers，掺入速度减慢；

②dNTP或酶的稳定性下降③末端产物抑制（焦磷酸、dsDNA）④非特异性竞争（非特异性引物或引物二聚体）⑤特异性产物自身复性

（＞10-8M）⑥高浓度产物下，变性不彻底。

RAPD技术：

是建立在PCR基础之上的一种可对整个未知序列的基因组进行多态性分析的分子技术。

其以基因组DNA为模板,以单个人工合

成的随机多态核苷酸序列（通常为10nt）为引物,在Taq酶作用下,进行

PCR扩增。

AFLP：

以PCR为基础，结合了RFLP、RAPD的分子标记技术。

把DNA进行限制性内切酶酶切，然后选择特定的片段进行PCR扩增（在所有的

限制性片段两端加上带有特定序列的“接头”，用与接头互补的但

3′端有3个随机选择的核苷酸的引物进行特异PCR扩增，只有那些与

3′端严格配对的片段才能得到扩增），再在有高分辨力聚丙烯酰胺凝胶电泳进行PCR产物分离分开这些扩增产物，从而产生DNA指纹，用荧光法或银染染色法均可检测之。

RT-PCR：

以反转录的cDNA作模板所进行的PCR反应，可用于测定基因

表达的强度，还可用于鉴定已转录序列是否发生突变及呈现多态性，

克隆mRNA的5'

和3'

末端序列，从非常少量的mRNA样品构建大容量的

cDNA文库。

53、松弛型质粒：

细菌细胞中质粒的数目有很大差异。

多的每个细胞里可以达几十乃至几百份拷贝，少的则只有一到几份拷贝。

高拷

39.绝缘子（insulator）：

既是基因表达的调控元件也是一种边界元件。

贝数的质粒称为松弛型质粒，有的质粒拷贝数较多，可随时复制，

绝缘子本身对基因的表达既没有正效应，也没有负效应，其作用只

是不让其他调控元件对基因的活化效应或失活效应发生作用。

40.衰减子（attenuator）:

衰减发生处的一种内部终止子序列。

衰减子结构本身不能实现衰减作用，必须借助核糖体与前导序列的结合

来发挥其作用。

41.终止子:

为转录提供终止信号的一段DNA序列，是基因表达的顺式负调控元件。

42.目的基因：

指那些已被或者准备要被分离、改造、扩增或表达

的特定基因或DNA片段。

融合基因：

是指应用DNA体外重组技术构建的一类具有来自两个或两个以上的不同基因核苷酸系列的新型基因。

报告基因：

是指编码产物能够被快速测定、常用于判断外源基因是

否成功地导入受体细胞（器官或组织），是否表达的一类特殊用途的

基因。

44、报告基因与选择基因的区别：

选择基因往往要与外界存在的筛选压力如抗生素等相互作用，以筛选出被转化的细胞；

而报告基因是提供一种快速测定外源基因是否成功导入的检测手段，它的应用

不依赖于外界选择压力的存在。

44.代表性差异分析：

利用了PCR以指数形式扩增双链模板，而以线形形式扩增单链模板的特性，设计独特的接头和引物，扣除共有序

列，以指数形式扩增特有序列，通过消减和富集，使得目的基因得到特异性扩增的一种基因克隆的方法。

48、2цm质粒：

是酿酒酵母含有一个长度为2微米的内源质粒，它

的DNA分子通常与蛋白质结合构成复合物，存在于核区。

2微米质

粒含有自主复制起始区和STB区，STB系列能够使质粒在供体细胞中维持稳定。

49、mRNA差异技术：

也是利用基因在一些组织或器官中的特异表达

的原理，将两种组织的mRNA提取出来，通过反转录和进行电泳，找

出差异的带。

50、动物生物反应器：

从转基因动物体液或血液中收获基因产物即是所谓的动物生物反应器。

51、转基因动物：

指用人工的方法将外源基因导入动物受精卵或早

期胚胎细胞，使外源基因与动物本身的基因整合，并随细胞的分裂

而增殖，从而将外源基因稳定地遗传给下一代的工程化动物。

52、原位PCR：

是指对组织、细胞中特异DNA或RNA进行扩增，然后再用原位杂交对扩增产物进行定量分析的一种方法。

不需抽提组

织细胞中的核酸，形态结构不被破坏；

与探针原位杂交相比，灵敏度一般可提高100倍左右。

反向PCR：

用已知片段内部没有的限制性内切酶切割模板DNA，再将

酶切后的DNA片段连接成环状分子，其中至少有一个环状分子含有完

整的已知片段。

根据已知片段两端的序列设计引物，可将邻近的DNA片段扩增出来。

与染色体的复制不相关，称为松弛型质粒。

55、亚克隆：

对已经获得的目的DNA片段进行重新克隆，即将已克隆的DNA片段从一载体向另一载体的转移的过程。

目的在于对目的

DNA进行进一步分析，或者进行重组改照等。

56、核酸疫苗：

核酸疫苗又称基因疫苗或DNA疫苗，是利用基因重组技术将编码抗原的基因装入载体，然后直接导入动物体内，通过

机体细胞的转录系统合成蛋白，产生的蛋白作为抗原诱导免疫系统产生免疫应答，即通过细胞和体液免疫反应产生抗体，从而达到预防和治疗疾病的目的。

基因工程疫苗：

将基因工程技术应用于疫苗生产所得的疫苗即为基

因工程疫苗。

疫苗一般是由灭活或减毒的病原体做成的可预防相应

病原物引起疾病的药物,通过接种人或动物在其体内建立抗感染免疫反应而产生保护作用.

58、基因组文库：

某种生物的全部基因组的遗传信息通过克隆载体

储存在可以长期保存的稳定的重组体中，以备需要时能够随时应用

它分离所需要的目的基因，这种含有某种生物全部基因组遗传信息的重组体即为这种生物的基因组文库。

cDNA文库：

将一种生物mRNA,经反转录产生cDNA,以cDNA构建

的克隆群体叫做该种生物的cDNA文库.。

45.复杂基因病：

不是由于某一个基因核苷酸序列的改变造成基因编码错误而引起疾病，而可能是由于基因“控制失调”所致。

基因治疗：

是向有功能缺陷的细胞补充相应功能基因，以纠正或补

偿其基因缺陷，达到治疗目的的方法。

46基因芯片：

又称DNA芯片或DNA微阵列。

即在玻片、硅片、薄膜等载体很小的基质表面上有序地、高密度地（点与点之间的距离一

般小于500цm）排列、固定了大量的靶DNA片段或寡核苷酸片段。

这些被固定的DNA分子在基质上形成的高密度DNA微阵列则称为

DNA芯片。

RDA和SSH：

RDA不能解决高丰度序列对低丰度序列富集的干扰，因此通常需要进行多轮的扣除杂交过程。

针对此缺陷，1996年,

Diachenko等人在RDA的基础上发展出了SSH技术。

SSH在保留RDA

的差减富集和动力学富集因素的同时，通过在杂交之前对cDNA的丰

度进行均一化处理，使丰度上有差别的单链cDNA相对含量基本一致，从而解决了高丰度序列对低丰度序列富集的干扰。

转座子标签技术/T-DNA标签技术：

当转座子或T-DNA转入生物基因

组,整合到染色体上的时候,有可能是插入到染色体上的某个基因中,

这时会破坏该基因的结构，从而引起表型变异，把变异个体的DNA提取出来，构建成基因组文库，再用转座子或T-DNA为模板制备探针，克隆出该突变基因，再用该突变基因作探针从野生型个体中克

隆出目的基因。

目的基因：

指那些已被或者准备要被分离、改造、

扩增或表达的特定基因或DNA片段。

Randomprimer随机引物，对于一段待测的未知序列DNA片段，往往已装载在载体上，因此待测DNA片段的两端相当于添加了已知的载体片

段。

这样就可以根据载体序列设计的通用引物测定待测DNA片段两端的序列。

Primerwalking引物步移，引物依次推进法是从目的片段（在待测片

段中若知道部分核苷酸序列）的一端开始，利用载体上的序列为依

据，设计第一次反应的反应引物进行测序，然后，依次根据前一次测序结果，设计下一次反应引物，递进测序，直至完成。

ddNTP:

与普通的dNTP不同之处在于ddNTP脱氧核糖的3’端位置的羟基缺失，它们可以在DNA聚合酶的作用下，通过DNA聚合酶其掺入到正在增长中的DNA链中，因自身脱氧核糖的3’位置的羟基缺失导致链延伸反应终止。

问答题第一章

5′→3′DNA聚合酶活性；

5’-3’DNA外切酶活性。

⑥ 反转录酶（依赖于RNA的DNApol）：

5’→3’DNA聚合酶活性

（需Mg2+）；

RNaseH活性（5’→3’及3’→5’RNA外切核酸酶活性）；

⑦末端转移酶（terminaltransferase）（DNA修饰酶）：

不依赖于模板的DNA聚合酶，在二价阳离子存在下，催化dNTP加在DNA分子的3′-OH端。

6.在分子克隆中所用的酶主要作用于哪些底物？

7、生产限制性内切酶的细菌如何保护自己的DNA不被降解？

答：

通过限制与修饰系统保护自己的DNA不被降解。

几乎所有的限

制性内切核酸酶都能和识别甲基相同DNA位点的甲基转移酶共同作

基因克隆、基因操作、基因重组、基因工程的概念及其相互联系。

用，构成限制修饰系统。

由于宿主自身DNA上的这些位点进行了修

饰，限制酶就不能进行切割。

由于外来的DNA在相应的碱基上没有

基因克隆（Genecloning）：

是指对基因进行分离和扩大繁殖等

操作过程，其目的在于获得大量的基因拷贝，在技术上主要包括载

体构建、大肠杆菌遗传转化、重组子筛选和扩大繁殖等环节。

基因工程：

是通过基因操作，将目的基因或DNA片段与合适的载体连接转入目标生物细胞，通过复制、转录、翻译外源目的基因以及

蛋白质的活性表达，使转基因生物获得新的遗传性状的操作。

基因操作：

对基因进行分离、分析、改造、检测、表达、重组和转移等操作的总称。

基因重组：

不同来源DNA分子通过共价连接（磷酸二酯键）而组合

成新的DNA分子的过程。

它们的相互关系：

基因工程是通过基因重组实现的，但基因重组并不都是严格意义上的基因工程，基因重组是基因操作范畴的概

念，包括实验研究和生物技术的基因重组事件，而基因工程则专指为实践应用而进行的重组事件。

基因操作是基因工程的技术基础；

基因克隆很多时候并不涉及遗传的改良。

1、试述基因工程技术的发展给人类带来的影响？

1、在工业领域的应用（第四次工业大革命）2、在农业领域的

应用3、在医药领域的应用（第二次医学大革命）

46、基因工程建立的理论基础合技术基础：

理论上的三大发现：

证明了生物的遗传物质是DNA（基因工程的先

导）；

DNA的双螺旋结构和半保留复制机理；

遗传信息的传递方式

（中心法则）和三联体密码子系统的建立。

技术上的三大发现：

限制性内切酶和DNA连接酶的发现；

载体的使用；

大肠杆菌转化体系的建立。

2、试述基因工程技术的发展方向？

生物的遗传改良，生物反应器、基因治疗和基因疫苗等。

3、简述基因工程的基本过程和四个基本条件？

被甲基化，宿主的限制酶通过对该位点的识别来分辨敌我，并将入侵的外来DNA分子降解掉。

所以DNA限制作用和修饰作用为细胞提供了保护。

8、按适当的顺序，列出将一种mRNA的cDNA克隆到表达载体所用到的酶有哪些？

1、反转录酶以mRNA为模板复制出单链cDNA；

2、DNA聚合酶以

单链cDNA为模板合成双链DNA；

3、S1核酸酶切割双链DNA形成平末端；

4、用限制性内切酶切割载体；

5、用DNA连接酶将cDNA插入载体。

9、某学生在用EcoRI切割外源DNA片段时出现了星号活性，分析可能的原因？

（1）高甘油含量（>

5％,v／v）；

（2）限制性内切核酸酶用量过高

（>

100U／ugDNA）；

（3）低离子强度（<

25mmol／L）；

（4）高pH（8．0以上）；

（5）含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等；

（6）有无Mg2+的二价阳离子存在（如Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等）；

（7）温度过高；

（8）反应时间过长。

10、为什么反转录酶在聚合反应中会出错？

因为反转录酶无3′→5′外切酶校正作用，聚合反应往往出错。

在高浓度的dNTP和Mn2+存在时错误率为1/500b。

11、Mn2＋、Mg2＋对DNaseI的活性有什么影响？

DNaseI在基因工程中有什么作用？

在Mg2＋存在下，独立作用于每条DNA链，且切割位点随机；

在

Mn2＋存在下，可在两条链大致同一位置切割dsDNA，产生平末端或

1～2nt突出的DNA片段。

作用：

切口平移标记时在dsDNA上产生随机切口；

在闭环DNA上引入单切口；

在DNA酶足迹法中分析蛋白

/DNA复合物；

去除RNA样品中的DNA。

11.限制性核酸内切酶BamHI和PstI切割某DNA序列，结果示于下

1、目的基因克隆；

2、载体的准备；